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    響應(yīng)面法優(yōu)化金針菇菌糠多糖提取工藝

    2014-10-20 17:35:39張良等
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年16期
    關(guān)鍵詞:金針菇多糖

    張良等

    摘要:為了優(yōu)化金針菇(Flammulina velutiper Sing)菌糠多糖的提取工藝,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理對(duì)提取時(shí)間、水料比、提取溫度進(jìn)行三因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì),采用響應(yīng)面軟件Design-Expert進(jìn)行處理,得到金針菇菌糠多糖的最佳提取條件為:提取溫度95 ℃,水料比15∶1,提取4.26 h,此條件下提取的多糖含量為13.704 mg/mL,與預(yù)測(cè)值13.320 mg/mL十分接近,表明該模型可行。

    關(guān)鍵詞:金針菇(Flammulina velutiper Sing);菌糠;多糖;響應(yīng)面分析法

    中圖分類(lèi)號(hào):Q53;S646.1+5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2014)16-3886-04

    Abstract: Single-factor experiments and Box-Behnken central composite design were used to optimize the extraction of polysaccharides from waste materials of mushroom. The three factors and three levels including the extraction time, water-material ratio, extraction temperature of the experiment were designed. Response surface processing Design-Expert software was used. Results showed that optimal extraction conditions were temperature of 95 ℃, water-material ratio 15:1, time of 4.26 h. This condition could obtain 13.704 mg/mL polysaccharide, close to the predicting result of 13.320 mg/mL, proving that the model was feasible.

    Key words:mushroom; waste material; polysaccharide; response surface analysis method

    金針菇(Flammulina velutiper Sing)屬傘菌目白蘑科金針菇屬, 其味道清新淡雅,營(yíng)養(yǎng)豐富,是拌涼菜和火鍋的上好食材。從金針菇中提取的多糖具有增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫活性[1]的作用,可以抗腫瘤、抗白血病[2],并且在體外有較好的抗氧化活性[3]。經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的金針菇多糖對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有抑菌活性[4]。除此之外,動(dòng)物試驗(yàn)說(shuō)明對(duì)特定類(lèi)型的記憶障礙,其治療效果與腦復(fù)新相當(dāng)[5]。一些學(xué)者對(duì)真菌中提取的多糖做了大量研究,但是鮮見(jiàn)有從金針菇菌糠中提取多糖的報(bào)道[6-8]。

    本試驗(yàn)主要研究提取溫度、水料比和提取時(shí)間對(duì)金針菇多糖提取量的影響,并且應(yīng)用響應(yīng)面法對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,以獲得金針菇多糖提取的最佳條件,為大規(guī)模工業(yè)提取提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    金針菇菌糠;葡萄糖、濃硫酸、苯酚,以上皆為分析純?cè)噭?/p>

    1.2 儀器與設(shè)備

    電熱鼓風(fēng)干燥箱;分光光度計(jì);水浴鍋;電子天平;高速離心機(jī)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 原料預(yù)處理 將圓柱狀的金針菇菌糠掰碎至花生大小,然后放入鼓風(fēng)干燥箱中,在60 ℃的條件下烘干至恒重。粉碎,過(guò)20目篩存放至干燥處備用。

    1.3.2 金針菇多糖提取及檢測(cè)過(guò)程 菌糠→不同條件下浸提→離心后取上清液→上清液稀釋20倍后取1 mL→加入0.5 mL 6%的苯酚試劑和2.5 mL的濃硫酸試劑→搖勻→靜置20 min→在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。

    1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖20 mg于500 mL容量瓶中,加水至刻度,分別吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL,以去離子水補(bǔ)至1.0 mL,然后加入6%苯酚0.5 mL及濃硫酸2.5 mL,搖勻冷卻,室溫放置20 min后于490 nm處測(cè)吸光度,以1.0 mL去離子水作為空白,橫坐標(biāo)為葡萄糖濃度,縱坐標(biāo)為吸光度,結(jié)果見(jiàn)圖1。

    1.3.4 單因素試驗(yàn)

    1)提取時(shí)間。精確稱(chēng)取10 g金針菇菌糠于250 mL錐形瓶中,加入200 mL去離子水,搖勻至菌糠全部濕潤(rùn),然后分別在95 ℃的條件下加熱1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 h,冷卻,于3 000 r/min的條件下離心5 min,取上清液,稀釋20倍后取1 mL,分別加入6%的苯酚0.5 mL及濃硫酸2.5 mL,搖勻冷卻,室溫放置20 min后在490 nm處測(cè)吸光度,對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得多糖含量。

