靈芝餅茶降脂作用研究及總三萜含量的測定

吳曉娟 汪鋆植 孫文軍 於洪建 張澤生

（1.三峽大學 醫(yī)學院，湖北 宜昌 443002；2.三峽大學 生物與制藥學院，湖北 宜昌 443002；3.天津市尖峰天然產物研究開發(fā)有限公司，天津 300457；4.天津科技大學 食品工程與生物技術學院，天津 300457）

高脂血癥（hyperlipidemia，HL）即脂質代謝紊亂，主要是指血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平過高，血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）水平過高或血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）水平過低.高脂血癥是目前公認的心血管疾病的主要危險因素，同時也是導致脂肪肝的主要病因之一.隨著人們生活方式和飲食結構的變化，高脂血癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已嚴重影響人們的健康.調整飲食，改善生活方式是防治高脂血癥的基本措施［1］，常以茶為飲品不僅可預防和改善高脂血癥，還能調節(jié)人體多種生理機能，達到降血脂，軟化血管，增強人體抵抗力等作用［2］.本研究利用茶籽餅，經靈芝發(fā)酵處理［3］，研制了靈芝餅茶，對其降脂作用進行了實驗研究，并測定了總三萜的含量為茶籽餅的綜合利用、靈芝餅茶的質量控制提供基礎.

1 材料和方法

1.1 材料

1）靈芝餅茶的制備.取干燥的茶籽餅，加入適量水拌勻，高壓滅菌，然后在超凈工作臺上接種靈芝進行發(fā)酵.將發(fā)酵好的茶籽餅制備成顆粒，烘干，包裝.

2）實驗動物.KM小鼠，雌雄各半，體重20±2g，由三峽大學動物中心提供（生產許可證；SCXK（鄂）2011－0012，使用許可證；SYXK（鄂）2011－0061）.高脂飼料、普通飼料，由三峽大學動物中心提.供辛伐他汀片（安徽永生堂藥業(yè)有限責任公司，120601）.

3）主要儀器.超凈工作臺（蘇州凈設備廠）；分光光度計（南京麒麟分析儀器有限公司），自動生化分析儀（Biosystem）.

1.2 實驗方法［4，5］

1）藥物配制.靈芝餅茶提取物加水煎煮2次，濃縮為含生藥0.6g／mL，辛伐他汀片：將辛伐他汀片碾碎加水混懸成濃度為0.4mg／mL，按人用量10倍給藥.

2）高脂飼料的制備.高脂飼料按如下比例配制：基礎飼料78.8%，蛋黃粉10%，豬油10%，膽固醇1%，膽酸納0.2%.

3）動物分組給藥.將小鼠隨機分成6組，每組10只，除空白組外，其余各組喂養(yǎng)高脂伺料造模.給藥組灌胃給予等體積不同藥物，空白組，高脂模型組灌胃給予等體積生理鹽水.各組小鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲食，12h交替照明，溫度23～25℃，濕度40%～70%.實驗期間，每周稱量各組小鼠體重，記錄飲食量，飲水量，尿量及各組小鼠體癥狀況.

4）血脂測定.所有小鼠實驗第28d停止喂養(yǎng)高脂飼料，禁食12h，第2d摘除眼球取血，離心取血清，測定總膽固醇（TC）、甘油三醋（TG）、高密度脂蛋白－膽固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白（LDL－C）濃度.

2 實驗結果與分析

2.1 靈芝餅茶提取物對高脂血癥小鼠的影響

1）靈芝餅茶提取物對高脂血癥小鼠血脂的影響結果見表1.

表1 靈芝餅茶提取物對高脂血癥小鼠血脂的影響（x±s，n＝10）

表1顯示，靈芝餅茶提取物組高、低劑量組均能不同程度降低血脂.高劑量組與模型組比較總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL－C）濃度差異有顯著性（P＜0.01）.低劑量組與模型組比較TC、LDL－C濃度差異有顯著性（P＜0.05）.高、低劑量組均能提高密度脂蛋白比例.

2）靈芝餅茶提取物對高脂血癥小鼠體重的影響見表2.表2顯示，靈芝餅茶提取物組高、低劑量組均能不同程度的抑制高脂飼料引起的小鼠體重增加，與模型組比較差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）.

表2 靈芝餅茶提取物對高脂血癥小鼠體重的影響（x±s，n＝10）

2.2 靈芝餅茶中總三萜含量的測定［6，7］

1）標準曲線繪制.精密稱量2mg對照品靈芝酸A于10mL容量瓶用2mL的甲醇溶解，后用甲醇定容至10mL，搖勻作為母液.分別精密量取對照品母液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于試管中，水浴揮干溶劑，殘渣加入0.2mL香草醛－冰乙酸（5%，w／v）和0.8mL的高氯酸，70℃水浴10min，冷卻后加入2mL冰乙酸，在λmax＝534nm處測量吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得標準曲線方程為：y＝0.003 0x＋0.239 5，R＝0.999 6.

