• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    漢防已甲素對內源性神經(jīng)干細胞增殖分化影響的前瞻性研究

    2014-09-18 05:56:34羅春山鄧忠良邱冰李青王遠政陸庭盛姚書丹
    中國生化藥物雜志 2014年2期
    關鍵詞:陽性細胞脊髓干細胞

    羅春山,鄧忠良,邱冰,李青,王遠政,陸庭盛,姚書丹

    (重慶醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院 骨科,重慶 400010)

    漢防已甲素對內源性神經(jīng)干細胞增殖分化影響的前瞻性研究

    羅春山,鄧忠良Δ,邱冰,李青,王遠政,陸庭盛,姚書丹

    (重慶醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院 骨科,重慶 400010)

    目的探討漢防己甲素(tetrandrine,Tet)對大鼠急性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)后脊髓損傷段內源性神經(jīng)干細胞(endogenous neural stem cells,ENSCs)增殖分化的影響。方法選用 78 只大鼠,隨機分為 3 組:損傷對照組(n=36),Tet組(n=36),假手術組(n=6)。損傷組、Tet組采用 Allen’s打擊法造模,Tet組于脊髓損傷后30 min、術后24 h、術后48 h給予Tet 22.5 mg/kg體重治療,損傷組注射同等劑量的生理鹽水。于脊髓損傷后1 d、3 d、1 w、2 w、3 w、4 w取損傷段脊髓組織,HE染色觀察脊髓組織的形態(tài)結構變化,免疫熒光組織化學方法檢測各組大鼠脊髓組織在不同時間段巢蛋白(Nestin)及BrdU的表達變化情況。結果ASCI后HE染色顯示Tet組脊髓組織損傷較損傷組輕;ASCI后1d損傷對照組及Tet組均可見少量Nestin表達陽性細胞及BrdU表達陽性細胞,ASCI后1 w對照組及Tet組可見大量陽性細胞,陽性細胞表達達高峰,持續(xù)至2 w后逐漸開始下降,ASCI后4 w時,Tet組、損傷對照組中BrdU及Nestin陽性細胞表達數(shù)明顯減少,較假手術組高,但無統(tǒng)計學差異。Tet組BrdU陽性細胞數(shù)量和Nestin陽性細胞數(shù)量在各時間點均高于損傷對照組,其中術后 1 d、3 d、1 w、2 w、3 w 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),術后 4 w 2 者陽性細胞數(shù)比較無統(tǒng)計學意義。損傷對照組及 Tet組在 ASCI后 1 d、3 d、1 w、2 w、3 w時,與假手術組相比,BrdU、Nestin陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。損傷對照組及 Tet組在 ASCI后 1 d、3 d、1 w、2 w、3 w 時 BrdU、Nestin陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論Tet可通過改善微環(huán)境增加BrdU、Nestin陽性細胞,增加ENSCs的增殖,有利于神經(jīng)功能的恢復。

    漢防己甲素;脊髓損傷;內源性神經(jīng)干細胞

    1 材料與方法

    1.1 主要儀器及試劑 改良Allen垂直下落打擊器:10 g砝碼;直徑0.8 cm的刻度管,作為打擊通道;直徑4 mm的薄金屬片;5-溴2-脫氧嘧啶尿苷、5-溴2-脫氧嘧啶尿苷抗體-3(BrdU Ab-3)購自上海西唐生物科技有限公司;免疫熒光二抗試、FITC標記二抗、免疫組化濕盒、Nestin多克隆抗體、DAB顯色試劑盒(購自武漢博士德);Tet(純度>99.9%)購自江西彭澤制藥廠,配置成濃度為2 g/L的溶液,過濾滅菌后備用。

    1.2 實驗動物分組 SPF級SD大鼠,體重200~300 g,78只,雌雄不限,購自貴陽醫(yī)學院動物實驗中心,動物許可證號:SCXK(黔)2012--001。隨機分為3組:假手術組6只,損傷對照組36只,Tet治療組36只。

    1.3 脊髓損傷模型建立 用4%戊巴比妥鈉麻醉溶液40 mg/kg行腹腔麻醉成功后,四肢與牙齒固定于鼠臺上,手術區(qū)剪毛備皮,碘伏消毒后鋪無菌洞巾,以胸9棘突為中心取后背部正中切口,長約1.5 cm,逐層切開皮膚、皮下,用神經(jīng)剝離子沿棘突兩旁剝離開椎旁肌,眼科鑷提起棘突以便增加椎板間隙,顯微剪剪除胸8、9、10椎板,造成0.4 cm×1.0 cm的椎板缺損,顯露硬膜囊。B、C、D組大鼠把直徑4 mm的薄金屬片置于胸9段脊髓處,按加速壓迫型Allen’s打擊法制成脊髓損傷模型,砝碼重量10 g,沿直徑0.8 cm的刻度試管從5 cm高處自由落下致傷大鼠,可見損傷處脊髓充血明顯、造成脊髓損傷后全癱模型。損傷對照組、Tet治療組制造全癱模型,假手術組大鼠切除椎板后不行打擊損傷,直接縫合。