    2)水料比。精確稱(chēng)取5 g金針菇菌糠,分別按照10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1、45∶1的水料比(V/m,mL∶g,下同)加去離子水,搖勻至菌糠全部潤(rùn)濕,95 ℃水浴4 h,測(cè)多糖含量。

    3)提取溫度。精確稱(chēng)取10 g金針菇菌糠于250 mL錐形瓶中,加入200 mL去離子水,搖勻至菌糠完全潤(rùn)濕,然后分別在65、70、75、80、85、90、95 ℃條件下水浴4 h,測(cè)多糖含量。

    1.3.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果,分別選取對(duì)多糖提取量有顯著影響的溫度、水料比、時(shí)間, 應(yīng)用三水平三因素的響應(yīng)面分析方法進(jìn)行試驗(yàn)。因素與水平見(jiàn)表1。endprint

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1 提取時(shí)間對(duì)多糖含量的影響 由圖2可知,開(kāi)始時(shí),隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),多糖的含量處于上升的趨勢(shì),提取時(shí)間為3.5~4.0 h時(shí),多糖含量達(dá)到最高。其后,隨著提取時(shí)間的增加,多糖含量由于水解作用反而降低,故提取時(shí)間選擇4.0 h。

    2.1.2 水料比對(duì)多糖含量的影響 由圖3可知,隨著水比例的增加,多糖含量呈先升高后降低的趨勢(shì),勢(shì),在水料比為15∶1時(shí)多糖含量達(dá)到最高,故選擇水料比為15∶1。

    2.1.3 提取溫度對(duì)多糖含量的影響 由圖4可知,隨著提取溫度的升高,提取液中的多糖含量不斷上升,當(dāng)提取溫度升至85~95 ℃時(shí),多糖含量上升幅度趨于平緩。但過(guò)高的溫度可以使水分蒸發(fā)過(guò)多,有可能使多糖水解導(dǎo)致含量下降,所以溫度不宜超過(guò)95 ℃。

    2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

    對(duì)金針菇多糖的提取工藝進(jìn)行響應(yīng)面分析,試驗(yàn)方案和結(jié)果見(jiàn)表2。

    2.2.1 各因素間的相互影響 采用相應(yīng)軟件Design-Expert進(jìn)行響應(yīng)面處理。將表2的試驗(yàn)結(jié)果輸入軟件后可以得到時(shí)間-水料比、時(shí)間-溫度、溫度-水料比的相互關(guān)系圖。

    從圖2至圖4中可以看出,水料比是影響提取多糖含量的最大因素,時(shí)間和溫度對(duì)提取含量的的影響程度相近。

    2.2.2 最佳條件確定 從Design-Expert軟件中可以得到回歸方程:R=118.625 20+26.671 02X1-1.356 82X2-3.374 60X3-0.082 830X1X2-0.036 813 X1X3-0.003 94X2X3-2.574 49X12+0.036 728X22+0.020 640X32,通過(guò)軟件求偏微分方程得到最佳條件為:提取時(shí)間4.26 h,溫度95 ℃,水料比15∶1。為驗(yàn)證用響應(yīng)面優(yōu)化后的最佳提取條件是否可靠,采用以上試驗(yàn)條件進(jìn)行提取,得到的產(chǎn)物中多糖含量為13.704 mg/mL,與預(yù)測(cè)值13.320 mg/mL十分接近,表明該模型可行。因此用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的最佳提取條件具有實(shí)用價(jià)值。

    3 結(jié)論

    通過(guò)對(duì)金針菇菌糠多糖提取溫度、水料比、時(shí)間三個(gè)條件的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),并且針對(duì)這三個(gè)因素三水平的響應(yīng)面進(jìn)行分析,得到金針菇菌糠多糖的最佳提取工藝為:提取溫度95 ℃,提取時(shí)間4.26 h,提取水料比15∶1,此時(shí)多糖含量為13.704 mg/mL。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 王玉峰,王 旻,尹鴻萍.金針菇菌絲體中多糖的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及免疫學(xué)活性[J].中國(guó)天然藥物,2008,6(4):312-315.

    [2] 苗立成,王立強(qiáng),吳 迪.金針菇多糖對(duì)小鼠抗腫瘤及抗白血病效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,19(3):171-173.

    [3] 葉 敏.金針菇多糖的提取及清除羥自由基活性研究[J].畢節(jié)學(xué)院學(xué)報(bào)(綜合版),2011,29(4):90-94.

    [4] 劉 瑩,許 琳,趙 杰.金針菇多糖衍生物的制備及其抗菌性的測(cè)定[J].食品工業(yè)科技,2013,34(6):137-139.

    [5] 鄒 宇,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對(duì)記憶障礙模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2010(1):26-30.

