決明子中黃酮提取工藝單因素實驗研究

張俊

【摘 要】目的：研究不同提取條件對決明子中黃酮提取效率的影響，確定其影響程度的大小，尋找最佳提取工藝條件。方法：本實驗應用有機溶劑法，提取決明子中黃酮類化合物。結果：綜合考慮成本等因素乙醇濃度為75%，浸提溫度為80℃，料液比為1：30，提取時間為3.5h時為最佳提取工藝條件，提取率可達88.61%。

【關鍵詞】決明子；黃酮；提取

1前言

決明子別名草決明、馬蹄決明、假綠豆，是一種味甘苦、微寒的中藥，主要含黃酮類、蒽酮類及植物甾醇物質，具有抑制血清膽固醇升高和動脈粥樣硬化斑塊的作用，降血脂效果顯著[1]。

決明子中的黃酮類化合物具有許多有益的生理效應與藥理作用：抗氧化、抑制血小板凝集、抗心腦血管、抗腫瘤、抗癌等，因此越來越引起人們的重視[2]。

黃酮提取方法有很多，主要是依據黃酮化合物的來源與結構的不同，溶解性的差異。因此，應根據其水溶性和極性的大小挑選合適的溶劑來提取?，F在，對極性較大的苷元和苷類，常用些極性較大的混合溶劑進行提取。而大多數苷元采用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等極性較小的溶劑來提取。決明子中黃酮類化合物為極性較大的苷元，所以主要用有機溶劑提取法、微波提取法、生物酶法[3]等方法。本文應用有機溶劑萃取方法，提取決明子中黃酮類化合物。重點研究不同提取條件對黃酮提取效率的影響，尋找最佳提取工藝條件。

2 材料與儀器

2.1 實驗材料

決明子、蘆丁標準物質、95%乙醇、無水甲醇、丙酮、石油醚、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉。（標注：所有的有機試劑均為分析純）

2.2 儀器與設備

SHB-Ⅲ循環(huán)水時多用真空泵、HHS- 2S電子恒溫不銹鋼水浴鍋、722N可見分光光度計等。

3 實驗方法

3.1 標準溶液的配制和標準曲線制作

標準曲線繪制參照比色法測定枸杞袋泡茶中總黃酮含量的測定一文，得到蘆丁標樣含量Y（μg/mL）與吸光度A間的關系，畫出標準曲線[4] 。

3.2 決明子中黃酮平均含量的提取及測定

決明子中黃酮平均含量的提取及測定決明子黃酮類化合物的提取工藝研究一文。決明子黃酮含量可按下列公式計算：

M （%） =[Y×（100/10）×（50/2）×10×10- 6×100]/w

公式中：100/10和50/2—稀釋倍數；w—決明子重（g）。

提取率（%）=（提取黃酮含量/總黃酮的平均含量）×100% [5]。

3.3 總黃酮的提取及測定

總黃酮的提取及測定參照千山決明子總黃酮含量的測定一文，計算黃酮提取率[6]。

3.4提取溶劑的選擇

分別用沸水、堿性水溶液（pH值9.0）、75%乙醇溶液、75%甲醇溶液、75%丙酮溶液[7]，80℃水浴下，回流浸提3.0h，料液比為1：20分別提取，測定其吸光度，分別計算其提取率。

3.5 黃酮提取單因素試驗

3.5.1 乙醇濃度對浸提效果的影響

分別采用65%、75%、80%、85%、95%的乙醇濃度在80℃下，回流提取時間為3.0h，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.2 提取溫度對浸提效果的影響

分別采用50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的提取溫度以濃度為75%的乙醇為提取劑，回流提取時間為3.0h，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.3 料液比對浸提效果的影響

分別采用1：10、1：20、1：25、1：30、1：35（g：mL）的料液比例以濃度為75%的乙醇為提取劑，回流提取時間為3.0h，提取溫度為80℃時，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.4 提取時間對浸提效果的影響

分別采用1.0h、2.0h、3.0h、3.5h、4.0h的提取溫度以濃度為75%的乙醇為提取劑，提取溫度為80℃，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

