ERK-1和CylinD1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其相關(guān)性

席 豐 時(shí)志民 張素芬 楊華英 沈艷峰

(河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河北 邯鄲 056001)

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，在我國(guó)位于女性惡性腫瘤的第二位。本研究擬用免疫組化S-P檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中ERK-1和CylinD1蛋白表達(dá)情況，分析這兩種蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為的關(guān)系，探討它們?cè)谧訉m內(nèi)膜癌中發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)行為，為臨床治療和預(yù)后提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 2008年1月至2011年12月河北河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院病理科子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除子宮標(biāo)本60例，平均年齡52.22歲，所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前均未行放、化療及激素治療；取因子宮肌瘤或子宮脫垂而手術(shù)切除子宮的正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本32例，平均年齡48.25歲。按2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床病理分期及組織分級(jí):Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1級(jí)36例，G2級(jí)13例，G3級(jí)11例。病灶局限于黏膜層及浸潤(rùn)≤1/2肌層44例，浸潤(rùn)>1/2肌層16例。

1.2試劑與方法 常規(guī)免疫組化試劑盒S-P、二硝基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液及ERK-1和CylinD1 (北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。采用SP免疫組化法，方法操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，取已知切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷 ERK-1陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，CylinD1陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核(見圖1)，以各種抗體在細(xì)胞核或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。參照Parenti等〔1〕的標(biāo)準(zhǔn)，每張切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5% ～25%為(+)，26% ～50%為()， >50%為()。以+～均視為陽(yáng)性表達(dá)，-視為陰性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS12.0軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性采用等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1ERK-1和CylinD1在各種子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 32例正常子宮內(nèi)膜組織中ERK-1陽(yáng)性表達(dá)8例，CyclinD1陽(yáng)性表達(dá)0例，而60例子宮內(nèi)膜癌組織中ERK-1陽(yáng)性表達(dá)35例，CyclinD1陽(yáng)性表達(dá)31例；兩種組織中兩種基因陽(yáng)性率差異顯著(均P<0.05)。

2.2ERK-1和CylinD1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 見表1。ERK-1陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級(jí)、病理分期、浸潤(rùn)深度密切相關(guān)；CylinD1陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、病理分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度密切相關(guān)。

圖1 子宮內(nèi)膜癌ERK-1、CylinD1的表達(dá)情況(SP，×400)

表1 ERK-1和CylinD1在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3ERK-1和CylinD1在子宮內(nèi)膜癌組織中的相關(guān)性 60例子宮內(nèi)膜癌組織中24例ERK-1及CylinD1陽(yáng)性，18例雙陰性，ERK-1(+)、CylinD1(-)11例，ERK-1(-)、CylinD1(+)7例。ERK-1和CylinD1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.400，P=0.002)，表明二者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起到協(xié)同作用。

3 討 論

絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，活化前的MAPK位于胞質(zhì)，一旦活化即進(jìn)入核內(nèi)激活靶基因。MAPK通路信號(hào)的傳送是通過(guò)MAPKKK、MAPKK和MAPK連續(xù)的磷酸化作用實(shí)現(xiàn)的〔2〕。已發(fā)現(xiàn)4條MAPK信號(hào)通路：ERK、JNK、BMK及P38MAPK。ERK途徑是MAPK中一條主要的和經(jīng)典的并且與人類癌癥關(guān)系最為密切的途徑〔3〕。ERK-1作為是MAPK通路中的代表激酶，通過(guò)接受外界刺激，ERK-1可被多種生長(zhǎng)因子(EGF、NGF、PDGF等)有絲分裂原激活，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)多種癌基因及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡〔4〕。本研究結(jié)果提示ERK-1蛋白的過(guò)表達(dá)可能在子宮內(nèi)膜癌的惡性轉(zhuǎn)化及其發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)作用，ERK-1的過(guò)度表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的侵襲及不良預(yù)后密切相關(guān)。