    將1%的5-溴2-脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyuridines,BrdU)生理鹽水溶液在每次處死大鼠前48 h、36 h、24 h開始以50 mg/(kg體重/次)的劑量進行腹腔注射BrdU,以標記脊髓內保持分化活力的細胞,第3次給藥后24 h處死大鼠取標本。Tet治療組于制模術后30 min、傷后24 h、傷后48 h尾靜脈注射濃度為2 g/L的Tet溶液,按22.5 mg/Kg體重,損傷對照組注入同等劑量的生理鹽水作為對照。

    1.4 標本采集 假手術組動物于飼養(yǎng)28 d后處死,Tet組及損傷對照組動物分別于術后1 d、3 d、1 w、2 w、3 w、4 w每時間點隨機取6只大鼠處死。4%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉成功后,固定于鼠臺;剪開胸骨打開胸腔經(jīng)左心室心尖處往主動脈插管并固定好,快速滴注4℃生理鹽水200 mL,打開右心耳見清涼液體流出;用灌注泵向主動脈灌注4℃的4%多聚甲醛磷酸緩沖液200 mL,持續(xù)1 h,讓組織固定后取材;從原手術切口打開暴露損傷段脊髓,取損傷段脊髓約6 mm,取出標本后反復用生理鹽水沖洗,PBS液中浸泡沖洗3次,每次5 min,放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)內固定12 h后;梯度乙醇(50%、70%、80%、90%、100%)脫水;使用二甲苯透明;組織塊在石蠟中包埋;修剪邊緣平齊后,沿脊髓橫切面切片,制備厚度為3μ m的組織切片;貼片、烤片。備用于HE染色和內源性神經(jīng)干細胞的Nestin和BrdU免疫熒光組化檢測。

    1.5 HE染色 在每個時間點每只大鼠取2張組織切片行HE染色,切片脫蠟后清洗、蘇木素染色、洗去片上多余染液,1%鹽酸酒精浸泡分色、堿性溶液促藍后流水沖洗,伊紅復染、梯度乙醇(50%、70%、80%、90%、100%)脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。奧林巴斯光學顯微鏡下觀察脊髓組織的結構形態(tài)變化。

    1.6 免疫組織化學染色及圖像分析 每個標本取2張完整的組織切片,每組各個時間點共12張組織切片進行BrdU、Nestin免疫組化染色,陰性對照用正常羊血清替代一抗。封片后鏡檢并照相。奧林巴斯免疫組織化學染色BX-50觀察組織切片,BrdU免疫組織化學染色以細胞內出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽性表達,Nestin免疫組織化學染色以胞漿均勻染色呈棕色或褐色為陽性表達,圖像分析由未參與實驗的2名實驗人員實行,在200倍的光學顯微鏡下對脊髓損傷區(qū)進行拍照,計算每張切片隨機選取5個不重疊視野的BrdU陽性表達細胞數(shù),取其平均值作為每一切片的陽性細胞數(shù)值。

    1.7 統(tǒng)計學方法 所得數(shù)據(jù)均經(jīng)過SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,正態(tài)計量數(shù)據(jù)以“±s”表示,各組之間及組內不同時間點之間的兩兩比較采用t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 動物模型制作情況 3只大鼠術后傷口感染后死亡,損傷對照組、Tet組共有8只大鼠死亡。術后雙下肢癱瘓是打擊模型成功的標準,假手術組無明顯神經(jīng)功能障礙。

    2.2 HE染色結果

    假手術組的脊髓組織HE染色正常,未見出血壞死及組織水腫等表現(xiàn);損傷對照組可見損傷脊髓組織8 h開始出現(xiàn)片狀出血、水腫,1 d時組織呈中重度水腫及神經(jīng)元開始變性,1 w時可見大量神經(jīng)元變性,灰白質有微小空腔形成,4 w時灰白質中出現(xiàn)壞死后形成的囊腔,少量神經(jīng)元殘留;Tet組損傷脊髓組織8 h呈輕度水腫,少量出血,1 d時神經(jīng)元輕中度腫脹,少量神經(jīng)元變性,1 w時組織腫脹開始消退,留有少量點狀壞死灶,4 w組織腫脹基本消退,少量壞死后形成小囊腔,大量神經(jīng)元殘留(見圖1)

    圖1 損傷對照組與Tet組1 w、4 w HE染色結果(×100)Fig.1 HE staining of control group and Tet-treated group in one week,four weeks after injury(×100)

