氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合過程中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響

鄭萍，劉彥紅，買淑霞，姚婉霞，李娟，戴貴東

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.凱里學(xué)院 化學(xué)與材料工程學(xué)院，貴州 凱里 556011)

氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合過程中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響

鄭萍1，2，劉彥紅1，買淑霞1，姚婉霞1，2，李娟1，2，戴貴東3*

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.凱里學(xué)院 化學(xué)與材料工程學(xué)院，貴州 凱里 556011)

目的：觀察氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合過程中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響，探討其對(duì)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制。方法：選用昆明種雄性小鼠，背部手術(shù)制備全層皮膚缺損創(chuàng)面模型后，隨機(jī)分為創(chuàng)面對(duì)照組，氧化苦參堿低、中、高劑量組(20，40，80 mg·kg-1)。以制備創(chuàng)面次日為第0天，分別于第3，5，7，9，11，14天處死小鼠，取背部皮膚創(chuàng)面組織，病理學(xué)觀察愈合情況；免疫組織化學(xué)法觀察Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)；Western blot檢測(cè)創(chuàng)面肉芽組織中Ⅲ型膠原蛋白的含量變化。結(jié)果：氧化苦參堿明顯抑制創(chuàng)面組織中炎癥反應(yīng)，促進(jìn)新生肉芽組織、毛細(xì)血管以及新生纖維膠原生長；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，氧化苦參堿低劑量組在第5天，中、高劑量組在第9天顯著提高小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)；Western blot結(jié)果顯示，在小鼠創(chuàng)面愈合過程中氧化苦參堿低劑量組在第9，11天，中劑量組在第3，5，7，9，11天，以及高劑量組在第7，9天均使創(chuàng)面組織中的Ⅲ型膠原蛋白顯著增加(P<0.05)。結(jié)論：氧化苦參堿能促進(jìn)小鼠皮膚創(chuàng)面的愈合，其機(jī)制可能與提高Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)有關(guān)。

氧化苦參堿；創(chuàng)面愈合；Ⅲ型膠原蛋白

皮膚損傷的創(chuàng)面愈合一直是外科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題，且對(duì)于創(chuàng)面修復(fù)以及組織再生的研究已深入到細(xì)胞、分子及基因水平[1-2]。多年來，人們一直在為促進(jìn)創(chuàng)面愈合、減少愈合后瘢痕形成不斷探索各種藥物及方法。

氧化苦參堿(oxymatrine，OMT)是寧夏苦豆子中的單體化合物，是一種具有四環(huán)喹嗪啶類結(jié)構(gòu)的生物堿，具有抗心律失常、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗過敏、殺菌、抗炎等多種重要作用[3-4]。有研究表明氧化苦參堿能抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮膚成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的凋亡[5]，但目前國內(nèi)外尚無氧化苦參堿對(duì)創(chuàng)面愈合作用的相關(guān)研究報(bào)道。

膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的核心組成部分，它的產(chǎn)生有兩個(gè)重要的生理作用：一方面可以促進(jìn)傷口的愈合；另一方面，膠原的過量沉積可導(dǎo)致瘢痕[6-7]。有研究指出，在傷口愈合過程中，Ⅲ型膠原蛋白出現(xiàn)越早，其含量越高，膠原纖維就越細(xì)，彈性也就越好，從而瘢痕也會(huì)越少[8]。本研究以背部全層皮膚缺損小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過對(duì)各組小鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間、病理學(xué)形態(tài)觀察、免疫組化及Western blot檢測(cè)Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)等指標(biāo)的測(cè)定，動(dòng)態(tài)觀察OMT對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合過程中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響。

1 材料

1.1動(dòng)物

SPF級(jí)健康昆明種雄性小鼠144只，體重(22±2)g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(寧)2009-0003。

1.2藥物與試劑

氧化苦參堿(寧夏紫荊花藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：P0100226，純度：99.8%)；凱基全蛋白提取試劑盒、凱基BCA蛋白含量檢測(cè)試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)；Anti-CollagenⅢantibody(ab7778)抗體(Abcam公司)；兔抗β-actin抗體(北京博奧森公司)；山羊抗兔二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)公司)；超級(jí)ECL發(fā)光試劑盒(Thermo Scientific公司)。

