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    NF-κB在肝癌介入治療后癌旁肝細胞中的表達

    2014-09-19 09:28:26靚,杜
    大理大學學報 2014年10期
    關(guān)鍵詞:肝細胞免疫組化陽性率

    張 靚,杜 偉

    (大理學院附屬醫(yī)院,云南大理 671000)

    原發(fā)性肝癌(Hepatic carcinoma)是我國高發(fā)的惡性腫瘤之一,臨床發(fā)現(xiàn)肝癌的發(fā)病例呈逐年上升趨勢。針對該腫瘤的治療方法有:生物靶向治療、開腹手術(shù)以及放化療等。介入手術(shù)是目前在疾病診斷與治療中的一種微創(chuàng)治療方法〔1〕,肝癌的介入治療是通過導管向腫瘤組織靶血管進行化療栓塞,針對小肝癌(<3 cm)療效良好,也適用于巨型肝癌,經(jīng)過多次栓塞化療后瘤體積縮小,作為后期手術(shù)切除的輔助性治療。但目前臨床發(fā)現(xiàn)部分患者在介入治療后出現(xiàn)肝功能異常,甚至肝衰竭死亡〔2-3〕。

    在多種腫瘤如胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌等腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)NF-кB的高表達〔4〕。表明NF-кB活化在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移起到關(guān)鍵的作用。同時NF-кB作為人體細胞內(nèi)的一類重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,現(xiàn)研究已表明NF-кB與免疫反應、炎癥和急性反應、細胞增殖與凋亡、病毒感染等多種病理過程有一定的相關(guān)性〔5-6〕。1986年Sen等最早發(fā)現(xiàn)NF-кB(nuclear factor-кB)〔2〕一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,廣泛存在于真核細胞中。本研究建立動物肝癌模型行TACE治療,研究NF-кB在腫瘤及癌旁組織中的表達。

    1 材料

    1.1 實驗動物 成功建立肝癌模型59例,見圖1。A組共29例,B組30例,種植后3周時行CT掃描(平掃+增強)以及肝動脈化療栓塞(TACE)治療術(shù),經(jīng)CT、MRI及數(shù)字減影血管造影(DSA)檢查后,證實種植成功30例,見圖2~4。C組(對照組)為20例,CT定位肝穿刺后注射生理鹽水。

    圖1 兔VX2肝癌模型大體,可見病灶呈白色魚肉樣改變,病灶局限,為典型的兔原發(fā)性肝癌模型

    圖2 兔VX2肝癌模型CT平掃及增強掃描,可見腫瘤組織呈低密度,中心密度更低,邊緣強化

    圖3 兔VX2肝癌模型MRI平掃及增強掃描,T1WI為低信號,T2WI為高信號,中央可見低信號壞死區(qū)

    圖4 兔VX2肝癌模型DSA顯示腫瘤供血動脈增多,腫瘤組織染色

    1.2 主要試劑 NF-кB鼠抗兔多克隆抗體(購于武漢博士德)、二抗(抗鼠/兔)試劑及DAB顯色試劑(購于Dako公司)等。

    2 方法

    2.1 實驗動物分組 A組(肝癌組)29只,B組(介入治療組)30只,B組于腫瘤種植后3周左右行CT確定腫瘤位置,后行TACE術(shù)治療,TACE治療后約10小時取材,對照組取材時間一致。

    2.2 取材及石蠟包埋及HE染色 組織經(jīng)過固定后進行石蠟包埋,切片(厚度為4 um),行蘇木精—伊紅染色(HE)。

    2.3 免疫組織化學染色 采用Envision TM二步免疫組化法,具體步驟參見博士德免疫組化說明書。

    2.4 判斷標準 NF-кB主要在細胞漿內(nèi)陽性表達〔7〕,顏色分別呈黃色、棕黃色、棕褐色。每張切片選取10個視野(400倍鏡下),按陽性細胞數(shù)和顏色深度來判定:①陽性細胞:0分(<5%),1分(5%~24%),2分(25%~50%),3分(51%~75%),4分(>75%);②顏色深度:0分(無著色),1分(淡黃色),2分(黃棕色),3分(棕褐色)。

    再通過陽性細胞數(shù)以及染色深度評分相加之和判定結(jié)果:<2分陰性(-),2~3分弱陽(+),4~5分陽性(++),6~7分強陽性(+++)。

    2.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS18.0軟件進行分析,采用未矯正χ2檢驗,P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。