    2.3 脊髓損傷后BrdU陽性細胞的變化 BrdU染色陽性細胞呈橢圓形、圓形或梭形,陽性細胞呈黃褐色染色,形態(tài)多樣。各組不同時間點脊髓組織中BrdU染色陽性細胞形態(tài)、大小、染色深淺無明顯差異。經(jīng)脊髓橫截面不同區(qū)域觀察發(fā)現(xiàn)BrdU染色陽性細胞主要集聚于脊髓中央管周圍和灰質內。ASCI后1 d即可見少量BrdU陽性細胞,隨時間推移不斷增加,到ASCI后1 w時BrdU陽性細胞數(shù)達高峰,損傷對照組及Tet治療組可見大量陽性細胞,持續(xù)2 w后逐漸下降,分布于損傷區(qū)周圍及脊髓中央管周圍,ASCI后4 w BrdU陽性細胞數(shù)明顯減少,但仍高于假手術組。損傷對照組及Tet組在ASCI后1 d、3 d、1 w、2 w、3 w時與假手術組相比BrdU陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義,ASCI后到第4 w Tet組、損傷對照組數(shù)值較假手術組高,但2組BrdU陽性細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義。Tet治療組BrdU陽性細胞數(shù)量高于損傷組,損傷對照組及Tet組在ASCI后1天時BrdU染色陽性細胞數(shù)量有增加,但2組差異無統(tǒng)計學意義,2組ASCI后在1 d、3 d、3 w時間點BrdU陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義,2組ASCI后在1 w、2 w時BrdU陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義,ASCI后到第4周Tet組數(shù)值較損傷組高,但2組BrdU陽性細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義(見表1、圖2)。

    表1 損傷組織中brdU免疫組化染色陽性細胞計數(shù)結果Tab.1 Counting results for the number of brdU positive cells by immunohistochemical staining

    圖2 脊髓損傷后BrdU陽性細胞變化情況(×200)Fig.2 Results of brdU positive cells in control group and Tet-treated group after injury(×200)

    2.4 脊髓損傷后Nestin陽性細胞的變化 Nestin陽性細胞胞核淡染,胞漿深染,呈三角形、梭形或卵圓形。假手術組中可見少量的Nestin陽性細胞。ASCI后1 d時即可見Nestin陽性細胞數(shù)增加,隨時間推移逐漸增加,ASCI后1 w Nestin陽性細胞數(shù)達高峰,損傷對照組及Tet治療組可見大量陽性細胞,持續(xù)2 w后逐漸下降,ASCI后4 w Nestin陽性細胞數(shù)明顯減少,但仍高于假手術組。損傷對照組及Tet組在術后1 d、3 d、1 w、2 w、3 w時與假手術組相比Nestin陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義。Tet治療組表達數(shù)量高于損傷組,2組術后在1 d、3 d、1 w、2 w、3 w時Nestin陽性細胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學意義,術后到第4周時2組Nestin陽性細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學意義(見表2、圖3)。

    表2 損傷組織中nestin免疫組化染色陽性細胞計數(shù)結果Tab.2 Counting results for the number of nestin positive cells by immunohistochemical staining

    圖3 脊髓損傷后Nestin細胞染色結果Fig.3 Results of Nestin positive cells after injury

    3 討論

    ASCI后原發(fā)性和繼發(fā)性損傷的序貫進行,導致出現(xiàn)脊髓微循環(huán)障礙、自由基損傷、脂質過氧化損傷,免疫炎癥反應等病理現(xiàn)象,引起神經(jīng)元大量變性、壞死致神經(jīng)傳導通路的中斷,最終導致癱瘓等嚴重的神經(jīng)功能障礙。既往已有大量實驗用神經(jīng)干細胞來治療修復脊髓損傷取得了一些進展,但仍存在著很多諸如社會學、論理學、污染、免疫排斥、分化方向控制、致瘤性等問題[4]。

    在成年哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中存在ENSCs等前體細胞已在近年來的研究中證實,并認為成年哺乳動物脊髓組織中ENSCs主要存在脊髓損傷區(qū)室管膜周圍、膜下區(qū),在某些病理變化、外傷刺激及炎癥性細胞因子的刺激下可激活、增殖分化和遷移[2-3,5-6]。ENSCs來自自身,方便可靠,無免疫排斥反應、亦無致瘤性之憂。很多實驗發(fā)現(xiàn)將ENSC分離至體外培養(yǎng)時表現(xiàn)出多能分化的特點,能分化為神經(jīng)元,但移植至脊髓后部分神經(jīng)干細胞出現(xiàn)死亡或分化成為形成膠質的星型膠質細胞,而不是分化成為有功能的神經(jīng)元細胞,可能是脊髓損傷后局部微環(huán)境的改變,大量神經(jīng)毒性物質如 NOS、TNF-α、IL-1 β、IL-6、骨形態(tài)發(fā)生蛋白等積聚導致神經(jīng)干細胞的死亡或分化為星形膠質細胞[7-8]。研究發(fā)現(xiàn)內源性神經(jīng)干細胞非常脆弱,脊髓損傷后大部分死亡,剩下的被激活,分化增殖參與損傷的修復[9]。但實驗證明通過干預因素可促進ENSC增殖分化[10-11],因此大量研究試想通過人為的干預因素早期競爭性地抑制負性因素,改善微環(huán)境,使神經(jīng)增殖維持時限長、數(shù)量最大化,同時促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向分化,使這些種子細胞能真正參與損傷的修復,促進功能的恢復,已取得了一些正面的成果。本實驗試想利用Tet具有的特殊藥理特性通過改善ASCI后局部微環(huán)境來促進ENSCs增殖分化,以利于修復損傷的脊髓功能[12-13]。