1.3儀器

TY96-ⅡN型超生細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；H1850R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；MutiskanGo酶標(biāo)儀(美國ThermoFisher公司)；PowerPacBasic電泳儀(美國BIO-RAD公司)；培清JS-860B凝膠成像分析儀(上海培清科技有限公司)。

2 方法

2.1小鼠皮膚創(chuàng)面制備

1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠，背部去毛，暴露皮膚，用2%碘酒和75%乙醇依次消毒后，背部正中剪除全層皮膚，制備(1.5×1.5)cm2正方形傷口，創(chuàng)面自然干燥，止血，以制備創(chuàng)面次日為第0天。

2.2實(shí)驗(yàn)分組及處理

昆明種雄性小鼠144只，制備創(chuàng)面后隨機(jī)分為4組，分別是創(chuàng)面對(duì)照組，氧化苦參堿低、中、高劑量組(20，40，80mg·kg-1)。創(chuàng)面對(duì)照組給予等體積0.9%氯化鈉溶液灌胃，氧化苦參堿組小鼠按20，40，80mg·kg-1灌胃給予氧化苦參堿，1次·d-1，共14d。實(shí)驗(yàn)第3，5，7，9，11，14天每組分別取6只小鼠稱重，戊巴比妥鈉過量麻醉處死，從創(chuàng)面組織正中線處剪開，取左側(cè)創(chuàng)面組織及周邊正常皮膚，浸泡于10%福爾馬林溶液內(nèi)固定備用；取右側(cè)創(chuàng)面組織，液氮速凍后，置于-80℃冰箱里備用。

2.3小鼠皮膚創(chuàng)面愈合時(shí)間觀察

肉眼觀察創(chuàng)面上皮完全愈合(即創(chuàng)面變得很微小且無結(jié)痂覆蓋)所需時(shí)間，并記錄。

2.4病理學(xué)組織觀察

10%中性緩沖福爾馬林固定24～72h后，用流動(dòng)水沖洗，然后梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋、切片(4μm)和蘇木精-伊紅(HE)染色處理。光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠皮膚創(chuàng)面組織結(jié)構(gòu)的病理改變。

2.5免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)水平

取創(chuàng)面及周邊皮膚，放入10%中性福爾馬林溶液中，固定72h后制備石蠟切片。采用免疫組化SABC法進(jìn)行檢測(cè)，滴加PBS溶液1∶1000稀釋的Anti-CollagenⅢantibody(ab7778)50μL，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。陽性反應(yīng)部位呈黃色或棕黃色，胞核復(fù)染為淺藍(lán)色。將染好的組化切片(每只動(dòng)物取1張切片，每張切片至少觀察6個(gè)視野)由專業(yè)病理老師在光學(xué)顯微鏡下采用盲法進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分(Histologicalscores)并采圖。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：按染色程度對(duì)各組織切片染色強(qiáng)度(0～3分，分別為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色)、陽性細(xì)胞范圍(0～4分，分別為0、≤10%、11%～50%、51%～75%、76%～100%)進(jìn)行評(píng)分，最終以分?jǐn)?shù)相乘，再進(jìn)行比較[9-10]。評(píng)分結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.6Westernblot方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白的含量

約100mg經(jīng)液氮研磨的創(chuàng)面組織中加入0.8mL冷裂解緩沖液，冰浴條件下超聲充分破碎細(xì)胞。4℃、10000r·min-1離心10min，取少量上清液用BCA法蛋白定量，剩余上清液統(tǒng)一稀釋后加入上樣緩沖液，于100℃水浴放置7min，-20℃保存。以各樣本總蛋白(100μg)上樣，10%SDS-PAGE凝膠電泳(80V/120V電壓)，200mA恒定電流轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1h，分別加入Anti-CollagenⅢantibody(1∶2000)及β-actin一抗(1∶2000)4℃過兩夜。加入山羊抗兔二抗(偶聯(lián)有HRP，1∶3000)室溫孵育2h，加入ECL試劑，然后將硝酸纖維素膜放入X光片暗盒，壓片，顯影，定影。膠片掃描結(jié)果采用Quantity-one軟件分析，將目的條帶的光密度值與其相對(duì)應(yīng)的內(nèi)參β-actin的光密度值相比以校正誤差，所得比值代表該目的蛋白的相對(duì)含量。