細(xì)胞周期存在著兩個(gè)重要的調(diào)控點(diǎn)G1/S和G2/M期調(diào)控點(diǎn)，其中G1/S期是關(guān)鍵，因?yàn)樵贕1期中存在一限制點(diǎn)(R點(diǎn))，在R點(diǎn)之前，細(xì)胞周期的運(yùn)行依賴于細(xì)胞外生長(zhǎng)因子，而一旦細(xì)胞周期跨過(guò)R點(diǎn)，細(xì)胞周期即為一自主性的過(guò)程，不再依賴外界生長(zhǎng)因子的存在，所以G1～S對(duì)于細(xì)胞周期的運(yùn)行和完成是至關(guān)重要〔5〕。在生理狀態(tài)下，細(xì)胞進(jìn)入S期后CylinD1迅速分解，在正常組織中免疫組化表達(dá)常為陰性或弱陽(yáng)性。如CylinD1基因激活，則CylinD1持續(xù)高表達(dá)，CylinD1是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的正性調(diào)控因子，其含量及活化程度在細(xì)胞增殖周期卡點(diǎn)G1/S轉(zhuǎn)換過(guò)程中起限速作用，過(guò)度表達(dá)的CylinD1蛋白促進(jìn)G1/S期的轉(zhuǎn)換從而加速腫瘤的發(fā)生進(jìn)程〔6〕，其表達(dá)越強(qiáng)，分化越差，臨床分期愈趨向晚期。本研究結(jié)果提示在腫瘤多步驟、多階段的發(fā)生進(jìn)程中，過(guò)度表達(dá)的CylinD1蛋白促進(jìn)G1/S期的轉(zhuǎn)換從而加速腫瘤的發(fā)生進(jìn)程，其表達(dá)越強(qiáng)，分化越差，臨床分期愈趨向晚期。

細(xì)胞周期的進(jìn)行依賴于ERK-1的持續(xù)激活和核內(nèi)的滯留〔7〕，ERK-1被激活后迅速穿過(guò)核膜，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)后，激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，使CylinD1增多，促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖，ERK-1結(jié)合成核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(AP-1)，與myc基因旁的特異的DNA序列結(jié)合，從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。最終的目的是誘導(dǎo)Cylin D1的表達(dá)和活性，促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞的異常增生〔8〕，兩者在子宮內(nèi)膜癌中的聯(lián)合研究報(bào)道不多，本研究說(shuō)明ERK-1也可能通過(guò)上述過(guò)程與CylinD1相互協(xié)同在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起到作用。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中ERK-1和CylinD1處于過(guò)表達(dá)狀態(tài)，與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。二者表達(dá)呈正相關(guān)，說(shuō)明其腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在某種相互調(diào)節(jié)作用。聯(lián)合檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中二者的表達(dá)情況有助于指導(dǎo)臨床治療，為子宮內(nèi)膜癌防治探索新思路。

4 參考文獻(xiàn)

1Parenti A，Leo G，Porzionato A,etal.Expression of survivin，p53，and caspase 3 in Barrett′s esophagus carcinogenesis〔J〕.Hum Pathol，2006;37(1):16-22.

2Katsuji Yoshioka.Scaffold proteins in mammalian MAP kinase cascades〔J〕.J Biochem，2004；135(6):657-61.

3鮑 偉,蔡 斌,楊懿霞,等.子宮內(nèi)膜癌中ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與雌、孕激素受體的相關(guān)性〔J〕.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009；29(1):5-8.

4Rice Pl,Goldberg RJ,Ray EC,etal.Inhibition of extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation and induction of apoptosis by sulindac metabolites〔J〕.Cancer Res，2001；61(4):1541-7.

5Blagosklonny MV，Pardee AB.The restriction point of the cell cycle〔J〕. Cell Cycle，2002；1(2):103-10.

6Krecicki T，Smigiel R，F(xiàn)raczek M,etal.Studies of the cell cycle regulatory proteins P16，CylinD1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue〔J〕.J Laryngol Otol,2004；118(9)：676-80.

7Ravenhall C,Guida E,Harris T,etal.The importance of ERK activity in the regulation of CylinD1 levels and DNA synthesis in human cultured airway smooth muscle〔J〕.Br J Phamacol，2000；131(1):17-28.

8Mizumoto Y，Kyo S，Mori N,etal.Activation of ERK1/2 occurs independently of KRAS or BRAF status in endometrial cancer and is associated with favorable prognosis〔J〕.Cancer Sci,2007；98(5):652-8.