    胸腺嘧啶是DNA的基本成分,Brdu是胸腺嘧啶的類似替代物物,在DNA合成期(S期)過程中可被利用替代胸腺嘧啶,BrdU標記陽性細胞就是新生細胞,可作為細胞分裂增殖的示蹤劑[14]。有研究證實BrdU標記陽性細胞90%是具有分化能力的神經(jīng)干細胞,只有10%是已分化細胞,具有很高的特異性[15]。BrdU注入體內后可很快整合到新生DNA中,本實驗在處死大鼠前48 h、36 h、24 h給予腹腔注射Brdu,讓其有充足時間吸收,在這一時期有分化潛能的細胞進行增殖分裂活動,可吸收BrdU替代到新的DNA鏈中,利用免疫組化染色和熒光素作為指示系統(tǒng)可檢測出含有Brdu的細胞,根據(jù)Brdu標記增殖細胞數(shù)量、位置可分析其被激活的ENSCs的增殖速度和在組織中遷徙的路徑,并可追蹤到增殖分裂的子代細胞。本實驗觀察的是ASCI后1 d、3 d、1 w、2 w、3 w、4 w各時間點損傷脊髓組織中前1 d(ASCI后1 d組織采集的標本)或前2 d的ENSCs的增殖細胞數(shù),因此選擇大鼠處死前2 d給藥。

    巢蛋白(Nestin)是一種中間絲蛋白,分布在細胞胞漿中,存在于成年多能干神經(jīng)前體細胞或神經(jīng)干細胞中,系未分化狀態(tài)多能神經(jīng)干細胞的特異性標記抗原蛋白,,目前檢測巢蛋白表達水平是鑒定神經(jīng)干細胞最重要、最常用的手段之一。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中,Nestin表達較高,在成熟的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,Nestin表達非常低,當中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損傷時,局部微環(huán)境改變刺激神經(jīng)干細胞增殖分化,Nestin表達升高,并在細胞因子的趨化作用下可發(fā)生遷徙,異位表達Nestin,距損傷區(qū)越近,Nestin陽性細胞數(shù)越多,距損傷區(qū)越遠,Nestin陽性細胞數(shù)越少[16]。

    本實驗觀察到在正常脊髓組織中Nestin陽性細胞數(shù)量較少,主要集中存在于室管膜周圍,同時在脊髓的灰質和白質中也少見。ASCI后1 d可見Nestin陽性細胞表達增多,位于室管膜區(qū)及脊髓損傷區(qū),ASCI后1 w時可見Nestin陽性細胞較密集,Nestin陽性細胞數(shù)值達高峰,主要集中位于中央管室管膜周圍及脊髓損傷區(qū),持續(xù)高表達2 w后逐漸下降,4 w后表達明顯減少,BrdU標記陽性細胞數(shù)值檢測也有相同的規(guī)律,說明在ASCI能激活ENSCs,使處于G0期的ENSCs進入細胞周期,處于活躍的增殖分化狀態(tài),增殖的ENSCs大量表達Nestin和進行BrdU標記,有一個被激活、增殖分化達高峰、隨著損傷內環(huán)境的穩(wěn)定又逐漸下降的過程。同時損傷后ENSCs活化并在細胞因子的趨化作用下移行至脊髓損傷區(qū),分化形成新的神經(jīng)元修復損傷脊髓組織。Tet組Nestin陽性細胞數(shù)值和BrdU標記陽性細胞數(shù)值在相同時間點明顯高于損傷組,說明Tet能使更多的ENSCs增殖分化,并積聚到損傷區(qū)域內,為損傷組織修復提供更多的種子細胞,其機制可能是通過改善脊髓損傷后局部微環(huán)境,如減輕局部炎癥反應、抗脂質過氧化、穩(wěn)定生物膜性結構、改善損傷區(qū)微循環(huán)障礙、防止Ca2+過度內流所致的該超載等有關[17]。

    [1] Clarke DL,Johansson CB,Wilbertz J,et al.Generalized potential of adult neural stem cells[J].Science,2000,288:1660-1663.

    [2] Lim DA,Huang YC,Alvarez-Buylla A.The adult neural stem cell niche:lessons for future neural cell replacement strategies[J].Neurosurg Clin N Am,2007,18:81-92.

    [3] Pallini R,Vitiani LR,Bez A,et al.Homologous transplantation of neural stem cells to the injured spinal cord of mice[J].Neurosurgery,2005,57:1014-1019.[4] Fischbach GD,Fischbach RL.Stem cells: science,policy and ethics[J].Journal of Clinical Investigation,2004,114:1364-1371.

    [5] Colucci-D'Amato L,di Porzio U.Neurogenesis in adult CNS:From denial to opportunities and challenges for therapy[J].Bioessays,2008,30:135-145.

    [6] Sergent-Tanguy S,Michel DCI.Long-lasting coexpression of nestin and glial fibrillary acidic protein in primary cultures of astroglial cells with a major participation of nestin(+)/GFAP(-) cell proliferation[J].Neurosci Res,2006,83(8):1515-1524.

