白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護(hù)研究

黃 展，李春豐，王 晶，何淑玲，姜 成，張羽男，時 慧，蔣 勇，江清林

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江佳木斯154003；2.佳木斯大學(xué)生命科學(xué)院，黑龍江佳木斯154007；3.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江佳木斯154007)

白頭翁為毛茛科植物(Pulsatilla chinensis(Bunge)Regel)，多年生草本，別名：打碗花、老翁花、奈何草、耗子花、毛姑朵花、老公花。分布在黑龍江、吉林、遼寧等省山崗與荒坡及田野間。白頭翁干燥根春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。白頭翁干燥根具有清熱解毒，涼血止痢，燥濕殺蟲的功效。對細(xì)菌及真菌等有不同抑制作用，白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷是否有保護(hù)作用尚未見報道。本實驗進(jìn)行白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷是否有保護(hù)作用研究。

1 材料與方法

1.1 材料

①試劑：四氯化碳(CCl4，分析純，重慶川江化學(xué)試劑廠，批號20120426)；正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH，分析純，上海紫業(yè)化工有限公司，批號20110312)；葵花護(hù)肝片(黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，批號110602)；丙二醛(Malondialdehyde；malonic dialdehyde；Propan edial，MDA)；黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase from buttermilk，XOD)；谷胱甘肽還原酶試劑盒(Glutathione Reductase Assay Kit上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號20100322)。

②藥物：白頭翁正丁醇提取物提取工藝流程：白頭翁粗粉→加95%乙醇熱回流提取3h→用布氏濾斗過濾，共提取3次，合并濾液靜置12 h→80℃R2003旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮→白頭翁提取物(BR)→水溶解混懸→正丁醇萃取→YC-015微型實驗室噴霧干燥機(jī)真空干燥備用。正丁醇組分加水超聲溶解定容10mL，即1mL，含生藥量5g。

③實驗動物：昆明種(KM)小鼠，60只，平均體質(zhì)量(20±2)g，由佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供。

④儀器722分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 急性肝損傷模型建立：昆明種(KM)小鼠，60只，平均體質(zhì)量(20±2)g，由佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供，采用0.1%CCl4花生油溶液10mL/kg，禁食不禁水24h后模型成功。

1.2.2 分組與給藥：采用隨機(jī)分組，①正常對照組：昆明種(KM)小鼠10只，喂飼普通飼料，灌胃生理鹽水1mL/100g·d；②急性肝損傷模型組(以下簡稱模型組)：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃生理鹽水1mL/100g·d；③葵花護(hù)肝片組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃0.5%葵花護(hù)肝片1mL/100g·d；④白頭翁正丁醇提取物低劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃5%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑤白頭翁正丁醇提取物中劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃10%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d；⑥白頭翁正丁醇提取物高劑量組：昆明種(KM)小鼠10只，灌胃15%白頭翁正丁醇提取物1mL/100g·d。以上6組分別每天灌胃給藥(ig)1次連續(xù)灌胃15d后，除正常對照組外，其它組小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg禁食不禁水，24h后造模成功，分別進(jìn)行生化測定及形態(tài)學(xué)檢查實驗觀察白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護(hù)效果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理，實驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，方差分析實驗數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)及肝臟系數(shù)影響結(jié)果，見表1。

表1 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清中ALT與AST及肝臟系數(shù)影響(x± s，n=10)

白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)及肝臟系數(shù)影響實驗方法是從模型成功小鼠由眼球后靜脈取血，測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)及取肝稱重計算肝臟系數(shù)(肝臟重量/體重)。實驗結(jié)果從表1中可以見到急性肝損傷模型組與正常對照組比較丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)顯著升高(P＜0.01)。白頭翁正丁醇提取物中、高劑量組與急性肝損傷模型組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)比較差異顯著(P＜0.01、P＜0.05)，表明白頭翁正丁醇提取物對急性肝損傷小鼠肝臟保護(hù)作用明顯。急性肝損傷模型組肝臟系數(shù)增大明顯，表明藥物對肝臟輕度腫脹有緩解作用。

2.2 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽還原酶(GSH)影響，見表2。

白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠血清中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)及谷胱甘肽還原酶(GSH)影響實驗方法，從模型成功小鼠肝左葉取病部肝組織制備10%肝組織勻漿，運用試劑盒測定血清中丙二醛(MDA)(n mol/mg)含量與黃嘌呤氧化酶(XOD)(U/g)及谷胱甘肽還原酶(GSH)(U/g)活性，722分光光度計測定。

實驗結(jié)果從表2中可以見到急性肝損傷模型組與正常對照組比較肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)活性顯著升高，谷胱甘肽還原酶(GSH)活性降低顯著(P＜0.01)。白頭翁正丁醇提取物中、高劑量組均可降低肝組織中丙二醛(MDA)與黃嘌呤氧化酶(XOD)水平，谷胱甘肽還原酶(GSH)活力提高顯著(P＜0.01)。