    [6] 馬壽福,軍 花,刁治民,等.食用菌菌糠營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及利用途徑的研究[J].青海草業(yè),2006,15(3):36-40.

    [7] 王永軍,田秀娥,李浩波.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與開(kāi)發(fā)利用[J].中國(guó)飼料,2001(12):30-31.

    [8] 劉曉牧,王中華,李福昌,等.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其應(yīng)用飼料與畜牧[J].飼料與畜牧,2000,8(6):12-13.

    (責(zé)任編輯 龍小玲)endprint

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1 提取時(shí)間對(duì)多糖含量的影響 由圖2可知,開(kāi)始時(shí),隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),多糖的含量處于上升的趨勢(shì),提取時(shí)間為3.5~4.0 h時(shí),多糖含量達(dá)到最高。其后,隨著提取時(shí)間的增加,多糖含量由于水解作用反而降低,故提取時(shí)間選擇4.0 h。

    2.1.2 水料比對(duì)多糖含量的影響 由圖3可知,隨著水比例的增加,多糖含量呈先升高后降低的趨勢(shì),勢(shì),在水料比為15∶1時(shí)多糖含量達(dá)到最高,故選擇水料比為15∶1。

    2.1.3 提取溫度對(duì)多糖含量的影響 由圖4可知,隨著提取溫度的升高,提取液中的多糖含量不斷上升,當(dāng)提取溫度升至85~95 ℃時(shí),多糖含量上升幅度趨于平緩。但過(guò)高的溫度可以使水分蒸發(fā)過(guò)多,有可能使多糖水解導(dǎo)致含量下降,所以溫度不宜超過(guò)95 ℃。

    2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

    對(duì)金針菇多糖的提取工藝進(jìn)行響應(yīng)面分析,試驗(yàn)方案和結(jié)果見(jiàn)表2。

    2.2.1 各因素間的相互影響 采用相應(yīng)軟件Design-Expert進(jìn)行響應(yīng)面處理。將表2的試驗(yàn)結(jié)果輸入軟件后可以得到時(shí)間-水料比、時(shí)間-溫度、溫度-水料比的相互關(guān)系圖。

    從圖2至圖4中可以看出,水料比是影響提取多糖含量的最大因素,時(shí)間和溫度對(duì)提取含量的的影響程度相近。

    2.2.2 最佳條件確定 從Design-Expert軟件中可以得到回歸方程:R=118.625 20+26.671 02X1-1.356 82X2-3.374 60X3-0.082 830X1X2-0.036 813 X1X3-0.003 94X2X3-2.574 49X12+0.036 728X22+0.020 640X32,通過(guò)軟件求偏微分方程得到最佳條件為:提取時(shí)間4.26 h,溫度95 ℃,水料比15∶1。為驗(yàn)證用響應(yīng)面優(yōu)化后的最佳提取條件是否可靠,采用以上試驗(yàn)條件進(jìn)行提取,得到的產(chǎn)物中多糖含量為13.704 mg/mL,與預(yù)測(cè)值13.320 mg/mL十分接近,表明該模型可行。因此用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的最佳提取條件具有實(shí)用價(jià)值。

    3 結(jié)論

    通過(guò)對(duì)金針菇菌糠多糖提取溫度、水料比、時(shí)間三個(gè)條件的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),并且針對(duì)這三個(gè)因素三水平的響應(yīng)面進(jìn)行分析,得到金針菇菌糠多糖的最佳提取工藝為:提取溫度95 ℃,提取時(shí)間4.26 h,提取水料比15∶1,此時(shí)多糖含量為13.704 mg/mL。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 王玉峰,王 旻,尹鴻萍.金針菇菌絲體中多糖的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及免疫學(xué)活性[J].中國(guó)天然藥物,2008,6(4):312-315.

    [2] 苗立成,王立強(qiáng),吳 迪.金針菇多糖對(duì)小鼠抗腫瘤及抗白血病效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,19(3):171-173.

    [3] 葉 敏.金針菇多糖的提取及清除羥自由基活性研究[J].畢節(jié)學(xué)院學(xué)報(bào)(綜合版),2011,29(4):90-94.

    [4] 劉 瑩,許 琳,趙 杰.金針菇多糖衍生物的制備及其抗菌性的測(cè)定[J].食品工業(yè)科技,2013,34(6):137-139.

    [5] 鄒 宇,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對(duì)記憶障礙模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2010(1):26-30.

    [6] 馬壽福,軍 花,刁治民,等.食用菌菌糠營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及利用途徑的研究[J].青海草業(yè),2006,15(3):36-40.