    [7] Kim JB,Zaehres H,Wu G,et al.Pluripotent stem cells induced from adult neural stem cells by reprogramming with two factors[J].Nature,2008,454:646-650.

    [8] Nakashima K,Takizawa T,Ochiai W,et al.BMP 2-mediated alteration in the developmental pathway of fetal mouse brain cells from neurogenesis to astrocytogenesis[J].Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(10):5868-5873.

    [9] Horky LL,Galimi F,Gage FH,et al.Fate of endogenous stem/progenitor cells following spinal cord injury[J].J Comp Neurol,2006,498(4):525-538.

    [10] Bambakidis NC,Horn EM,Nakaji P,et al.Endogenous stem cell proliferation induced by intravenous hedgehog agonist administration after contusion in the adult rat spinal cord[J].J Neurosurg Spine,2009,10(2):171-176.

    [11] Hayashi K,Ohta S,Kawakami Y,et al.Activation of dendritic-like cells and neural stem/progenitor cells in injured spinal cord by GM-CSF[J].Neurosci Res,2009,64(1):96-103.

    [12] Wrathall JR,Lytle JM.Stem cells in spinal cord injury[J].Dis Markers,2008,24(4-5):239-250.

    [13] Barnable-Heider F,Frisen J.Stem cells for spinal cord repair[J].Cell Stem Cell,2008,3(1):16-24.

    [14] Lu D,Mahmood A,Zhang R,et al.Upregulation of neurogenesis and reduction in functional deficits following administration of DetA/NONOate,a nitric oxide donor,after traumatic brain injury in rats[J].Neurosurg,2003,99(2):351-361.

    [15] Zhang RL,Zhang ZG,Wang L,et al.Activated neural stem cells contribute to stroke induced neurogenesis and neuroblast migration toward the infarct boundary in adult rats[J].J Cereb Blood Flow Metab,2004,24(4):441-448.

    [16] Pekny M,Johansson CB,Eliasson C,et al.Abnormal reaction to central nervous system injury in mice lacking glial fibrillary acidic protein and vimentin[J].J Cell Boil,1999,145(3):503-514.

    [17] 羅春山,安榮澤,田曉濱.漢防己甲素對大鼠急性脊髓損傷的作用及意義[J].中國脊柱脊髓雜志,2003,13(3):160-163.

    Experimental study of tetrandrine on endogenous neural stem cell proliferation and differentiation

    LUO Chun-shan, DENG Zhong-liangΔ, QIU Bing, LI Qing, WANG Yuan-zheng, LU Ting-sheng, YAO Shu-dan

    (Department of Osteology, The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China)

    ObjectiveTo discuss the effect of tetrandrine on endogenous neural stem cell proliferation and differentiation after spinal cord injury in rats.Methods78 rats were randomly divided into control group(n=36), Tet-treated group(n=36) and sham-operated group(n=6). Control group and Tet-treated group were adapted with Allen's combat modeling method. Rats in Tet group were injected Ted with a dosage 22.5 mg/kg in 30 minutes,24 hours and 48 hours after ASCI, and the same dose of saline was injected into injured group as control .Samples were dissected from the spinal cord injury sites at 1 day, 3 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks after ASCI, and tested by HE staining for morphology and by immunofluorescence staining for the expression of BrdU and nestin.ResultsA little Nestin positive cells and BrdU positive cells were found in control group and Tettreated group at 1 day after injury. A large number of positive cells were found in both groups at 1 week after injury and reached the peak which lasted for 2 weeks and then decreased gradually. The expression of Nestin positive cells and BrdU positive cells in control group and Tet-treated group were decreased significantly at 4 weeks after injury, but were still more than that in sham operation group. The number of Nestin positive cells and BrdU positive cells in Tet-treated group were more than that in control group at each time point after injury. The expression was higher in Tet-treated group than control group at 1 day, 3 days, 1 week, 2 weeks, 3 weeks after injury and had no difference at 4 weeks after injury.ConclusionTetrandrine could increase the number of Nestin positive cells, BrdU positive cells and endogenous neural stem cells though improving the microenvironment, and it is beneficial for the recovery of spinal cord injury in rats.