表2 白頭翁正丁醇提取物對肝損傷小鼠肝組織中MDA、XOD及GSH影響(x± s，n=10)

3 討論

肝損傷臨床表現(xiàn)腹腔內(nèi)出血與血液及膽汁引起腹膜刺激征，按損傷程度分真性肝裂傷與肝包膜下裂傷及中央型肝裂傷三種類型。小鼠肝損傷是研究白頭翁正丁醇提取物護(hù)肝作用及機(jī)制理想病理模型。四氯化碳(CCl4)引起小鼠肝損傷主要是代謝產(chǎn)生自由基作用，其機(jī)制是四氯化碳(CCl4)進(jìn)入小鼠體內(nèi)經(jīng)電子還原產(chǎn)生氯甲基及過氧化三氯甲基自由基攻擊脂質(zhì)細(xì)胞膜，肝臟中肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化形成肝損傷，表現(xiàn)為肝腫大，肝脂肪變性，肝硬化等病變。小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)是表示肝損傷主要指標(biāo)和肝細(xì)胞受損程度。

白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷保護(hù)研究中經(jīng)過小鼠灌胃0.1%CCl花生油溶液10mL/kg 24h肝損傷模型形成，表現(xiàn)為肝臟被膜分隔形成肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，肝細(xì)胞間血竇及中央靜脈擴(kuò)張明顯，肝細(xì)胞索排列不規(guī)律，肝臟組織呈點狀及碎片狀和橋接壞死，脂肪變性及肝細(xì)胞變性呈水樣，肝小葉有大量浸潤發(fā)炎細(xì)胞。實驗結(jié)果表明白頭翁正丁醇提取物中、高劑量對小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)與天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)及肝臟系數(shù)降低顯著，四氯化碳(CCl4)引起肝損傷形態(tài)學(xué)病變減輕，說明白頭翁正丁醇提取物對四氯化碳(CCl4)引起肝損傷小鼠保護(hù)作用顯著。本實驗的白頭翁正丁醇提取物中和高劑量組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞不顯著，肝細(xì)胞間血竇及中央靜脈擴(kuò)張不明顯，肝細(xì)胞腫脹壞死處不明顯，發(fā)炎浸潤細(xì)胞不多，肝臟組織呈點狀少量壞死。表明白頭翁正丁醇提取物對小鼠肝損傷有保護(hù)作用，這可能就是白頭翁正丁醇提取物保護(hù)小鼠肝損傷主要作用機(jī)制之一。

［1］王單，王淑英，吳銀萍，等.白頭翁提取物對CCl4小鼠肝損傷的保護(hù)作用［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2008，22(5)：34 37

［2］劉文馮，果劉夢，瑩林昶，等.白頭翁湯有效成分提取工藝的研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2008，17(1)：6 63

［3］石寶俊，李茜，張曉琦，等.中藥白頭翁地上部分的三萜皂苷成分［J］.藥學(xué)學(xué)報，2007，42(8)：862 866

［4］王海俠，鄭新勇，部盡.白頭翁阜苷 B4體外抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖并誘導(dǎo)其凋亡［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，31(10)：1481 1485

［5］陳國輝，姜峰玉，孫抒.原白頭翁素衍生物對人肝癌HepG-2細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用［J］.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報，2011，34(1)：31 33

［6］楊小龍，李世朋，王食出食出，等.白頭翁醇提取物對小鼠免疫功能的影響［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，29(4)：249 250

［7］莫少紅.白頭翁的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2001，24(5)：385 387

［8］鐘長斌，李祥.白頭翁的化學(xué)成分及藥理作用研究述要［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，(8)：1335 1339

［9］舒瑩，韓廣軒.中藥白頭翁的藥材、化學(xué)成分和藥理作用的研究［J］.藥學(xué)實踐雜志，2000，18(6)：387 389

［10］蔡鷹，陸瑜.白頭翁體內(nèi)抗腫瘤作用的實驗研究［J］.中草藥，1999，30(12)：929 931

［11］朱麗晶，錢曉萍，李敏，等.禹立霞白頭翁醇提物抗荷瘤鼠腫瘤血管生成作用的實驗研究［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011，19(12)：2382 2385

［12］閔清，白育庭，舒思潔，等.延胡索乙素對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國中藥雜志，2006，31(6)：483 485

［13］林旭楷，許森源，張奕鵬，等.胃舒散對四氯化碳性肝損傷小鼠的影響［J］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2004，21(5)：385 388

［14］黃根牙，倪潤洲，張家棟，等.凱西萊對四氯化碳致小鼠肝毒性保護(hù)作用的研究［J］.南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，24(4)：383 385