    [7] 王永軍,田秀娥,李浩波.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與開(kāi)發(fā)利用[J].中國(guó)飼料,2001(12):30-31.

    [8] 劉曉牧,王中華,李福昌,等.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其應(yīng)用飼料與畜牧[J].飼料與畜牧,2000,8(6):12-13.

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    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1 提取時(shí)間對(duì)多糖含量的影響 由圖2可知,開(kāi)始時(shí),隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),多糖的含量處于上升的趨勢(shì),提取時(shí)間為3.5~4.0 h時(shí),多糖含量達(dá)到最高。其后,隨著提取時(shí)間的增加,多糖含量由于水解作用反而降低,故提取時(shí)間選擇4.0 h。

    2.1.2 水料比對(duì)多糖含量的影響 由圖3可知,隨著水比例的增加,多糖含量呈先升高后降低的趨勢(shì),勢(shì),在水料比為15∶1時(shí)多糖含量達(dá)到最高,故選擇水料比為15∶1。

    2.1.3 提取溫度對(duì)多糖含量的影響 由圖4可知,隨著提取溫度的升高,提取液中的多糖含量不斷上升,當(dāng)提取溫度升至85~95 ℃時(shí),多糖含量上升幅度趨于平緩。但過(guò)高的溫度可以使水分蒸發(fā)過(guò)多,有可能使多糖水解導(dǎo)致含量下降,所以溫度不宜超過(guò)95 ℃。

    2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

    對(duì)金針菇多糖的提取工藝進(jìn)行響應(yīng)面分析,試驗(yàn)方案和結(jié)果見(jiàn)表2。

    2.2.1 各因素間的相互影響 采用相應(yīng)軟件Design-Expert進(jìn)行響應(yīng)面處理。將表2的試驗(yàn)結(jié)果輸入軟件后可以得到時(shí)間-水料比、時(shí)間-溫度、溫度-水料比的相互關(guān)系圖。

    從圖2至圖4中可以看出,水料比是影響提取多糖含量的最大因素,時(shí)間和溫度對(duì)提取含量的的影響程度相近。

    2.2.2 最佳條件確定 從Design-Expert軟件中可以得到回歸方程:R=118.625 20+26.671 02X1-1.356 82X2-3.374 60X3-0.082 830X1X2-0.036 813 X1X3-0.003 94X2X3-2.574 49X12+0.036 728X22+0.020 640X32,通過(guò)軟件求偏微分方程得到最佳條件為:提取時(shí)間4.26 h,溫度95 ℃,水料比15∶1。為驗(yàn)證用響應(yīng)面優(yōu)化后的最佳提取條件是否可靠,采用以上試驗(yàn)條件進(jìn)行提取,得到的產(chǎn)物中多糖含量為13.704 mg/mL,與預(yù)測(cè)值13.320 mg/mL十分接近,表明該模型可行。因此用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的最佳提取條件具有實(shí)用價(jià)值。

    3 結(jié)論

    通過(guò)對(duì)金針菇菌糠多糖提取溫度、水料比、時(shí)間三個(gè)條件的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),并且針對(duì)這三個(gè)因素三水平的響應(yīng)面進(jìn)行分析,得到金針菇菌糠多糖的最佳提取工藝為:提取溫度95 ℃,提取時(shí)間4.26 h,提取水料比15∶1,此時(shí)多糖含量為13.704 mg/mL。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 王玉峰,王 旻,尹鴻萍.金針菇菌絲體中多糖的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及免疫學(xué)活性[J].中國(guó)天然藥物,2008,6(4):312-315.

    [2] 苗立成,王立強(qiáng),吳 迪.金針菇多糖對(duì)小鼠抗腫瘤及抗白血病效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2003,19(3):171-173.

    [3] 葉 敏.金針菇多糖的提取及清除羥自由基活性研究[J].畢節(jié)學(xué)院學(xué)報(bào)(綜合版),2011,29(4):90-94.

    [4] 劉 瑩,許 琳,趙 杰.金針菇多糖衍生物的制備及其抗菌性的測(cè)定[J].食品工業(yè)科技,2013,34(6):137-139.

    [5] 鄒 宇,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對(duì)記憶障礙模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2010(1):26-30.

    [6] 馬壽福,軍 花,刁治民,等.食用菌菌糠營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及利用途徑的研究[J].青海草業(yè),2006,15(3):36-40.

    [7] 王永軍,田秀娥,李浩波.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與開(kāi)發(fā)利用[J].中國(guó)飼料,2001(12):30-31.

    [8] 劉曉牧,王中華,李福昌,等.菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其應(yīng)用飼料與畜牧[J].飼料與畜牧,2000,8(6):12-13.

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