    3 結(jié)果

    3.1 HE染色 腫瘤細胞梁索狀分布,細胞核增大明顯,核深染。腫瘤部分區(qū)域可見壞死,大量炎性細胞以及菌團,A組癌旁肝細胞有輕度脂肪變性以及可見少量凋亡細胞。B組癌旁組織內(nèi)可見大量炎性細胞浸潤,以中性粒、單核細胞為主,同時也可見肝細胞脂肪變,以及凋亡細胞。

    3.2 NF-кB的免疫組織化學檢測 免疫組化分腫瘤組癌組織為A1,癌旁組織為A2,介入治療組腫瘤組織為B1,癌旁組織為B2,對照組為C。

    A1組29例腫瘤組織內(nèi),NF-кB陽性表達者21例,陽性率為72.4%,相應的A2組陽性表達為11例,陽性率為37.9%;B1組陽性表達共24例,陽性率為82.4%,B2組陽性表達18例,陽性率60%。C組僅2例為陽性表達,陽性率為10%,各組與對照比較,除A2外差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),A2與C組比較P >0.05,A1、B1、A2、B2兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見圖5~14。

    圖5 正常肝組織HE染色(×100)

    圖6 正常肝細胞組HE染色(×400)

    圖7 VX2腫瘤組織HE染色(×40)

    圖8 VX2腫瘤HE染色(×400)

    圖9 NF-кB在VX2肝癌組織中的表達(×100)

    圖10 NF-кB在VX2肝癌組織中的表達(×400)

    圖11 NF-кB在VX2肝癌組織中的表達(強陽性)(×400)

    圖12 TACE治療VX2肝癌后,NF-кB在肝癌組織中的表達(×400)

    圖13 NF-кB在瘤旁肝組織中的表達(×400)

    圖14 TACE治療VX2肝癌后,NF-кB在瘤旁肝組織中的表達(×400)

    A1組29例腫瘤組織內(nèi),NF-кB表達。見表1~2。

    表1 NF-кB分別在肝癌組織、癌旁組織與正常肝組織的表達情況比較

    表1所示,A2及C組比較,組間差異無統(tǒng)計學意義。而A1,B1,B2三組與C組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    表2 肝癌組織以及癌旁組織內(nèi)NF-кB表達

    經(jīng)過TACE治療后,腫瘤組織和癌旁肝組織內(nèi)的NF-кB表達均增高,TACE術(shù)前后腫瘤組織中NF-кB表達差異無統(tǒng)計學意義(P >0.05),而癌旁肝組織NF-кB表達明顯增高。

    4 討論

    本次研究中免疫組化檢測結(jié)果顯示HCC癌組織NF-кB表達明顯升高,表明NF-кB與肝癌有一定的相關(guān)性。C組與A1組組間統(tǒng)計不具有統(tǒng)計學意義,說明原發(fā)性肝癌癌旁組織有一定代償。實驗研究證明造影劑和化療藥物如阿霉素、長春新堿、順鉑等均可以誘導NF-кB活化〔7-8〕。

    本實驗免疫組化結(jié)果顯示癌組織中NF-кB表達高于癌旁組織,表明NF-кB與肝癌的發(fā)生以及發(fā)展有一定相關(guān)性,TACE治療后,癌旁肝組織NF-кB表達升高更為明顯,可能機制為:介入手術(shù)栓塞以及化療后導致肝細胞凋亡、炎性反應,激活NF-кB〔9-10〕。

    TACE術(shù)后癌旁組織陽性率為60.0%,未行介入治療的癌旁組織陽性率為37.9%。TACE術(shù)后腫瘤旁肝組織內(nèi)NF-кB活性增高明顯,造影劑以及化療藥物對肝細胞造成損傷,栓塞導致癌旁組織缺血,產(chǎn)生炎性反應,導致 NF-кB 表達增高〔11-14〕。TACE治療前后肝癌組織NF-кB的表達未見明顯差異,其機制可能是TACE術(shù)后腫瘤細胞被抑制〔15〕,細胞活性被抑制導致NF-кB抑制蛋白IКB的表達增加,IКB與NF-кB的親和力明顯大于其與DNA的親和力,與NF-кB結(jié)合后,抑制NF-кB的蛋白表達,抵消部分導致的NF-кB的活性表達增高的因素〔16〕。

    〔1〕杜偉,袁貴斌,汪永平,等.介入法植入國產(chǎn)支架治療前列腺增生癥的臨床應用〔J〕.大理學院學報,2010,9(2):47-49.

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