腹腔鏡超聲引導(dǎo)下射頻消融術(shù)對(duì)肝癌患者免疫功能的影響

袁艷紅

(張家港澳洋醫(yī)院超聲科，江蘇 張家港 215600)

肝癌為臨床較為常見的惡性腫瘤之一，因高致死率、高復(fù)發(fā)率及高轉(zhuǎn)移率廣受關(guān)注〔1〕。臨床調(diào)查結(jié)果顯示〔2〕，多數(shù)患者入院時(shí)已錯(cuò)過根治性手術(shù)的時(shí)間窗，僅20%～30%的患者可獲得切除機(jī)會(huì)。射頻消融術(shù)(RFA)是隨腫瘤微創(chuàng)治療學(xué)發(fā)展起來的新技術(shù)，屬物理療法，無藥源性刺激，藉高溫或低溫使腫瘤組織凝固性壞死，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用靶向性強(qiáng)、安全性高，可在微侵襲的前提下取得較高的治療效果；此外，RFA可能介導(dǎo)了患者的細(xì)胞免疫功能變遷〔3，4〕。隨著現(xiàn)代影像醫(yī)學(xué)及內(nèi)鏡醫(yī)學(xué)的發(fā)展，腹腔鏡超聲RFA(LURFA)的出現(xiàn)，突破了常規(guī)RFA不可直視和觸覺缺失兩大限制，進(jìn)一步拓寬了RFA的適用范圍，已成為當(dāng)前醫(yī)療水平下小病灶肝癌患者非外科治療的首選方法〔5〕。本研究重點(diǎn)從T細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清免疫因子變遷兩方面探討ULRFA對(duì)肝癌患者免疫功能的影響。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取本院收治、經(jīng)臨床、影像及病理聯(lián)檢確診為肝癌的患者37例為觀察組；其中男21例，女16例；年齡33～75〔平均(50.3±8.94)〕歲；病程1～7年，平均(4.1±1.7)年；病灶范圍：2.7 cm×3.6 cm～6.2×8.9 cm，平均(16.7±4.32)cm2。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照第8屆全國肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：彌漫性肝癌患者；肝外轉(zhuǎn)移患者；肝癌治療史患者；血液系統(tǒng)疾病患者；嚴(yán)重內(nèi)科合并疾病患者等。同時(shí)，選取同期入院體檢的29例同期健康志愿者為對(duì)照組；其中男17例，女12例；年齡31～72〔平均(48.7±9.10)〕歲。兩組患者年齡、性別等一般資料方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2方法 37例患者均在超聲診斷儀(Volusion-730,GE)和腹腔鏡(A50000A,OLYMPUS)的共同引導(dǎo)下進(jìn)行RFA治療：(1)患者根據(jù)腫瘤位置選擇合適體位，本組病例左肝病灶取左前斜位，右側(cè)病灶取左側(cè)臥位。(2)全麻后，建立CO2氣腹，入鏡探查，掌握病灶位置、數(shù)量、分布形態(tài)及其與周邊組織的解剖關(guān)系。(3)選擇合適的穿刺路徑，在超聲和腹腔鏡的共同引導(dǎo)下將射頻治療針植入瘤體組織，啟動(dòng)射頻治療儀(CelonAGPower,Olympus)，以10 w為基點(diǎn)，梯度設(shè)置射頻能量，根據(jù)患者個(gè)體情況，增加10～20 w/min，阻抗上升為組織固化標(biāo)志。(4)對(duì)于小病灶患者，可采用單點(diǎn)穿刺，對(duì)于較大病灶及多瘤體患者，可制訂多個(gè)穿刺點(diǎn)，以涵蓋瘤體四周為宜，同時(shí)謹(jǐn)慎處理周邊正常生理組織，避免醫(yī)源性損傷。(5)治療過程中密切監(jiān)測(cè)患者血壓、心電、動(dòng)脈血?dú)?、疼痛程度等基本生命體征，及時(shí)給予降壓、補(bǔ)液、吸氧、鎮(zhèn)痛等對(duì)癥處理，治療結(jié)束后，禁食水4～12 h，并進(jìn)行保肝治療。

