乙醇對實驗大鼠精漿生化指標(biāo)的相關(guān)性影響研究

陳杰翔　李利

【摘要】 目的：建立慢性飲酒實驗大鼠模型，測定精漿生化（α-葡萄糖苷酶、酸性磷酸酶、精漿果糖、精漿鋅）的含量變化，探討不同酒精含量對大鼠精漿生化的影響。方法：將40只健康雄性成年SD大鼠隨機(jī)分為四組，其中對照組給予蒸餾水灌胃，酒精組分別給予無水酒精0.5 g/（kg·d）、2.5 g/（kg·d）、5 g/（kg·d）灌胃，連續(xù)20周。測定各組實驗大鼠精漿生化（α-葡萄糖苷酶、酸性磷酸酶、精漿果糖、精漿鋅）的含量變化。結(jié)果：各酒精組實驗大鼠精漿生化指標(biāo)均明顯低于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；而中、高劑量組實驗大鼠精漿生化指標(biāo)均明顯低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：酒精可影響雄性實驗大鼠附屬性腺的功能，導(dǎo)致雄性實驗大鼠生殖系統(tǒng)損害，其中，中、高劑量乙醇的影響大于低劑量乙醇。

【關(guān)鍵詞】 慢性飲酒； 精液分析； 精漿生化

【Abstract】 Objective：To establish experimental rat model of chronic ethanol ingestion and measure seminal plasma biochemistry （α-glucosidase，acid phosphatase，seminal fructose，seminal zinc） content，and to explore the effects of different alcohol content of seminal plasma biochemical rats.Method：40 healthy Sprague-Dawley adult male rats were randomly divided into four groups.The control group was given distilled water，different doses of alcohol 0.5 g/（kg·d），2.5 g/（kg·d），5 g/（kg·d） were administrated to the rats of alcohol group for 20 weeks by gavage.The content change of seminal plasma biochemistry （α-glucosidase，acid phosphatase，seminal fructose，seminal zinc） in all experimental rats were determined.Result：Seminal plasma biochemical indicators of each alcohol group rats was significantly lower than the control group，the differences were statistically significant（P<0.01）.While seminal plasma biochemical indicators of the high-dose group were significantly lower than the low-dose rats group，the differences were statistically significant（P<0.05 or P<0.01）.Conclusion：Alcohol can affect the function of the male accessory gland in rats，cause the reproductive system damage of male experimental rat，among them，the effect of high dose of ethanol is greater than that of low doses of ethanol.

【Key words】 Chronic ethanol ingestion； Semen analysis； Seminal plasma biochemistry

First-authors address：Affiliated Hospital of Luzhou Medical College，Luzhou 646000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.25.006

飲酒是當(dāng)今世界一個重要的公共衛(wèi)生問題，它不僅危害社會治安，更嚴(yán)重影響人體健康。我國是酒精及其飲品的消費(fèi)大國，自20世紀(jì)90年代以來，我國酒類消費(fèi)急劇增加，城鎮(zhèn)居民成人飲酒率達(dá)到了40.1%～60%，飲酒相關(guān)問題已經(jīng)嚴(yán)重影響我國居民的身心健康。為提高人類生活質(zhì)量和優(yōu)生優(yōu)育，研究酒精對人類的生殖毒性具有重要意義[1]。本研究通過建立不同劑量的飲酒大鼠模型，觀察酒精對大鼠精漿生化的影響，為拓寬男性不育的診斷及治療措施提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性清潔級Sprague-Dawley大鼠40只，8周齡，體質(zhì)量（210±20）g，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。飼養(yǎng)過程中，雄性大鼠均自由采食、飲水，每天早中晚3次喂食換水，保證充足的水、食物供應(yīng)，籠中保持清潔。環(huán)境溫度20～25 ℃，日照時間12 h。

1.2 實驗方法

1.2.1 精漿α-葡萄糖苷酶含量檢測 采用葡萄糖氧化酶法，測定試劑盒購自南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司，按照說明書進(jìn)行檢測。

1.2.2 精漿酸性磷酸酶含量檢測 采用磷酸苯二鈉法，測定試劑盒購自南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司，按照說明書進(jìn)行檢測。endprint

1.2.3 精漿果糖含量檢測 采用間苯二酚法，測定試劑盒購自南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司，按照說明書進(jìn)行檢測。

1.2.4 精漿鋅含量檢測 采用比色法，測定試劑盒購自南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司，按照說明書進(jìn)行檢測。

1.2.5 模型制備 將雄性大鼠隨機(jī)分為四組，每組10只，對照組給予5 g/（kg·d）蒸餾水、低劑量酒精組給予無水酒精0.5 g/（kg·d）、中劑量酒精組給予無水酒精2.5 g/（kg·d）、高劑量酒精組給予無水酒精5 g/（kg·d）灌胃，連續(xù)20周。

1.2.6 標(biāo)本處理及采集 末次灌胃24 h后采用頸椎脫臼法將大鼠處死，取大鼠精囊中精液，置入37 ℃恒溫水浴箱內(nèi)，液化后以5000 r/min離心30 min，分離出精漿進(jìn)行精漿生化分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗或方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

