同型半胱氨酸及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)性

鞠紅艷 白 洋

(深圳市寶安區(qū)第二人民醫(yī)院，廣東 深圳 518102)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種病因尚未清楚的直腸和結(jié)腸慢性非特異性疾病，病變損傷結(jié)腸黏膜及黏膜下層，多位于乙狀結(jié)腸和直腸，也可延伸至降結(jié)腸，甚至整個(gè)結(jié)腸。UC病程漫長，常反復(fù)發(fā)作。同型半胱氨酸(Hcy)系甲硫氨酸代謝產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，是一種生物活性極高的分子。Hcy可通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激促進(jìn)炎性反應(yīng)進(jìn)程，并引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)而有助于腸黏膜上皮炎癥狀態(tài)的維持，另外Hcy還可調(diào)節(jié)腸道菌群和腸黏膜間的相互作用。目前國外研究已經(jīng)證實(shí)，Hcy及Hcy代謝酶基因多態(tài)性與UC相關(guān)Hcy與細(xì)胞癌變的關(guān)系,已引起廣泛重視〔1，2〕。本研究旨在闡明Hcy在UC病因機(jī)制中的作用，同時(shí)探討血漿Hcy及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸、維生素B12水平與UC相關(guān)性，為用葉酸、維生素B12補(bǔ)充療法治療UC提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2011年1月至2012年12月UC患者60例為觀察組，均經(jīng)內(nèi)鏡和病理確診，男32例，女28例，患者年齡55～78歲，平均年齡(58.12±7.49)歲，排除病例為糖尿病、慢性肝炎及其他癌癥患者。選取同期健康體檢人員60例作為對照組，男女各30例，平均年齡(68.29±7.33)歲。兩組人群性別、年齡等比較無顯著差異(P>0.05)，有可比性。

1.2主要指標(biāo)和方法 所有入選者早晨分別抽取空腹外周血5 ml，肝素抗凝，低溫下2 500 r/min離心10 min，取上層血清待測。采用循環(huán)酶法測定Hcy濃度(試劑由北京九強(qiáng)公司提供)；應(yīng)用高效液相色譜儀器(Waters 公司生產(chǎn))，放射免疫法測量葉酸及Vit B12水平(試劑由德國拜耳公司提供)。觀察組患者治療后進(jìn)行以上指標(biāo)檢測。所有實(shí)驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按說明書操作。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)及甲硫氨酸合成酶(MS)的基因多態(tài)性采用RT-PCR方法測定〔3，4〕：晨分別抽取空腹外周血5 ml，DNA提取，用紫外分光光度計(jì)檢測其濃度。RT-PCR試劑盒與引物合成(武漢博士得生物工程有限公司)，總蛋白提取試劑盒SBS Genetech公司；PCR儀(德國Biometra公司)；MTHFR：C677T引物序列，上游：5c-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3c，下游：5c-AGGACGGTCCGGTGAGAGTG-3c；MS：A2756G引物序列：上游：5c-CATGGAAGAATATGAAGATATTAGA-3c，下游： 5c-GAACTAGAAGACAGAAATTCTCTA-3c；91℃ 預(yù)變性和變性各2 min，56℃退火1 min、74℃ 45 s 30個(gè)循環(huán)、72℃ 5 min、4℃ 12 h，cDNA 產(chǎn)物置于-20℃保存。3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組Hcy、葉酸和維生素B12水平比較 觀察組Hcy水平高于對照組(P<0.05)；觀察組葉酸和維生素B12均低于對照組(P<0.05)。觀察組治療后Hcy低于對照組(P<0.05)；觀察組治療后葉酸和維生素B12均高于對照組，差異具有顯著性(P<0.05)。見表1。

2.2兩組MTHFR和MS基因型頻率及等位基因頻率比較 兩組MTHFR和MS基因型頻率及等位基因頻率比較差異顯著(P<0.05)，見表2。

2.3UC患者各項(xiàng)指標(biāo)Logistic回歸分析 對UC患者各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行Logistic回歸分析，血清葉酸、維生素B12、MTHFR和MS作為自變量分別賦值，將UC患者Hcy作為因變量，進(jìn)行Logistic分析，UC患者血清Hcy與MTHFR和MS、葉酸和維生素B12等明顯相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表1 兩組Hcy、葉酸和維生素B12水平比較

