大黃魚中硫磺素T殘留的HPLC分析

沙鷗等

摘要：建立了反相高效液相色譜法測(cè)定染色大黃魚（Pseudosciaena crocea）中非法添加色素硫磺素T含量的方法。樣品經(jīng)超聲水溶液提取，采用Eclipse XDB-C18色譜柱，以甲醇-0.05%（V/V）甲酸為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為410 nm，外標(biāo)法測(cè)定硫磺素T。結(jié)果表明，硫磺素T在0.40～65.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9 994），檢出限為0.02 mg/L（S/N=3），3個(gè)濃度水平下的加標(biāo)回收率為91.0%～98.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為1.21%～2.26%。

關(guān)鍵詞：大黃魚（Pseudosciaena crocea）；硫磺素T；高效液相色譜法；測(cè)定

中圖分類號(hào)：O652.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）16-3910-02

Abstract： A HPLC method was developed for detecting thioflavin T in Pseudosciaena crocea. Sample was added in water and treated with ultrasonic extraction. The thioflavin T was analyzed with Eclipse XDB-C18 column and detected at 410 nm， with a mobile phase of methanol-0.05%（V/V） formic acid solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The linearity was obtained in the range of 0.40～65.0 mg/L （R2=0.9 994）. The determination limit （S/N=3） was 0.02 mg/L. The recovery of three different concentration were in the range of 91.0%～98.6%. RSD （n=6） was in the range of 1.12%～2.26%.

Key words： Pseudosciaena crocea； thioflavin T； HPLC； determination

黃魚有大黃魚（Pseudosciaena crocea）與小黃魚（Psendosciaena polyactis）之分，又名黃花魚。黃魚中含有豐富的微量元素、蛋白質(zhì)和維生素，深受消費(fèi)者青睞。由于黃魚的保鮮期短，其產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于需求量，因此黃魚價(jià)格一直居高不下，尤其是大黃魚，價(jià)格都在幾十元1 kg，這導(dǎo)致“黃魚造假”情況時(shí)有發(fā)生。目前市售黃魚造假主要以染色黃魚為主，如染色白姑魚和三牙魚等，也有不法商販將品質(zhì)較差的黃魚染色后冒充野生黃魚，以獲得高額利潤(rùn)。據(jù)市場(chǎng)調(diào)研及報(bào)紙報(bào)道，目前向“偽黃魚”或黃魚中添加的染料主要為黃色化工染料或人工黃色合成色素[1-6]。

硫磺素T又稱堿性黃1，為芳香胺類堿性工業(yè)染料[7]，常用于生化研究中生物組織學(xué)染色，該類染料水溶性好，水溶液呈黃色，對(duì)生物染色快且效果好，但嚴(yán)禁將其作為食品添加劑使用，部分商販以硫磺素T對(duì)黃魚染色。目前，硫磺素T的高效液相色譜檢測(cè)分析方法少見報(bào)道。市售“偽黃魚”中非法添加的硫磺素T，作為一個(gè)新型潛在食品安全風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，建立和完善相應(yīng)的分析方法，可為該類產(chǎn)品質(zhì)量控制、食品安全執(zhí)法管理提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

市購(gòu)大黃魚；硫磺素T（純度：95.8%），購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)有限公司。

1.2 儀器與試劑

1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫），配紫外-可見可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6×150 mm，5 μm）；UV-2501紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）；MiliQ Biocel超純水機(jī)（美國(guó)默克密理博）。

甲醇（色譜純）；其他試劑均為分析純，去離子水；所用玻璃器皿均在使用前用稀HNO3溶液浸泡24 h，并用去離子水洗滌3次以上，晾干。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理 由于硫磺素T為水溶性色素，因此直接向染色黃魚中加入蒸餾水，進(jìn)行超聲提取，30 ℃提取10 min，再加甲醇稀釋，經(jīng)醇沉淀蛋白，提取液過(guò) 0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3.2 色譜條件 色譜柱為Eclipse XDB-C18；流動(dòng)相A為0.05%（V/V）甲酸溶液，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫，洗脫條件為：0～4 min流動(dòng)相A由70%降至50%，4～6 min流動(dòng)相A 50%保持2 min，6～10 min 流動(dòng)相A由50%升至70%，柱溫30 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)410 nm；進(jìn)樣量20 μL；流速1.0 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)