2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合時(shí)間的影響

結(jié)果顯示氧化苦參堿中劑量組愈合時(shí)間最短，為(12.3±0.5)d，比創(chuàng)面對(duì)照組愈合時(shí)間縮短1.4d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其余各組小鼠創(chuàng)面愈合時(shí)間為：創(chuàng)面對(duì)照組(13.7±0.6)d，氧化苦參堿低劑量組(13.0±0.6)d，氧化苦參堿高劑量組(13.6±0.5)d。

3.2氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面組織的病理學(xué)觀察

圖1HE染色結(jié)果顯示：創(chuàng)傷后第3天，各組小鼠皮膚創(chuàng)面炎性滲出比較明顯，均出現(xiàn)少量閘痂皮，創(chuàng)面皮下組織充血、水腫。創(chuàng)傷后第5天，創(chuàng)面對(duì)照組有肉芽組織長入，間質(zhì)中有較多的炎細(xì)胞浸潤，可見少許新生毛細(xì)血管芽以及成纖維細(xì)胞增生，部分薄層上皮生長；氧化苦參堿各劑量組創(chuàng)面由較多肉芽組織填充，成纖維細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞較大，胞漿多，核仁著色明顯；間質(zhì)中可見散在膠原纖維及炎細(xì)胞浸潤，中性粒細(xì)胞數(shù)量減少。傷后第7天，創(chuàng)面對(duì)照組的創(chuàng)面周圍表皮反應(yīng)性增生，肉芽組織填充創(chuàng)面；氧化苦參堿各劑量組肉芽組織增生明顯，可見較多增生的新生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞，創(chuàng)面周圍表皮出現(xiàn)輕度增生。傷后第9天，創(chuàng)面對(duì)照組的創(chuàng)面周圍表皮增生肥厚；氧化苦參堿各劑量組創(chuàng)面周圍表皮反應(yīng)性增生，角質(zhì)層增厚，創(chuàng)面周圍表皮增生更明顯。傷后第11天，創(chuàng)面對(duì)照組的創(chuàng)面幾乎被肉芽組織充填，創(chuàng)面明顯縮小，皮膚創(chuàng)面中纖維細(xì)胞呈細(xì)長梭狀，排列紊亂，膠原纖維增生不明顯；氧化苦參堿各劑量組創(chuàng)面基本愈合，且大部分創(chuàng)面痂皮脫落，創(chuàng)面基本完全為肉芽組織充填，并被新生表皮覆蓋，肉芽組織中的成纖維細(xì)胞明顯減少，代以較多纖維細(xì)胞，肉芽組織深部新生纖維膠原形成，與表皮基本平行生長，呈現(xiàn)有序排列。傷后第14天，各組小鼠皮膚創(chuàng)面均已愈合。

A.創(chuàng)面對(duì)照組 B.氧化苦參堿低劑量組 C.氧化苦參堿中劑量組 D.氧化苦參堿高劑量組圖1 氧化苦參堿對(duì)各時(shí)間點(diǎn)小鼠皮膚創(chuàng)面組織的HE染色圖(×100)

3.3氧化苦參堿對(duì)各時(shí)間點(diǎn)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響

免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠皮膚創(chuàng)面組織Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示：Ⅲ型膠原蛋白陽性細(xì)胞主要集中于成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞的胞漿及細(xì)胞外間質(zhì)表達(dá)。在創(chuàng)傷后，各組新生肉芽組織中纖維膠原表達(dá)部位及維持水平存在明顯差異，創(chuàng)面對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)Ⅲ型膠原蛋白染色程度淺，著色數(shù)量較少；氧化苦參堿各劑量組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ⅲ型膠原蛋白的染色深度要深，著色細(xì)胞數(shù)量稍多。見圖2。

