姜黃素對C-33A人子宮頸癌細(xì)胞株增殖的影響及其相關(guān)機(jī)制

郭絮飛

(四平市婦嬰醫(yī)院，吉林 四平 136000)

子宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤,由于近年來性傳播疾病的蔓延,子宮頸癌的發(fā)病率又有上升和年輕化趨勢。目前治療子宮頸癌以手術(shù)為主，但根治術(shù)的5年生存率較低。子宮頸癌對放療的敏感性具有個體差異,且放療后易出現(xiàn)局部轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，因此尋找有效的子宮頸癌化療藥物具有重要意義。本研究觀察姜黃素對人子宮頸癌C-33A細(xì)胞的體外作用,旨在為姜黃素治療子宮頸癌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 人子宮頸癌C-33A細(xì)胞株購自上海艾研生物科技有限公司。姜黃素購自美國Sigma公司；5%四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT 溶液,上海華美生物工程公司);胰蛋白酶、RMPI 1640 培養(yǎng)基、小牛血清(武漢凌飛生物公司)。

1.2細(xì)胞的培養(yǎng) 人子宮頸癌Hela細(xì)胞株的培養(yǎng)采用RPMI 1640培養(yǎng)液，內(nèi)含10%滅活小牛血清，常規(guī)培養(yǎng)于37℃、5% CO2、飽和濕度的孵箱中，用0.25%胰酶消化傳代。

1.3MTT 檢測 以每孔1×104個C-33A人子宮頸癌細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，分為空白組(調(diào)零)、姜黃素實(shí)驗(yàn)組(10、20、30 μmol/L) 和對照組(不加藥物的細(xì)胞)，分別培養(yǎng)12、24、48、72、96 h后加入MTT液，再培養(yǎng)4 h，吸棄孔中的培養(yǎng)上清,每孔加入150 μl DMSO，混勻10 min,在酶聯(lián)免疫檢測分析儀570 nm處測定各孔吸光度值(A)，抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均A值/對照組平均A值)×100%。重復(fù)3次取平均值。

1.4ELISA法檢測 ELISA法檢測姜黃素對子宮頸癌C-33A細(xì)胞96 h培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素(IL)-6、單核細(xì)胞趨化因子(MCP)-1蛋白表達(dá)的影響。嚴(yán)格按試劑盒說明中的操作步驟進(jìn)行，用酶標(biāo)儀在450 nm處測吸光值(OD)，根據(jù)樣品的OD值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。

2 結(jié) 果

2.1姜黃素對C-33A細(xì)胞增殖的影響 見表1。姜黃素的時間劑量依賴性方式抑制C-33A細(xì)胞增殖，與對照組比較，各組差異有顯著性意義(P<0.05)；與同一組12 h 比較，各組96 h培養(yǎng)后細(xì)胞增殖差異有顯著性意義(P< 0.05)。

表1 不同劑量姜黃素作用不同時間對C-33A細(xì)胞增殖的影響

2.2姜黃素對子宮頸癌C-33A細(xì)胞96 h培養(yǎng)上清液中IL-6、MCP-1蛋白表達(dá)的影響 IL-6、MCP-1在子宮頸癌C-33A細(xì)胞表達(dá)〔(32.43±6.16)、(37.51±4.32) μg/L〕，較對照組細(xì)胞〔(73.16±6.24)、(66.81±3.98) μg/L〕分別下降49.1%、52.1%(P<0.05)。

3 討 論

子宮頸癌是女性生殖器官發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與腫瘤細(xì)胞的惡性增殖及腫瘤細(xì)胞的凋亡減少有關(guān)。隨著對細(xì)胞凋亡研究的深入和發(fā)展,人們逐漸認(rèn)識到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是治療腫瘤性疾病的一種有效的方法和手段。近年,植物來源的抗腫瘤藥在新藥開發(fā)上顯示了巨大潛力。姜黃素來源廣泛,價格低廉,無毒副作用，可以用于預(yù)防和治療腫瘤，對多種腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生、增殖、轉(zhuǎn)移均具有抑制作用，其可能的作用機(jī)制有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制血管生成、改變細(xì)胞受體連接、阻斷腫瘤細(xì)胞的生長信號通路等〔1～3〕。本實(shí)驗(yàn)中，不同劑量姜黃素作用于子宮頸癌C-33A細(xì)胞，均可抑制子宮頸癌C-33A細(xì)胞增殖。

生長因子、前列腺素等炎癥因子可通過誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子/趨化因子調(diào)節(jié)嗜中性粒細(xì)胞浸潤到腫瘤，以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境并改變腫瘤血管的通透性〔4，5〕等機(jī)制促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。據(jù)文獻(xiàn)報告，lL-6、MCP-1與宮頸癌有關(guān)〔6～9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，姜黃素可抑制C-33A人子宮頸癌細(xì)胞的增殖，與其抗炎癥因子IL-6、MCP-1的蛋白表達(dá)降低有關(guān)。具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

4 參考文獻(xiàn)

1鄭麗端， 童強(qiáng)松， 吳翠環(huán).姜黃素誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞株A2780凋亡及其分子機(jī)制的研究〔J〕.癌癥,2002；21(12):1296-300.

2許 剛,黃 文.姜黃素防治腫瘤的機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·生理病理科學(xué)與臨床分冊,2003；23(2):152-4.

3盛柳青，顏繼忠，梁萬根.姜黃素研究進(jìn)展及應(yīng)用概況〔J〕.中國西部科技雜志，2006；(4):14-5.

4Wallace AE，Sales KJ，Catalano RD，etal.Prostaglandin F2alpha-F-prostanoid receptor signaling promotes neutrophil chemotaxis via chemokine (C-X-C Motif) Ligand 1 in endometrial adenocarcinoma〔J〕.Cancer Res，2009;69:5726-33.

5Sutherland JR，Sales KJ，Jabbour KN，etal.Seminal plasma enhances cervical adenocarcinoma cell proliferation and tumour growth in vivo〔J〕.PLoS One，2012;7(3)：e33848.

6Wei LH，Kuo ML，Chen CA，etal.Interleukin-6 in cervical cancer：the relationship with vascular endothelial growth factor〔J〕.Gynecol Oncol，2001;82(1):49-56.

7Katrin H，Bladimiro RO，Gilles B，etal.Regulation of MCP-1 chemokine transcription by p53〔J〕.Mol Cancer，2010；9：82.

8Kleine-Lowinski K，Rheinwald JG，F(xiàn)ichorova RN，etal.Selective suppression of monocyte chemoattractant protein-1 expression by human papillomavirus E6 and E7 oncoproteins in human cervical epithelial and epidermal cells〔J〕.Int J Cancer，2003;107:407-15.

9Lengert M，Albrecht J，Kleine K，etal.Differential regulation of the JE gene encoding the monocyte chemoattractant protein (MCP-1) in cervical carcinoma cells and derived hybrids〔J〕.J Virol，1994;68:2142-50.