虎射利咽含片的抗炎、鎮(zhèn)痛作用及對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響

秦莉花 吳艷飛 陳曉陽(yáng)，3 黃 寬 李 晟 葉麗芝

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

實(shí)驗(yàn)研究表明，虎射利咽方具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌等作用〔1～3〕。臨床使用發(fā)現(xiàn)，該方在治療急慢性咽炎效果顯著，尤其是在治療濕熱型咽炎效果尤為突出。本實(shí)驗(yàn)從抗炎、鎮(zhèn)痛以及免疫學(xué)方面研究虎射利咽含片的作用。

1 材料與方法

1.1材料 健康KM小鼠，SPF級(jí)，體重18～22 g，雌雄皆用；健康SD大鼠，雄性，SPF級(jí)，體重180～220 g，以上動(dòng)物由長(zhǎng)沙市開(kāi)福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部代購(gòu)，動(dòng)物合格證號(hào)：scsk(豫)2009-0012。 虎射利咽含片組成方(自制)，阿司匹林腸溶片(長(zhǎng)春銀諾克藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20053136)、銀黃含化滴丸(山西千匯藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20080475)、注射用環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32020857)以上藥物用時(shí)均由生理鹽水配成所需濃度。二甲苯(500 ml/瓶，天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)，批號(hào)：20080921)；角叉菜膠(100 g/瓶，Sigma公司，批號(hào)：45F- 0427)；其他試劑均為市售分析純。 打孔器直徑(7 mm)；電子天平(德國(guó)SartoriuS公司產(chǎn)品，型號(hào)：BP211D)；電熱三用水箱(北京市醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng))；GJ28402型熱板測(cè)痛儀(浙江寧海白行電子醫(yī)藥儀器廠(chǎng))；UV-9600型分光光度計(jì)(北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))責(zé)任有限公司，型號(hào)：R11107317)。

1.2方法

1.2.1虎射利咽含片對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響〔4,5〕取50只KM小鼠，18～22 g，雄性，按體重隨機(jī)分成五組，每組10只，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林組)、虎射利咽含片低劑量組、片中、高劑量組?；⑸淅屎M每天分別灌胃相應(yīng)劑量0.52、1.04、2.08 g/kg；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃阿司匹林0.156 g/kg；空白對(duì)照組按體重灌胃相應(yīng)量生理鹽水。連續(xù)給藥7 d。與末次給藥30 min后，立即在右耳前后兩面均勻涂抹0.02 ml/只致炎，左耳不涂作對(duì)照。致炎30 min后，頸椎脫臼處死小鼠，用7 mm打孔器分別取兩耳相同部位耳片。以左右耳質(zhì)量之差為其腫脹程度，計(jì)算各組耳腫脹度。炎癥抑制率(%)=〔(空白對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白對(duì)照組腫脹度×100%〕。

1.2.2虎射利咽含片對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響〔6〕取SD大鼠50只，180～220 g，雄性，按體重隨機(jī)分成五組，分組同上。各組每天按1 ml/100 g 灌胃給藥1次，虎射利咽含片低、中、高劑量組每天分別灌胃相應(yīng)劑量0.36、0.72、1.44 g/kg，空白對(duì)照組給予生理鹽水。陽(yáng)性對(duì)照組按0.108 g/kg給予阿司匹林，連續(xù)給藥7 d。正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前按后足容積法測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠右后足容積，測(cè)2次，取平均值作為致炎前足趾容積。末次給藥后1 h，分別在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.1 ml/只致炎，測(cè)定l、2、3、4、6 h右后足跖容積。

1.2.3虎射利咽含片對(duì)小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)的影響〔7〕取KM小鼠，18～22 g，雌性，置于(55±0.5)℃熱板上，記錄小鼠自熱板上至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需的時(shí)間，即為痛閾值，凡小于5 s或大于30 s及跳躍者均淘汰，合格小鼠再測(cè)1次痛閾值，取兩次平均值作為各鼠痛閾值。取合格小鼠50只，按照痛閾值隨機(jī)分為五組，分組同上。虎射利咽含片組每天分別灌胃相應(yīng)劑量 0.52、1.04、2.08 g/kg；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃阿司匹林0.156 g/kg；空白對(duì)照組按體重灌胃相應(yīng)量生理鹽水。連續(xù)給藥7 d。于末次給藥30 min 后測(cè)定痛閾值，并計(jì)算痛閾提高百分率，痛閾提高百分率= (給藥后平均痛閾值-給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%。

1.2.4虎射利咽含片對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響〔8〕取KM小鼠60只，18～22 g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成六組，每組10只，即空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組、陽(yáng)性藥物組、虎射利咽含片低劑量組、虎射利咽含片中劑量組、虎射利咽含片高劑量組。第1～3天小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺75 mg/只，并從第一天灌胃給藥，虎射利咽含片組每天分別灌胃灌胃相應(yīng)劑量0.52、1.04、2.08 g/kg；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃銀黃含化滴丸0.655 g/kg；空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組按體重灌胃相應(yīng)量生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。末次給藥1 h后，尾靜脈注射墨汁0.1 ml/20 g(墨汁以生理鹽水按1∶9稀釋)，注射后2 min、20 min用吸管(預(yù)先用肝素溶液潤(rùn)濕)分別從眼眶后靜脈取血20 μl，溶于2 ml 0.1%Na2CO3溶液中搖勻，搖勻后在675 nm處測(cè)其吸光度值A(chǔ)1(2 min取血所測(cè)吸光度值)和A2(20 min取血所測(cè)吸光度值)，以0.1%Na2CO3溶液作空白調(diào)零，根據(jù)公式計(jì)算廓清指數(shù)K值。K=(logOD1-logOD2)/t2-t1。