創(chuàng)面對(duì)照組Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)呈波浪形，3d后開始下降，到5d后又開始上升，之后逐漸平穩(wěn)；氧化苦參堿低劑量組在第5天時(shí)Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)，之后未出現(xiàn)明顯增減；氧化苦參堿中劑量組在第5天時(shí)Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平較低，之后逐漸上升，至第9天時(shí)達(dá)高峰(P<0.01)，后又呈下降趨勢(shì)；氧化苦參堿高劑量組的Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)3d時(shí)較低表達(dá)，到第5天后逐漸上升，至第9天達(dá)高峰(P<0.05)。見表1。

A.創(chuàng)面對(duì)照組 B.氧化苦參堿低劑量組C.氧化苦參堿中劑量組 D.氧化苦參堿高劑量組圖2 氧化苦參堿對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白免疫組化染色的影響(×200)

組別劑量/mg·kg-1組織學(xué)評(píng)分3d5d7d9d11d創(chuàng)面對(duì)照組2.67±1.631.60±0.552.80±1.792.00±0.002.20±1.10氧化苦參堿低劑量組201.80±0.442.33±0.52▲2.00±0.002.33±0.522.17±0.98氧化苦參堿中劑量組402.67±1.632.00±0.712.33±1.034.50±1.91▲▲1.80±0.45氧化苦參堿高劑量組802.17±0.411.17±0.411.80±0.453.83±2.71▲2.80±1.79

注：與創(chuàng)面對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；下同

3.4 Western blot檢測(cè)氧化苦參堿各時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響

結(jié)果顯示：第3天，各組小鼠創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白均有表達(dá)，創(chuàng)面對(duì)照組表達(dá)較少，氧化苦參堿中劑量組Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)顯著增高(P<0.01)。第5天，各組小鼠創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白均有表達(dá)，氧化苦參堿中劑量組Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)量最高，與創(chuàng)面對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第7天，創(chuàng)面對(duì)照組小鼠創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)較低，氧化苦參堿中、高劑量組表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第9天，創(chuàng)面對(duì)照組蛋白表達(dá)量最低，氧化苦參堿低、中、高劑量組小鼠皮膚創(chuàng)面Ⅲ型膠原蛋白高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第11天，創(chuàng)面對(duì)照組小鼠皮膚創(chuàng)面組織內(nèi)表達(dá)Ⅲ型膠原蛋白含量最低，氧化苦參堿低、中劑量組Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)量高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖3。

4 討論

創(chuàng)面愈合是一個(gè)較為復(fù)雜的過程，是機(jī)體局部和全身免疫防御、細(xì)胞再生和組織共同參與的重建過程[11]。本實(shí)驗(yàn)通過采用戊巴比妥鈉麻醉小鼠后，剪除小鼠背部中央?yún)^(qū)域約(1.5×1.5)cm2正方形全層皮膚，制備小鼠皮膚急性創(chuàng)面模型。文獻(xiàn)報(bào)道，皮膚創(chuàng)面模型剪除面積<254 mm2，小鼠在14 d內(nèi)可觀察到創(chuàng)面愈合的自然過程[12-13]，故本實(shí)驗(yàn)選取14 d內(nèi)觀察小鼠皮膚創(chuàng)面愈合情況。

在皮膚創(chuàng)面形成早期，機(jī)體免疫系統(tǒng)被激活，較多中性粒細(xì)胞浸潤，隨后出現(xiàn)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤[14]。本實(shí)驗(yàn)中，氧化苦參堿治療小鼠皮膚創(chuàng)面愈合的病理學(xué)顯示，氧化苦參堿能明顯減輕創(chuàng)傷早期(3 d時(shí))的炎癥反應(yīng)。在愈合中期5～9 d，氧化苦參堿各劑量組比創(chuàng)面對(duì)照組中肉芽組織填充更快，新生毛細(xì)血管增多，肉芽組織逐漸發(fā)生，促進(jìn)創(chuàng)面早期修復(fù)[15-17]。炎癥反應(yīng)貫穿創(chuàng)面修復(fù)的始終，氧化苦參堿通過抑制早期炎癥反應(yīng)，使肉芽組織生長，促進(jìn)新生纖維膠原形成對(duì)小鼠創(chuàng)面愈合全過程進(jìn)行影響，有效地提高創(chuàng)面愈合。