4 結果與分析

4.1 蘆丁曲線制作及黃酮含量測定

蘆丁標準溶液的吸光度以510nm作為測定波長，以吸光度（A）為橫坐標，以蘆丁標準液的濃度（mg/mL）為縱坐標，來繪制其標準曲線，再用最小二乘法進行線性回歸，得到吸光度（A）和蘆丁標準溶液的濃度（Y）的回歸方程式。

用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度C與吸光度A的標準曲線回歸方程式： A=0.0115C+0.0004，相關系數R2=0.9998

4.2 提取溶劑選擇

選用不同的溶劑，按照料液比為1：20，在80℃水浴下，回流浸提3.0 h，提取黃酮，并在510 nm波長下測定其吸光值，并計算其提取率。結果見表1。

從表1可知，在提取時間，提取料液比和溫度一定的情況下，以甲醇、乙醇和丙酮作為提取劑時效果較好，且提取效率相差不大，綜合考慮沸點、毒性、成本、溶解度、環(huán)保等因素以乙醇提取劑為最佳。

4.3 單因素實驗結果

4.3.1 乙醇濃度對浸提效果的影響

實驗過程中選取乙醇提取濃度分別為65%、75%、80%、85%、95%，在80℃下，回流提取時間為3.0 h，料液比為1：20，結果見表2。

由表2可知，乙醇的體積濃度以75%最好，因此以濃度為75%的乙醇作為提取劑時，決明子中黃酮類化合物的提取率達到最高。

4.3.2 溫度對浸提效果的影響

選取60℃、70℃、80℃、90℃，4個不同提取溫度，75%的乙醇，提取時間3.0 h，料液比為1：20，結果見下表3。

由表3可知，提取溫度在60℃—80℃時，決明子中黃酮的提取率隨著溫度升高明顯增大，但溫度達到90℃，提取率略有下降。其原因是達的90℃時提取劑呈現沸騰狀，提取劑有一定損失，故選用80℃為最佳浸提溫度。

4.3.3 料液比對浸提效果的影響

選取60℃、70℃、80℃、90℃，4個不同提取溫度，其他提取條件選取75%的乙醇為提取劑，回流提取時間為3.0h，料液比為1：20，結果見下表4。

由表4可知，黃酮提取率隨乙醇提取劑量的增大而提高，但當固液比達到1：20后，提取率增大不明顯，考慮生產成本等因素，選用l：20的固液比。

4.3.4 提取時間對浸提效果的影響

提取時間 1.0h、2.0h、3.0h、3.5h、4.0h，提取劑濃度為75%，提取溫度為75℃，料液比為1：20，結果見表5。

由表5可知，提取時間在1.0 h至3.0 h時黃酮提取率增長趨勢明顯，3.0h后提取率增長幅度不明顯。可能原因是當提取時間達到一定程度后，黃酮浸出量基本達到飽和狀態(tài)，所以黃酮含量在3.0 h后沒有明顯變化，故選擇3.0 h為宜。

5 結論

決明子的最佳提取工藝為：75%乙醇，溫度80℃，時間3.5h，料液比1：30，黃酮提取率可達到88.61%，濃度為37.0μm/mL。

參考文獻：

[1]盧艷花.中藥有效成分提取分離技術[M]，北京：化學工業(yè)出版社，2005.

[2]華輝，郭勇.黃酮類化合物藥理研究進展[J]，廣東藥學，1999，9（4）：9- 12.

[3]崔介君.花生殼中黃酮成分的研究[D]，浙江工業(yè)大學，2004年.

[4]陳林.比色法測定枸杞袋泡茶中總黃酮含量的測定[J].山東醫(yī)藥工業(yè)，2003，（22）2：20- 21.

[5] 王小華，鄧斌，張曉軍，王存嫦.決明子黃酮類化合物的提取工藝研究[J].現代農業(yè)科技，2008，24：7- 11.

[6] 張?zhí)m杰，張維華，鄭紅軍.千山決明子總黃酮含量的測定[J].食品科學，2003，24（12）：101- 104.

[7]蔣捷.柚皮黃酮提取研究[D].湖南農業(yè)大學.2007年.