1.2.5虎射利咽含片對(duì)小鼠溶血素抗體生成的影響〔9〕取KM小鼠60只，18～22 g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成六組，每組10只，即空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組、陽(yáng)性藥物組、虎射利咽含片低劑量組、虎射利咽含片中劑量組、虎射利咽含片高劑量組。第1～3天小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺75 mg/只，第4天各組小鼠(空白對(duì)照組除外)腹腔注射5%雞紅細(xì)胞0.2 ml，致敏4 h后灌胃給藥，虎射利咽含片組每天分別灌胃相應(yīng)劑量0.52、1.04、2.08 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃銀黃含化滴丸0.655 g/kg，空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組根據(jù)體重灌胃相應(yīng)量生理鹽水，連續(xù)給藥7 d。末次給藥30 min后，摘眼球取血，離心，分離血清，取血清20 μl稀釋至2 ml，取稀釋血清1 ml與5%雞紅細(xì)胞0.2 ml、10%補(bǔ)體0.5 ml混合均勻,在37 ℃恒溫水箱中保溫30 min，然后置0 ℃冰浴中終止反應(yīng)，離心，取上清液于分光光度計(jì)540 nm處比色，不加血清的空白對(duì)照上清液作為比色時(shí)調(diào)零基準(zhǔn)，以給藥組的吸光度值與模型組的吸光度值做統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1虎射利咽含片對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 虎射利咽含片高、中劑量組能減輕二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 虎射利咽含片對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

2.2虎射利咽含片對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 與空白對(duì)照組比較，虎射利咽含片高、中、低劑量組能顯著減少角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹，提示虎射利咽含片有顯著的抗炎作用，能顯著抑制角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹。見(jiàn)表2。

表2 虎射利咽含片對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹容積的影響

2.3虎射利咽含片對(duì)小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)的影響 虎射利咽含片高、中劑量組能夠顯著提高小鼠熱刺激的痛閾值，與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 虎射利咽含片對(duì)小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)的影響

2.4虎射利咽含片對(duì)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響 與環(huán)磷酰胺組比較，虎射利咽含片高、中、低劑量組K值增加(P均<0.01)，說(shuō)明虎射利咽含片能提高免疫低下小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力。見(jiàn)表4。

表4 虎射利咽含片對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能及溶血素抗體生成的影響

2.5虎射利咽含片對(duì)小鼠溶血素抗體生成的影響 與環(huán)磷酰胺組比較，虎射利咽含片高、中劑量組吸光度值值增加(P均<0.01)。說(shuō)明虎射利咽含片高、中劑量可顯著促進(jìn)小鼠溶血素抗體生成(P<0.01)，見(jiàn)表4。

3 討 論

咽炎是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，是咽黏膜并波及黏膜下及淋巴組織的急性炎癥，根據(jù)病程可分為急性和慢性?xún)纱箢?lèi)，祖國(guó)醫(yī)學(xué)統(tǒng)稱(chēng)之為“喉痹”。濕熱型咽炎則為急性咽炎中的一種證型?；⑸淅史綖榕R床治療濕熱型咽炎的經(jīng)驗(yàn)方，療效顯著，現(xiàn)開(kāi)發(fā)為含片，使其療效既有局部作用又有整體作用，減少了服用量，使用方便。

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹兩種非特異性炎癥模型評(píng)價(jià)虎射利咽含片對(duì)早期急性炎癥的影響，以熱板法鎮(zhèn)痛藥粗篩的經(jīng)典方法評(píng)價(jià)虎射利咽含片的鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，虎射利咽方高、中劑量組都顯示出較好的抗炎作用和鎮(zhèn)痛作用。單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的標(biāo)志之一, 它承擔(dān)吞噬銷(xiāo)毀細(xì)胞內(nèi)寄生菌、真菌等的職能, 巨噬細(xì)胞碳廓清指數(shù)的多少可以反映其吞噬功能的強(qiáng)弱, 在免疫反應(yīng)中起著重要的作用。針對(duì)病原微生物, 體液免疫起著抗感染免疫調(diào)理等作用, 它可能通過(guò)產(chǎn)生抗體與對(duì)應(yīng)的抗原特異性集合產(chǎn)生各種生物學(xué)效應(yīng)〔8〕。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與環(huán)磷酰胺組比較，虎射利咽含片，高、中、低劑量組能促進(jìn)抗體的生成。

綜上所述，虎射利咽含片有較強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且能提高免疫力低下小鼠免疫力的作用。

4 參考文獻(xiàn)

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