1.3觀察指標(biāo) 各組研究對(duì)象均于清晨8∶00～9∶00時(shí)取空腹靜脈血，其中肝癌患者于治療前1 d、及治療后1 w分兩次取血，健康志愿者于體檢當(dāng)日取血。所得血樣室溫靜置40 min以上，4 000 r/min離心，取血清，-80℃存儲(chǔ)，待檢。采用流式細(xì)胞儀(CyFlow?Counter,Partec)測(cè)定T細(xì)胞亞群T、Ts、Th、NK、及CIK細(xì)胞計(jì)數(shù)；采用ELISA試劑盒測(cè)定血清免疫因子水平。其中，Th1細(xì)胞分泌因子IL-2、IFN-γ、TNF-α及Th2細(xì)胞分泌因子IL-4、IL-10試劑盒由上海微晶生物科技有限公司提供，腫瘤細(xì)胞分泌因子sIL-2R、TGF-β試劑盒由上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司提供。

2 結(jié) 果

2.1T細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù) 治療前，患者的Ts細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而T、Th、NK、CIK細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；治療后，患者的Ts細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著降低(P<0.05)，T、Th、NK、CIK細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著升高(P<0.05)。見圖1。

2.2Th1細(xì)胞分泌因子水平 治療前，患者的血清IL-2、IFN-γ、TNF-α水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；治療后，各項(xiàng)指標(biāo)均得以顯著升高(P<0.05)。見圖2。

2.3Th2細(xì)胞分泌因子水平 治療前，患者的血清IL-4、IL-10水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；治療后，兩項(xiàng)指標(biāo)均得以顯著升高(P<0.05)。見圖3。

2.4腫瘤細(xì)胞分泌因子水平 治療前，患者的血清sIL-2R、TGF-β水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；治療后，兩項(xiàng)指標(biāo)均得以顯著升高(P<0.05)；見圖4。

圖1 各組患者T細(xì)胞亞群細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

圖2 各組患者Th1型輔助細(xì)胞分泌因子血清濃度比較

圖3 各組患者Th2型輔助細(xì)胞分泌因子血清濃度比較

圖4 各組患者腫瘤細(xì)胞分泌因子血清濃度比較

3 討 論

作為手術(shù)之外的微創(chuàng)治療方式，LURFA集治療靶向化、定位可視化及損傷最小化于一身，在臨床有效性和安全性上均獲得了確切的保障〔6，7〕。近年研究〔8〕結(jié)果顯示，LURFA的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)在于清除病灶的同時(shí)，對(duì)患者的機(jī)體免疫功能有所強(qiáng)化。機(jī)體的抗腫瘤免疫以細(xì)胞免疫為主，作為細(xì)胞免疫的主效應(yīng)細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞亞群在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重用作用。已有研究表明〔9～11〕，多數(shù)肝癌患者存在不同程度的免疫損傷，細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，表現(xiàn)為抑制性T細(xì)胞Ts增多、輔助性T細(xì)胞Th減少、抗原呈遞功能低下、腫瘤殺傷性免疫因子缺失或失活等多個(gè)方面。

本研究結(jié)果提示肝癌患者的機(jī)體處于Th/Ts失衡狀態(tài)，Th向Ts的漂移削弱了T細(xì)胞的抗原呈遞功能及NK與CIK的細(xì)胞活性。其次，提示肝癌患者的機(jī)體處于Th1/Th2失衡狀態(tài)，Th1向Ts的漂移導(dǎo)致IL-2、IFN-γ、TNF-α等腫瘤殺傷效應(yīng)因子缺失〔12〕。再次，提示肝癌患者外周血細(xì)胞免疫水平的抑制狀態(tài)可能源于腫瘤細(xì)胞分泌因子的長期刺激。另外，LURFA對(duì)肝癌患者的各項(xiàng)免疫變遷均有一定的糾正作用，分析與兩方面機(jī)制有關(guān)：(1)經(jīng)消融刺激，可直接引起細(xì)胞蛋白質(zhì)變性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凝固性壞死〔13〕，壞死細(xì)胞作為異體組織，一定程度上刺激了白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等固有免疫細(xì)胞的吞噬功能，同時(shí)，利于暴露腫瘤細(xì)胞抗原，進(jìn)一步提高抗原提呈效率。(2)LURFA對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用直接阻斷了腫瘤細(xì)胞分泌因子的分泌，一定程度上緩解了機(jī)體的免疫負(fù)擔(dān)，利于免疫機(jī)能的自我修復(fù)。

綜上，基于腫瘤細(xì)胞分泌因子的長期刺激，肝癌患者外周血細(xì)胞免疫水平處于抑制狀態(tài)，輔助型T細(xì)胞由Th1向Th2漂移；LURFA可通過激發(fā)抗原呈遞，抑制sIL-2R、TGF-β分泌等多重途徑調(diào)整Ts/Th、Th1/Th2比例，強(qiáng)化患者的細(xì)胞免疫功能。

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