    tetrandrine;spinal cord injury;endogenous neural stem cells

    R 651.2

    A

    1005-1678(2014)02-0026-04

    急性脊髓損傷在病理上表現(xiàn)為白質和灰質的損傷,現(xiàn)在普遍認為由原發(fā)性損傷和隨著出現(xiàn)的繼發(fā)性損傷造成。繼發(fā)性損傷是序貫發(fā)生的復雜的自我毀滅的級聯(lián)反應的過程,包括脊髓的低灌注及微循環(huán)障礙所致的缺血缺氧,脂質過氧化作用,興奮性毒性氨基酸等毒性物質的積聚,炎癥介質的瀑布式反應,細胞內鈣超載,能量代謝異常等;其使大量的神經(jīng)元變性壞死、軸突彌漫性脫髓鞘,從而導致?lián)p傷脊髓組織中大量的神經(jīng)元缺失,使患者神經(jīng)功能恢復不理想。近年來研究發(fā)現(xiàn):在脊髓中央管周圍的室管膜、膜下區(qū)存在內源性神經(jīng)干細胞[1](endogenous neural stem cells,ENSCs),正常情況下處于休眠狀態(tài),脊髓受到損傷時,可刺激室管膜、膜下區(qū)ENSCs增殖分化[2-3]。但在損傷脊髓的微環(huán)境中存在抑制內源性神經(jīng)干細胞增殖分化的負性因素,有利于ENSCs分化成星型膠質細胞和少突膠質細胞,而不利于分化成為促神經(jīng)功能恢復的神經(jīng)元和少突膠質細胞,造成脊髓損傷后功能恢復較差。隨著脊髓損傷機制研究的深入,認為繼發(fā)性損傷有可干預性,在早期減輕繼發(fā)性損傷能保護殘余脊髓組織、促進脊髓功能的修復。漢防己甲素是中藥防己的有效成分,大量研究證明其具有抗炎、抗脂質過氧化、防止細胞受損、改善微循環(huán)及Ca2+拮抗作用。本實驗主要探討Tet對內源性神經(jīng)干細胞增殖分化的影響來觀察其對ASCI后神經(jīng)功能的恢復。

    貴州省科技英才項目資助[黔省專合字(2012)176號]

    羅春山,男,博士,主任醫(yī)師,研究方向:脊髓損傷的基礎研究,E-mail:lyz 8088 gk@163.com;鄧忠良,通信作者,男,博士,主任醫(yī)師,研究方向:脊髓損傷的基礎研究,E-mail:deng 7568@gmail.com。