在200～600 nm測(cè)定硫磺素T的吸光度，結(jié)果如圖2所示。硫磺素T的最大吸收波長(zhǎng)為410 nm處，在該條件下，干擾較小，且可獲得較高的靈敏度，故選擇410 nm作為硫磺素T的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 樣品分析

在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間為6.1 min，出峰時(shí)間較快，峰形對(duì)稱（圖3），樣品中硫磺素T的拖尾因子符合規(guī)定，分離度大于1.5。

取0.4～45.0 mg/L范圍內(nèi)的硫磺素T標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)溶液質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=54.29x-153.7，在0.4～45.0 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，R2= 0.999 4，檢出限為0.02 mg/L（S/N=3）。endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標(biāo)準(zhǔn)溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個(gè)濃度測(cè)定6個(gè)平行樣品，測(cè)定結(jié)果見表1。表1結(jié)果表明，硫磺素T在3個(gè)添加水平下的加標(biāo)回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性是方法可靠性評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，是指在重復(fù)性條件下，測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號(hào)樣品浸提液，平行6次，測(cè)定結(jié)果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的3個(gè)批次染色黃魚樣品進(jìn)行高效液相色譜分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結(jié)論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動(dòng)性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)410 nm；進(jìn)樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對(duì)樣品的前處理只需超聲提取，簡(jiǎn)單快速，出峰時(shí)間短，準(zhǔn)確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張 倩. 怎么鑒別黃魚染沒(méi)染色[J]. 吉林農(nóng)業(yè)（下半月）2012 （2）：29.

[2] 寧德市質(zhì)監(jiān)局. 寧德市質(zhì)監(jiān)局打擊“對(duì)大黃魚注水，染色”行為[J]. 福建質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督，2009（3）： 33.

[3] 李永剛， 劉 瀟， 陳 明， 等. 液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)黃魚中的堿性橙、堿性嫩黃和酸性橙Ⅱ[J]. 公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，24（2）： 97-98.

[4] 郝鳳桐. 魚“被美容”[J]. 飲食科學(xué)，2011（5）：11.

[5] GUI WJ， XU Y， SHOU L F， et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry，2010，122（4）：1230-1234.

[6] 薛仔改. 淺談食用色素的安全問(wèn)題[J].現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測(cè)方法[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（32）： 15908-15910.

（責(zé)任編輯 周有祥）endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標(biāo)準(zhǔn)溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個(gè)濃度測(cè)定6個(gè)平行樣品，測(cè)定結(jié)果見表1。表1結(jié)果表明，硫磺素T在3個(gè)添加水平下的加標(biāo)回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性是方法可靠性評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，是指在重復(fù)性條件下，測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號(hào)樣品浸提液，平行6次，測(cè)定結(jié)果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的3個(gè)批次染色黃魚樣品進(jìn)行高效液相色譜分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結(jié)論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動(dòng)性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)410 nm；進(jìn)樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對(duì)樣品的前處理只需超聲提取，簡(jiǎn)單快速，出峰時(shí)間短，準(zhǔn)確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測(cè)定。

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[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測(cè)方法[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（32）： 15908-15910.

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2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標(biāo)準(zhǔn)溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個(gè)濃度測(cè)定6個(gè)平行樣品，測(cè)定結(jié)果見表1。表1結(jié)果表明，硫磺素T在3個(gè)添加水平下的加標(biāo)回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性是方法可靠性評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，是指在重復(fù)性條件下，測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號(hào)樣品浸提液，平行6次，測(cè)定結(jié)果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的3個(gè)批次染色黃魚樣品進(jìn)行高效液相色譜分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結(jié)論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動(dòng)性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)410 nm；進(jìn)樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對(duì)樣品的前處理只需超聲提取，簡(jiǎn)單快速，出峰時(shí)間短，準(zhǔn)確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測(cè)定。

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[3] 李永剛， 劉 瀟， 陳 明， 等. 液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)黃魚中的堿性橙、堿性嫩黃和酸性橙Ⅱ[J]. 公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，24（2）： 97-98.

[4] 郝鳳桐. 魚“被美容”[J]. 飲食科學(xué)，2011（5）：11.

[5] GUI WJ， XU Y， SHOU L F， et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry，2010，122（4）：1230-1234.

[6] 薛仔改. 淺談食用色素的安全問(wèn)題[J].現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測(cè)方法[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（32）： 15908-15910.

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