胃癌中ERCC1、EGFR的表達與預(yù)后的關(guān)系

陳玉芳 周林艷 萬美珍

近年來研究發(fā)現(xiàn)DNA損傷修復(fù)基因與非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌等多種腫瘤的發(fā)生、化療反應(yīng)性及預(yù)后有關(guān)[1]。核苷酸切除修復(fù)交叉互補組1(excision repair cross-complementing group 1,ERCC1)是DNA修復(fù)系統(tǒng)中重要的修復(fù)因子[2]。而表皮生長因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)通過信號轉(zhuǎn)導控制腫瘤的生長，并與新生血管生成、腫瘤生長侵襲及腫瘤的靶向治療有密切關(guān)系[3]。本研究采用免疫組化方法檢測了ERCC1、EGFR在胃癌中的表達，并分析它們在胃癌發(fā)生發(fā)展中及在預(yù)后評估中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2005年-2010年行根治性手術(shù)，且術(shù)后病理證實為胃癌的52例標本?；颊咝g(shù)前均未接受放化療等抗腫瘤治療。52例中男性35例，女性17例，年齡37～79歲，中位年齡62歲。病理診斷均為腺癌，其中高中分化15例，低分化37例。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。同時選取癌旁正常組織作為對照。

1.2 ERCC1、EGFR的檢測及結(jié)果判定方法

標本均經(jīng)10.0%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，采用免疫組織化學SP法檢測ERCC1、EGFR蛋白。按SP試劑盒說明書進行操作。已知陽性片在同一條件下染色作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

結(jié)果判定：以腫瘤細胞核內(nèi)或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為ERCC1蛋白表達陽性細胞。在高倍視野(400×)下，計數(shù)1 000個腫瘤細胞中陽性細胞數(shù)。參照Wachters等[4]的方法來分析ERCC1的表達水平。陰性表達：不表達或陽性細胞數(shù)≤10%；陽性表達：陽性細胞數(shù)>10%。EGFR蛋白著色定位于細胞質(zhì)及細胞膜上，評分根據(jù)著色的細胞所占百分比和染色強度綜合評價，≤10%記為(-)；>10%淡黃色記為(+)，棕黃色記為(++)，棕褐色記為(+++)，將(-)和(+)記為陰性表達，將(++)和(+++)記為陽性表達。所有切片均采用雙盲法由2位病理科醫(yī)生觀察判斷。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析處理，各組間率的比較采用卡方檢驗和Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 ERCC1、EGFR在胃癌組織中的表達

胃癌組織中ERCC1陽性表達率分別為30.8%(16/52)，EGFR陽性表達率分別為26.9%(14/52)，癌旁組織中ERCC1陽性表達率為67.3%(35/52)，EGFR陽性表達率為0%。經(jīng)統(tǒng)計學分析，癌組織與癌旁組織中ERCC1、EGFR的表達差異均有統(tǒng)計學意義。

2.2 癌組織中ERCC1、EGFR蛋白表達與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系

胃癌中ERCC1的表達與患者性別、年齡、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，但與腫瘤分化程度有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義。EGFR的表達與患者性別、年齡、浸潤深度、腫瘤大小、腫瘤分化程度無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義(表1)。

2.3 胃癌組織中ERCC1與EGFR表達的相關(guān)性

胃癌組織中，ERCC1與EGFR的表達不具有相關(guān)性(P>0.05)。

表1 ERCC1、EGFR與胃癌臨床病理因素的關(guān)系(例，%)

3 討論

NER(核酸切除修復(fù)系統(tǒng))是DNA最主要的修復(fù)機制，其功能異常在腫瘤的發(fā)病和鉑類制劑耐藥中發(fā)揮重要作用。ERCC1不僅是NER活性的標志性基因，也是細胞存活必須的DNA修復(fù)基因。近年來有研究發(fā)現(xiàn)：ERCC1的表達與胃癌預(yù)后及鉑類化療耐藥有關(guān)，其可以作為判斷預(yù)后的重要指標。Matsubara 等[5]認為ERCC1是進展期胃癌預(yù)后評估的有效指標。我們對52例術(shù)前未接受過任何抗腫瘤治療的胃癌患者的研究顯示ERCC1在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達有統(tǒng)計學差異。ERCC1在胃癌組織中的表達率較癌旁組織中明顯下降，這表明ERCC1低表達導致核酸切除修復(fù)能力下降，從而增加了胃癌發(fā)生的風險。因此檢測該基因的表達可以作為判斷腫瘤易感性的1個有價值的生物標志。這個結(jié)論與國內(nèi)外文獻是一致的。但相對于國內(nèi)部分文獻，本文ERCC1的表達率偏低，這可能與標本的處理、實驗方法的不同以及樣本量有關(guān)。Ozkan等[6]報道ERCC1的表達率為31.0%，與本文結(jié)果基本一致。目前關(guān)于ERCC1與胃癌臨床病理特征的關(guān)系文獻報道很少，且欠一致。有國內(nèi)文獻[7]發(fā)現(xiàn)ERCC1在癌旁組織中的表達率高于癌組織，其與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度有相關(guān)性。本文研究顯示ERCC1與腫瘤的大小，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，浸潤深度及患者的年齡、性別均無關(guān)，但與腫瘤的分化程度有關(guān)，分化程度越差，ERCC1表達的陽性率越低，表明ERCC1低表達相對分化程度差，提示隨著ERCC1表達降低，對細胞DNA損傷的修復(fù)能力減弱，可能引起惡性腫瘤具有更壞的惡性表型，表現(xiàn)為分化程度差，生長速度快，腫瘤預(yù)后不良。

EGFR是1個跨膜受體，與其配體結(jié)合后促進細胞分裂和增生。EGFR過度表達見于包括消化系統(tǒng)腫瘤在內(nèi)的人類多種惡性腫瘤，并和腫瘤發(fā)生發(fā)展、增殖轉(zhuǎn)移及血管形成密切相關(guān)。Casanova 等[8]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤的演進過程中，去除EGFR的作用會阻礙血管的進一步發(fā)展，且可增加腫瘤細胞的凋亡數(shù)。一般認為，正常胃黏膜組織EGFR不表達，癌變時可明顯升高。Kopp等[9]研究顯示胃癌中EGFR過表達是預(yù)后不良的獨立危險因素。本研究顯示胃癌中的EGFR陽性表達明顯高于癌旁胃組織，兩者表達存在顯著性差異，并說明EGFR過表達與細胞癌變有關(guān)，在腫瘤形成中起一定作用。本組研究只發(fā)現(xiàn)EGFR表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，說明EGFR表達陽性的胃癌更容易發(fā)生周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，因此EGFR表達可作為胃癌預(yù)后的預(yù)測指標，而它與腫瘤的大小，浸潤深度，分化程度及患者的年齡、性別均無關(guān)。

關(guān)于ERCC1和EGFR表達是否具有相關(guān)性存在爭議，有作者在大腸癌研究中認為兩者不具有相關(guān)性。而國外作者發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌中兩者表達具有相關(guān)性，EGFR突變常發(fā)生在ERCC1陰性表達的患者中[10]。本研究顯示EGFR陽性表達的癌組織常常表現(xiàn)為ERCC1的陰性表達，但可能樣本量的關(guān)系，兩者表達不具有相關(guān)性，下一步我們將加大樣本量，深入探討兩者之間的關(guān)系。

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