    猜你喜歡
    陽性細胞脊髓干細胞
    人工3D脊髓能幫助癱瘓者重新行走?
    軍事文摘(2022年8期)2022-11-03 14:22:01
    干細胞:“小細胞”造就“大健康”
    造血干細胞移植與捐獻
    干細胞產(chǎn)業(yè)的春天來了?
    姜黃素對脊髓損傷修復的研究進展
    大口黑鱸鰓黏液細胞的組織化學特征及5-HT免疫反應陽性細胞的分布
    干細胞治療有待規(guī)范
    人胎腦額葉和海馬中星形膠質細胞的發(fā)育性變化
    中西醫(yī)結合治療脊柱骨折合并脊髓損傷25例
    間歇導尿配合溫和灸治療脊髓損傷后尿潴留30例
    免费大片黄手机在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产av码专区亚洲av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产av国产精品国产| 99久国产av精品国产电影| 简卡轻食公司| 久久久国产一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| ponron亚洲| 国产高清不卡午夜福利| 22中文网久久字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久精品久久久久真实原创| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲成人精品中文字幕电影| 中国国产av一级| 99久国产av精品国产电影| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品一区二区三卡| 午夜福利网站1000一区二区三区| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲av免费高清在线观看| 极品教师在线视频| 九九爱精品视频在线观看| 国产在线一区二区三区精| 在线免费观看不下载黄p国产| 又爽又黄无遮挡网站| 日本三级黄在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 全区人妻精品视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 免费观看的影片在线观看| 久久久久久久国产电影| 欧美区成人在线视频| 亚洲国产av新网站| 听说在线观看完整版免费高清| 最后的刺客免费高清国语| 久久人人爽人人片av| 国产欧美日韩精品一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 午夜激情欧美在线| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品一区二区性色av| 亚洲18禁久久av| 亚洲欧美清纯卡通| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久a久久爽久久v久久| 波野结衣二区三区在线| 在线免费观看的www视频| 最后的刺客免费高清国语| 欧美成人午夜免费资源| 免费观看av网站的网址| 日韩三级伦理在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 日韩一区二区三区影片| 91精品国产九色| 日韩欧美一区视频在线观看 | 精品一区在线观看国产| 男人狂女人下面高潮的视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 人妻系列 视频| 少妇的逼水好多| 亚洲av中文av极速乱| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品第二区| 亚洲人成网站在线观看播放| 男人舔奶头视频| 色哟哟·www| 亚洲国产精品成人久久小说| 尾随美女入室| 91av网一区二区| 亚洲精品国产成人久久av| 婷婷色综合www| videos熟女内射| 九九在线视频观看精品| 亚州av有码| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 深爱激情五月婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 国产老妇女一区| 色吧在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| kizo精华| 亚洲自拍偷在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品久久久久久久久免| av天堂中文字幕网| 在线免费观看的www视频| 日本欧美国产在线视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲四区av| 免费观看精品视频网站| 久久99蜜桃精品久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久热精品热| 国产黄片视频在线免费观看| 精品久久久久久成人av| 成年版毛片免费区| 深夜a级毛片| 国产高清国产精品国产三级 | 日韩人妻高清精品专区| 看非洲黑人一级黄片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 日日啪夜夜撸| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产精品久久久久久av不卡| 三级国产精品片| 成人综合一区亚洲| 黄色日韩在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品人妻久久久影院| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久99久视频精品免费| 免费少妇av软件| 赤兔流量卡办理| 国产男女超爽视频在线观看| freevideosex欧美| 国产精品一及| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 中文字幕久久专区| 岛国毛片在线播放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久6这里有精品| 毛片一级片免费看久久久久| 久久精品国产亚洲av天美| 黄色配什么色好看| 午夜福利在线在线| 久久久久久久久大av| 国产亚洲精品久久久com| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 日本黄大片高清| 国产精品福利在线免费观看| 午夜免费激情av| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久色成人| 免费大片黄手机在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品酒店卫生间| 七月丁香在线播放| 精品一区二区三区视频在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 人妻少妇偷人精品九色| 99re6热这里在线精品视频| 热99在线观看视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 内射极品少妇av片p| 美女国产视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 激情五月婷婷亚洲| 高清毛片免费看| 欧美xxⅹ黑人| 成人午夜高清在线视频| 可以在线观看毛片的网站| 街头女战士在线观看网站| 大片免费播放器 马上看| 免费大片黄手机在线观看| 久久久久网色| 三级国产精品片| 一级爰片在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 日本免费在线观看一区| 亚洲最大成人中文| 午夜福利高清视频| 久久久久久久久久久免费av| 人妻一区二区av| 免费观看av网站的网址| 亚洲欧洲日产国产| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 国产探花在线观看一区二区| 精品国产三级普通话版| 三级毛片av免费| www.av在线官网国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美 日韩 精品 国产| 全区人妻精品视频| 免费大片18禁| 亚洲丝袜综合中文字幕| 七月丁香在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 性插视频无遮挡在线免费观看| 一级爰片在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 国产美女午夜福利| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 直男gayav资源| 国产永久视频网站| 日本一二三区视频观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 夫妻午夜视频| 水蜜桃什么品种好| 看黄色毛片网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 美女大奶头视频| 国产黄片视频在线免费观看| 99热全是精品| 中文字幕久久专区| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 国产在视频线精品| 天堂网av新在线| av网站免费在线观看视频 | 天堂av国产一区二区熟女人妻| eeuss影院久久| 成人av在线播放网站| 亚洲欧美日韩东京热| 一边亲一边摸免费视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 精品欧美国产一区二区三| 天天一区二区日本电影三级| 舔av片在线| av在线老鸭窝| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av.在线天堂| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲自拍偷在线| 亚洲精品日本国产第一区| 大香蕉久久网| 一夜夜www| 成人综合一区亚洲| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 男人舔奶头视频| 久久国内精品自在自线图片| av天堂中文字幕网| 在线观看免费高清a一片| 成人美女网站在线观看视频| 久久久午夜欧美精品| 国产黄片视频在线免费观看| 特大巨黑吊av在线直播| 99久久九九国产精品国产免费| 又大又黄又爽视频免费| 丰满少妇做爰视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 大话2 男鬼变身卡| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品久久久噜噜| 热99在线观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久九九精品影院| av福利片在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品人妻久久久久久| 国产成年人精品一区二区| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久国产乱子免费精品| 成年免费大片在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 午夜激情欧美在线| 男女边摸边吃奶| 2021少妇久久久久久久久久久| h日本视频在线播放| av在线天堂中文字幕| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一本一本综合久久| 身体一侧抽搐| 日本欧美国产在线视频| 黄色日韩在线| 午夜激情久久久久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 大香蕉久久网| 777米奇影视久久| 嘟嘟电影网在线观看| 全区人妻精品视频| 一级二级三级毛片免费看| 国产91av在线免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 色综合站精品国产| a级毛色黄片| 国内精品一区二区在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲欧美清纯卡通| 色尼玛亚洲综合影院| 国产成人精品久久久久久| 久久韩国三级中文字幕| 黄色配什么色好看| 日本免费a在线| 可以在线观看毛片的网站| 26uuu在线亚洲综合色| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜视频国产福利| 日本午夜av视频| 久久久久九九精品影院| 看黄色毛片网站| 亚洲国产av新网站| 国产单亲对白刺激| 日本色播在线视频| 如何舔出高潮| 日本午夜av视频| 日本黄色片子视频| 国产精品无大码| 亚洲国产成人一精品久久久| 22中文网久久字幕| 51国产日韩欧美| 我的老师免费观看完整版| 国产精品久久久久久av不卡| .