表2 兩組MTHFR和MS基因型頻率及等位基因頻率比較〔n(%)，n=60〕

表3 UC患者各項(xiàng)指標(biāo)Logistic回歸分析

3 討 論

UC目前原因尚不明確，在遺傳物質(zhì)和環(huán)境因素的基礎(chǔ)上，由于各種微生物抗原的刺激，激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞因子平衡受到破壞，各種炎癥細(xì)胞活化而導(dǎo)致腸組織的慢性炎癥反應(yīng)，常合并不同程度的營養(yǎng)吸收障礙,尤其是維生素類的吸收。主要臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、膿血便、高熱、里急后重等胃腸道系統(tǒng)反應(yīng)。Hcy是一種含巰基氨基酸，在細(xì)胞內(nèi)由蛋氨酸代謝脫去甲基后形成，是甲硫氨酸去甲基化過程中的產(chǎn)物，有研究表明主要受葉酸、維生素B12水平以及主要相關(guān)代謝酶的遺傳多態(tài)性影響〔5〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示UC患者Hcy升高與維生素B12和葉酸負(fù)相關(guān)。一方面Hcy具有促炎癥和免疫調(diào)節(jié)作用,誘發(fā)和促進(jìn)炎癥和免疫反應(yīng)，另一方面Hcy 在蛋氨酸合成酶作用下，以葉酸和維生素B12為輔助因子，可發(fā)生甲基化，再合成蛋氨酸，一旦機(jī)體內(nèi)缺乏葉酸，尤其是N5-甲基四氫葉酸的缺乏，可導(dǎo)致蛋氨酸循環(huán)受阻，造成Hcy水平的升高。觀察組治療后葉酸和維生素B12升高，Hcy降低，說明Hcy的減少與葉酸、維生素B12有關(guān)，結(jié)腸炎癥或免疫力低下時(shí)，葉酸和維生素B12減少，導(dǎo)致血漿Hcy 堆積〔6，7〕。

血漿Hcy水平除受血漿葉酸、維生素B12等影響，還與其代謝酶基因遺傳多態(tài)性有關(guān)，MTHFR蛋氨酸代謝中的一個(gè)關(guān)鍵酶、MSR等是體內(nèi)催化Hcy代謝再甲基化代謝途徑的關(guān)鍵酶。Hcy代謝酶基因突變引起的酶活性缺陷或下降影響而血Hcy 水平〔8，9〕。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組MTH FR 基因型頻率及等位基因頻率差異顯著。人MTHFR基因目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)20余種該基因的突變,其中最常見的是C677T點(diǎn)突變，造成堿基T替換了C,其編碼的氨基酸也由纈氨酸代替了丙氨酸，突變可直接影響酶的活性和耐熱性,從而導(dǎo)致同型半胱氨酸的轉(zhuǎn)硫基和甲基化過程出現(xiàn)障礙，使MTHFR的活性減弱，造成血中Hcy的代謝異常。MS是一種維生素B12依賴酶，它催化Hcy再甲基化成蛋氨酸，該酶基因的D919G 突變導(dǎo)致血漿Hcy降低。MS基因第2756位A和G突變導(dǎo)致高Hcy 血癥〔10，11〕。因此，Hcy代謝酶的基因多態(tài)性可以影響Hcy的活性。Logistic分析也顯示，UC患者血清Hcy與MTHFR和MS、葉酸和維生素B12等相關(guān)因素有關(guān)。提示在對UC患者的治療過程中增加葉酸和維生素B12有利于Hcy的降低。

綜上所述，UC患者中Hcy升高，葉酸和維生素B12濃度降低，Hcy及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與可能與UC有密切關(guān)系。

4 參考文獻(xiàn)

1黃 慧.惡性腫瘤患者血清同型半胱氨酸的變化〔J〕.東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010；29(1):88-92.

2陳冬妹，張滿芬，肖 文.血漿同型半胱氨酸和血清葉酸水平與結(jié)直腸腺瘤性息肉相關(guān)性研究〔J〕.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2011；20(1)：58-9.

3李致遠(yuǎn)，姜瑞霞.血漿同型半胱氨酸、葉酸及維生素B12聯(lián)合檢測在治療腦梗死患者中的臨床應(yīng)用〔J〕.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012；33(15):1898-9.

4寧 楨.潰瘍性結(jié)腸炎患者血清同型半胱氨酸水平的分析〔J〕.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013；34(6)：727-8.

5李芊蔚，劉春英.多種指標(biāo)聯(lián)合檢測對潰瘍性結(jié)腸炎的診斷意義〔J〕.中國實(shí)用醫(yī)藥，2013；8(3)：14-5.

6弓景波，王新興，杲修杰，等.應(yīng)激對同型半胱氨酸關(guān)鍵代謝酶活性的影響〔J〕.營養(yǎng)學(xué)報(bào),2013；35(3):246-9.

7Chen M，Mei Q，Xu J,etal.Detection of melatonin and homocysteine simultaneously in ulcerative colitis〔J〕.Clin Chim Acta,2012；413(1-2):30-3.

8孫承軍.高同型半胱氨酸血癥研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用心腦肺血管病雜志，2010；18(7)：1008-10.

9盧 冬.同型半胱氨酸及其代謝酶基因多態(tài)性與心血管病關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012；9(7)：844-5.

10Niedzielska E，Wacoawek-Tompol J，Matkowska-Kocjan A,etal.The influence of genetic RFC1，MS and MTHFR polymorphisms on the risk of acute lymphoblastic leukemia relapse in children and the adverse effects of methotrexate〔J〕.Adv Clin Exp Med,2013；22(4):579-84.

11張 蕾，孫 浩.同型半胱氨酸及其代謝酶亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性在傣族高血壓及正常人群的分布研究〔J〕.中國全科醫(yī)學(xué)，2013；16(9C)：3183-6.