2）樣品測定.稱取靈芝餅茶3份，每份2g，加50 mL 95%的乙醇靜提2d，減壓濃縮至10mL，石油醚脫酯后，分別取1mL至4mLEP管中，水浴揮干溶劑，后加入0.2mL香草醛－冰乙酸（5%，w／v）和0.8 mL的高氯酸，取5μl稀釋至10mL.按標準曲線繪制項下依法操作，測定吸光度，根據(jù)標準曲線方程計算靈芝餅茶中總三萜含量.結果以靈芝酸A計，靈芝餅茶總三萜的平均含量為1.5%，結果見表3.

精密度、重復性、加樣回收率實驗滿足測定要求.

表3 靈芝餅茶總三萜的含量測定結果

3 討 論

茶籽餅是茶籽經過榨油后剩下的餅粕.我國每年生產油茶籽100多萬t，生產加工茶籽油后，產生70多萬t副產品茶籽餅，而大部分茶籽餅沒被充分利用，造成了很大的資源浪費.茶籽餅中含有茶皂素、丹寧、黃酮、咖啡堿、蛋白質等多種成分，對茶籽餅進行綜合利用，提高附加值，具有十分重要的社會、經濟價值［8，9］.因此，針對目前茶籽餅利用不充分的現(xiàn)狀，對茶籽餅進行了綜合利用研究.利用茶籽餅，經靈芝發(fā)酵，制成了靈芝餅茶.茶籽餅經靈芝發(fā)酵，既改善了口感，又提高了活性成分含量，為更好的利用茶籽餅資源提供了條件.

導致高脂血癥的原因是由于進食含脂肪和膽固醇類食物過多，脂類代謝紊亂，或因脂類產生過多，或因其降解或轉運發(fā)生障礙都可造成高脂血癥.調整飲食，改善生活方式是防治高脂血癥的基本措施，本研究以茶籽餅為原料，研制符合我國飲食習慣的功能食品，具有良好的應用前景.本實驗以高脂飼料建立實驗性高脂血癥小鼠模型，研究靈芝餅茶提取物對血脂的影響.結果表明，靈芝餅茶提取物能有效降低高脂血癥小鼠血清中TC、TG、LDL－C含量，這對調節(jié)脂類代謝，預防動脈粥樣硬化等疾病具有積極作用.值得進一步研究應用.此外，本實驗測定了總三萜含量，為靈芝餅茶的質量控制提供了依據(jù).研究還發(fā)現(xiàn)，靈芝餅茶提取物除降低血脂之外，小鼠體重也明顯減輕，這對于肥胖型的高脂血癥尤為有益.但靈芝餅茶提取物降血脂作用機制以及有效組分有待進一步研究.

［1］ 曾 鋒.高脂血癥的預防與治療［J］.中國實用醫(yī)藥，2013，8（3）：86－87.

［2］ 張冬英，劉仲華，施兆鵬，等.高通量篩選法對普洱茶降血糖血脂作用的研究［J］.茶葉科學，2005，26（1）：49－53.

［3］ 唐粉芳，郭 豫，張 靜.靈芝菌絲體降脂作用的實驗研究［J］.食品科學，2003，24（4）：145－149.

［4］ 邵元龍，董 英.芝麻餅粕發(fā)酵提取物對小鼠高脂血癥的預防作用研究［J］.中國食品學報，2010，10（1）：31－34.

［5］ 康文藝，李曉梅，郭曙光.山楂提取物不同部位體內降血脂作用［J］.中成藥，2009，31（9）：1342－1345.

［6］ 王 倩，郭志勇，鄒 坤.吉祥草根莖化學成分研究［J］.三峽大學學報：自然科學版，2012，34（1）：82－84.

［7］ 江紹琳，江紹玫，曾令聰.分光光度法快速測定靈芝中總三萜含量［J］.江西農業(yè)大學學報，2006，28（4）：634－636.

［8］ 劉玲玲，李慶松，曾 亮，等.茶籽餅中茶皂素提取工藝研究［J］.糧食與食品工業(yè)，2010，17（4）：17－22.

［9］ Lee H B，Kim E K，Park S J，et al.Isolation and Characterization of Nicotiflorin Obtained by Enzymatic Hydrolysis of Two Precursors in Tea Seed Extract ［J］.J Agric Food Chem，2010，58（8）：4808－4813.