国产精品久久| 亚洲国产精品成人综合色| 99re6热这里在线精品视频| 乱人视频在线观看| 91狼人影院| 日韩强制内射视频| 国产伦理片在线播放av一区| 青青草视频在线视频观看| 少妇的逼水好多| 日韩三级伦理在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲av成人精品一二三区| 婷婷色av中文字幕| 国产真实伦视频高清在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 简卡轻食公司| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 简卡轻食公司| 亚洲av中文av极速乱| 51国产日韩欧美| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 最近2019中文字幕mv第一页| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲成人一二三区av| 黄片无遮挡物在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲美女视频黄频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲图色成人| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 免费黄网站久久成人精品| 26uuu在线亚洲综合色| 午夜福利成人在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产91av在线免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| av在线老鸭窝| 日韩av免费高清视频| 亚洲三级黄色毛片| a级毛片免费高清观看在线播放| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲最大成人av| 国产又色又爽无遮挡免| 综合色丁香网| 国产成人精品福利久久| 免费观看无遮挡的男女| 人体艺术视频欧美日本| 好男人在线观看高清免费视频| 国产免费一级a男人的天堂| av女优亚洲男人天堂| av网站免费在线观看视频 | 夫妻性生交免费视频一级片| 能在线免费看毛片的网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲精品aⅴ在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品,欧美精品| 婷婷色av中文字幕| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲av福利一区| 国产欧美日韩精品一区二区| 精品一区在线观看国产| 欧美人与善性xxx| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美日本视频| 69人妻影院| 久久久久久久久久久免费av| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品一区二区性色av| 能在线免费观看的黄片| 日本与韩国留学比较| 欧美丝袜亚洲另类| 免费观看a级毛片全部| 特大巨黑吊av在线直播| 免费av毛片视频| 一级爰片在线观看| 男女国产视频网站| 国产一区二区三区综合在线观看 | 嫩草影院精品99| 国产成人一区二区在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 老司机影院毛片| 亚洲精品国产av成人精品| 国产av码专区亚洲av| 久久久久网色| 只有这里有精品99| 欧美极品一区二区三区四区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品国产成人久久av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一个人观看的视频www高清免费观看| .国产精品久久| 午夜福利视频1000在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久久性生活片| 日韩伦理黄色片| 亚洲精品一区蜜桃| 床上黄色一级片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美激情在线99| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品一区www在线观看| 午夜日本视频在线| 国产v大片淫在线免费观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲最大成人中文| 国产在视频线精品| 日韩精品青青久久久久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品久久久久久电影网| 成人一区二区视频在线观看| 深爱激情五月婷婷| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美三级亚洲精品| 性色avwww在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 一个人免费在线观看电影| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产av国产精品国产| 国产高清不卡午夜福利| 国产成人aa在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 插逼视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 免费少妇av软件| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久草成人影院| 亚洲av.av天堂| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 乱人视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 亚洲四区av| 只有这里有精品99| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 内射极品少妇av片p| 能在线免费看毛片的网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费观看在线日韩| 免费黄色在线免费观看| 在线观看一区二区三区| 国产色婷婷99| 免费大片18禁| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国内精品美女久久久久久| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av国产免费在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 色综合站精品国产| 三级经典国产精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩中字成人| 免费观看精品视频网站| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 三级国产精品片| 久久99热这里只有精品18| 日韩视频在线欧美| 一级毛片久久久久久久久女| .国产精品久久| 国产成人aa在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 成人美女网站在线观看视频| 观看美女的网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 韩国av在线不卡| 亚洲欧洲国产日韩| 国产在线男女| 国产av国产精品国产| 国内精品美女久久久久久| 女人被狂操c到高潮| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲丝袜综合中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 国产免费福利视频在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 美女黄网站色视频| 99热这里只有是精品50| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久久a久久爽久久v久久| 久久久久久久久久黄片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 美女国产视频在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲av免费在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 精品久久久久久电影网| 日日啪夜夜爽| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品456在线播放app| 人人妻人人澡欧美一区二区| 午夜激情欧美在线| 中文欧美无线码| 国产单亲对白刺激| eeuss影院久久| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲国产精品sss在线观看| 内地一区二区视频在线| 日日撸夜夜添| 亚洲在线观看片| 麻豆国产97在线/欧美| 午夜免费观看性视频| 97在线视频观看| 午夜视频国产福利| av在线天堂中文字幕| 天天一区二区日本电影三级| 毛片一级片免费看久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲成人中文字幕在线播放| 真实男女啪啪啪动态图| 午夜亚洲福利在线播放| 大话2 男鬼变身卡| 中文字幕制服av| 久久久久久久午夜电影| 久久久久久久久久人人人人人人| 三级国产精品片| 亚洲精品乱久久久久久| 国内精品一区二区在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品久久久久久电影网| 91狼人影院| 午夜精品在线福利| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产伦精品一区二区三区四那| 午夜福利在线观看吧| 免费看a级黄色片| 欧美一级a爱片免费观看看| 91久久精品国产一区二区成人| 男女边摸边吃奶| 在线观看人妻少妇| 日本爱情动作片www.在线观看| av网站免费在线观看视频 | 91av网一区二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| videossex国产| 亚洲欧美精品专区久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 六月丁香七月| 街头女战士在线观看网站| 日韩视频在线欧美| 天天躁日日操中文字幕| 久久99精品国语久久久| 精品一区二区三卡| 日本免费a在线| 欧美最新免费一区二区三区| 成人性生交大片免费视频hd| 久久国产乱子免费精品| av在线老鸭窝| 男女国产视频网站| 99久久九九国产精品国产免费| 一级毛片我不卡| 麻豆乱淫一区二区| 精品一区二区三区人妻视频| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久热久热在线精品观看| freevideosex欧美| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产单亲对白刺激| 日韩大片免费观看网站|