A.創(chuàng)面對(duì)照組 B.氧化苦參堿低劑量組 C.氧化苦參堿中劑量組 D.氧化苦參堿高劑量組圖3 氧化苦參堿對(duì)各時(shí)間點(diǎn)小鼠皮膚創(chuàng)面組織中Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的影響

研究發(fā)現(xiàn)，Ⅲ型膠原蛋白水平的增加可能與皮膚傷口再生有關(guān)，增加Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)可能用于預(yù)防和治療瘢痕[18]。本研究的免疫組化結(jié)果顯示，在小鼠皮膚創(chuàng)傷以后，Ⅲ型膠原蛋白早期相對(duì)較少；愈合后期(7，9 d時(shí))Ⅲ型膠原蛋白相對(duì)增加。Ⅲ型膠原蛋白在氧化苦參堿低、中、高劑量組的組織學(xué)評(píng)分高于創(chuàng)面對(duì)照組，在愈合過程中表現(xiàn)出小幅波動(dòng)及愈合中、后期緩慢增加的趨勢(shì)。Western blot結(jié)果顯示，各組小鼠創(chuàng)面在傷口愈合初期(3 d時(shí))即開始分泌Ⅲ型膠原蛋白，但含量較少，而在愈合過程中出現(xiàn)波動(dòng)，愈合后期(9，11 d時(shí))增高，這與Ⅲ型膠原蛋白在傷口愈合過程中表達(dá)規(guī)律基本一致。本實(shí)驗(yàn)中，創(chuàng)面對(duì)照組Ⅲ型膠原蛋白在整個(gè)愈合過程中表達(dá)量均比氧化苦參堿各組Ⅲ型膠原蛋白整體表達(dá)量低，提示氧化苦參堿可能通過提高創(chuàng)面纖維蛋白含量，參與創(chuàng)面愈合的各個(gè)階段，促進(jìn)細(xì)胞生長活性及基質(zhì)形成，從而調(diào)動(dòng)吞噬系統(tǒng)清除病菌與組織碎片，對(duì)創(chuàng)面的上皮被覆起到促進(jìn)作用，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

綜上所述，創(chuàng)面愈合過程復(fù)雜，影響因素眾多，而氧化苦參堿對(duì)小鼠創(chuàng)面愈合過程中的肉芽組織生長、新生膠原纖維、Ⅲ型膠原蛋白等都產(chǎn)生了一定的促進(jìn)作用，從而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。但當(dāng)前的研究仍處于較低水平，許多具體環(huán)節(jié)仍有待進(jìn)一步深入，對(duì)于促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)理仍需進(jìn)一步研究。

[1] 付小兵，王正國.現(xiàn)代高新技術(shù)與創(chuàng)傷修復(fù)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：1-7.

[2] 馮光，曹衛(wèi)紅，柴家科.生長因子在創(chuàng)傷愈合過程中的作用研究進(jìn)展[J].感染.炎癥.修復(fù)，2007，8(2)：120-122.

[3] Lu L G，Zeng M D，Mao Y M，et al.Oxymatrine therapy for chronic hepatitis B：a randomized double-blind and placebo-controlled multi-center trial[J].World J Gastroenterol，2003，9(11)：2480-2483.

[4] Zheng P，Niu F L，Liu W Z，et al.Anti-inflammatory mechanism of oxymatrine in dextran sulfate sodium-induced colitis of rats[J].World J Gastroenterol，2005，11(31)：4912-4915.

[5] 吳江群，聶興舉，秦澤蓮.氧化苦參堿對(duì)病理性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖凋亡的印象[J].中國微創(chuàng)外科雜志，2011，11(3)：259-263.

[6] Verhaegen P D，Marle J V，Kuehne A，et al.Collagen bundle morphometry in skin and scar tissue：a novel distance mapping method provides superior measurements compared to Fourier analysis[J].J Microsc，2012，245(1)：82-89.