各酒精組實驗大鼠精漿生化指標(biāo)均明顯低于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；而中、高劑量組實驗大鼠精漿生化指標(biāo)均明顯低于低劑量組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），見表1。

3 討論

不育癥是全球性的醫(yī)學(xué)和社會性問題，在不育的夫婦當(dāng)中，男性生殖能力的異常約占60%。世界衛(wèi)生組織將夫妻雙方均不采用任何避孕措施生活1年以上，且由于男方因素造成女方不孕者，稱之為男性不育癥[2]。隨著生物化學(xué)技術(shù)手段的不斷發(fā)展，精液分析目前已成為臨床常用的評價男性生育功能的重要檢測指標(biāo)，而精漿生化指標(biāo)的評價及男性附屬性腺功能對男性生殖能力的影響越來越受到人們的重視[3]。

精液主要由精子和精漿組成，而精漿則是由附屬性腺的分泌物組成，其中約60%來自精囊，30%來自前列腺，其余10%來自于附睪和尿道球腺等[4]。精漿是精子的運(yùn)載物，可以起到中和、緩沖和保護(hù)精子的作用，使精子可以在陰道酸性環(huán)境中存活。任何附屬性腺的病變都會導(dǎo)致精漿生化指標(biāo)的異常，例如附睪病變可以導(dǎo)致中性α-葡萄糖苷酶的異常，前列腺的病變可以導(dǎo)致酸性磷酸酶的異常，精囊腺的病變則可以引起精漿果糖的含量異常等。因此檢測精漿生化指標(biāo)的變化有助于了解附屬性腺的分泌功能、代謝狀態(tài)和病理改變等，從而為男性不育的診斷及治療上提供依據(jù)[5]。

精漿中性α-葡萄糖苷酶由附睪分泌，此酶可催化多糖或糖蛋白中碳水化合物分解為葡萄糖，為精子代謝和運(yùn)動提供能量，其活性高低可以直接影響精液的質(zhì)量，精子成熟、獲能及受精過程伴有的比較活躍的糖基反應(yīng)都與此酶的活力有關(guān)[6]。中性α-葡萄糖苷酶活性異?？蓪?dǎo)致精子成熟障礙，使精液中未成熟精子的比例增加，從而導(dǎo)致男性生育能力障礙。

精漿酸性磷酸酶主要是由前列腺分泌而成，是一種具有碳水化合物成分的糖蛋白[7]。該酶具有免疫抑制作用，可與某些氧化物質(zhì)（如活性氧、過氧化氫、氫氧根離子等）共同發(fā)揮局部抗炎效應(yīng)，且具有催化磷酸酯鍵水解的作用。若該酶含量降低可影響局部的免疫力，產(chǎn)生抗精子抗體，從而導(dǎo)致男性不育[8]。

精漿果糖是由血液中的葡萄糖在精囊腺經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)變而來，是精囊功能的特征性標(biāo)志物，也是精子能量代謝的重要糖類能量來源，直接參與了精子的獲能和受精過程。為精子纖絲收縮提供能量的三磷酸腺苷主要依靠果糖分解代謝產(chǎn)生[9]。當(dāng)精漿果糖濃度低于正常水平時，精子活動能力減弱，形成弱精癥而影響生育[10-11]。

精漿鋅是多種核酸和蛋白質(zhì)合成相關(guān)酶的輔酶，也是維持精子染色質(zhì)穩(wěn)定性的重要物資；可清除由白細(xì)胞和有缺陷精子產(chǎn)生的氧自由基，減少氧自由基對精子的毒性[12]；可延緩細(xì)胞膜的脂質(zhì)氧化，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和通透性，確保精子良好的活力。精漿鋅不足將導(dǎo)致性腺發(fā)育不良、睪丸發(fā)育停滯、曲細(xì)精管萎縮，從而影響性腺的發(fā)育和睪丸的生精功能[13]。

酒精是親脂性的小分子物質(zhì)，其代謝產(chǎn)物乙醛能與各種蛋白質(zhì)結(jié)合，形成乙醛-蛋白質(zhì)毒物[14]。此毒物可抑制蛋白質(zhì)的合成，干擾細(xì)胞膜中類脂和蛋白結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙。本研究結(jié)果表明，各酒精組精漿生化指標(biāo)含量均明顯低于正常對照組，說明酒精一方面直接作用于睪丸，使生精細(xì)胞退化變性，精子產(chǎn)生受到抑制，精子質(zhì)量和活動能力下降；另一方面直接或間接地作用于附屬性腺，使精子失去精漿對其的能量供應(yīng)、穩(wěn)定染色質(zhì)及減少氧自由基傷害等作用[15]，從而進(jìn)一步影響睪丸的生殖能力，導(dǎo)致不育的發(fā)生。因此，減少飲酒對男性不育的防治具有重要意義。

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（收稿日期：2014-03-12） （本文編輯：歐麗）endprint

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