[7] Verhaegen P D，Schouten H J，Tigchelaar-Gutter W，et al.Adaptation of the dermal collagen structure of human skin and scar tissue in response to stretch：an experimental study[J].Wound Repair Regen，2012，20(5)：658-666.

[8] Niessen F B，Spauwen P H，Robinson P H，et al.The use of silicone occlusive sheeting(Sil-K)and silicone occlusive gel(Epidenn)in the prevention of hypertrophic scar formation[J].Plast Reconstr Surg，1998，102(61)：1962-1972.

[9] H Aupperle，J Garbade1，K Schneider1，et al.Morphological and immunohistochemical characterization of alterations induced by doxorubicin and the chronological course of recovering of various tissues in rabbits[J].Polish Journal of Veterinary Sciences，2004，7(3)：5-7.

[10] 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996，6(4)：229-231.

[11] Lee W R，Park J H，Kim K H，et al.The biological effects of topical alginate treatment in an animal model of skin wound healing[J].Wound Repair and Regeneration，2009，17(4)：505-510.

[12] 尹東，韋建勛，袁彥，等.外側(cè)入路小切口技術(shù)在全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)中的應(yīng)用[J].中國矯形外科雜志，2009，9(17)：1352.

[13] Shi H X，Lin C，Lin B B，et al.The anti-scar effects of basic fibroblast growth factor on the wound repair in vitro andinvivo[J].PLoS One，2013，8(4)：e59966.

[14] Guo S，Dipietro L A.Factors affecting wound healing[J].J Dent Res，2010，89(3)：219-229.

[15] 蘇宇，周蘭蘭，朱文靖.復(fù)方燙傷膏對(duì)大鼠深Ⅱ度燙傷模型的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].中國中藥雜志，2012，37(14)：2143-2146.

[16] Keck M，Herndon D H，Kamolz L P，et al.Pathophysiology of burns[J].Wien Med Wochenschr，2009，159(13-14)：327-336.

[17] Maga G，Hubscher U.Proliferating cell nuclear antigen(PCNA)：a dancer with many partners[J].J Cell Sci，2003，116(Pt 15)：3051-3060.

[18] 時(shí)榮.皮膚創(chuàng)傷再生和瘢痕愈合中Ⅰ、Ⅲ型膠原和PKC-γ、-λ的差異表達(dá)[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2012.

EffectofOxymatrineontheExpressionofCollagen-ⅢonSkinWoundHealinginMice

ZHENG Ping1，2，LIU Yanhong1，MAI Shuxia1，YAO Wanxia1，2，LI Juan1，2，DAI Guidong3*

(1.School of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China；2.Ningxia Engineering & Technology Research Center for Modernization of Hui Medicine，Yinchuan 750004，China；3.School of Chemical and Materials Engineering，Kaili University，Kaili 556011，China)

Objective：For the purpose of studying oxymatrine on the expression of Collagen-Ⅲ on skin wound healing in mice，and exploring its mechanism.Methods：Male Kunming mice were randomized to four groups：control and OMT 20，40 and 80 mg·kg-1groups.At 0，3，5，7，9，11 and 14 days,the mice were killed，the back skin were gotten.All wound tissue were analyzed by hematoxylin-eosinstaining(HE)and Collagen-Ⅲ expression in wound tissue were analyzed by immunohistochemical staining.Collagen-Ⅲ expression in wound tissue was detected by western blot analysis.Results：Oxymatrine inhibited wound tissue inflammation；promoted granulation tissue，capillaries and the growth of nascent collagen fibers. The results of immunohistochemistry showed that the expression of Collagen-Ⅲ was increased in the oxymatrine-treated group(20 mg·kg-1at 5 d；80 mg·kg-1at 9 d).The Collagen-Ⅲ indicated by Western Blotting was increased(20 mg·kg-1at 9，11 d；40 mg·kg-1at 3-11 d；80 mg·kg-1at 7，9d).Conclusion：Oxymatrine can promote wound healing in mice skin and the mechanism may increase the expression of Collagen-Ⅲ.

Oxymatrine；Wound healing；Collagen-Ⅲ

*

戴貴東，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理和腫瘤藥理；Tel：(0855)8558093， E-mail：daiguidong@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.006

2014-05-28)