消栓通脈顆粒逆轉(zhuǎn)Th1/Th2亞群失衡治療大鼠深靜脈血栓

東光健+賴楠楠+郝清智+季博+王彬

[摘要] 目的 探討Th1/Th2亞群失衡在大鼠深靜脈血栓形成（DVT）中的作用及中藥復(fù)方消栓通脈顆粒逆轉(zhuǎn)Th1/Th2亞群失衡治療DVT的作用機(jī)制。 方法 80只DVT大鼠隨機(jī)分為消栓通脈顆粒組、DVT組、假手術(shù)組、正常組，分離大鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組大鼠Th1亞群（CD4+TNF-α+）、Th2亞群（CD4+IL-4+）比例，ELISA法檢測(cè)大鼠外周血TNF-α、IL-4水平。 結(jié)果 與正常組及假手術(shù)組比較，DVT大鼠脾臟Th1亞群比例顯著升高（P=0.022），Th2亞群比例顯著降低（P=0.015）；血清TNF-α水平顯著升高（P=0.005）；IL-4水平顯著降低（P=0.012）。消栓通脈顆粒作用后，大鼠脾臟Th1亞群比例顯著降低（P=0.008），Th2亞群比例顯著升高（P=0.011），血清TNF-α水平降低（P=0.036），IL-4水平升高（P=0.018）。 結(jié)論 Th1/Th2亞群失衡參與了大鼠DVT發(fā)病過程，消栓通脈顆粒誘導(dǎo)T細(xì)胞向Th2亞群偏移，抑制炎性因子表達(dá)進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血栓再通。

[關(guān)鍵詞] 消栓通脈顆粒；Th1/Th2亞群；深靜脈血栓形成；細(xì)胞因子

[中圖分類號(hào)] R285.5???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A???[文章編號(hào)] 2095-0616（2014）11-13-04

Regulatory effect of traditional Chinese medicine on Th1/Th2 subsets contributes to the treatment of deep vein thrombosis

DONG?Guangjian1??LAI?Nannan2??HAO?Qingzhi3??JI?Bo3??WANG?Bin3

1.Shandong Workers Hospital of Geology and Mineral Resources,Jin'an 250013,China;2.Institute of Basic Medicine,Shandong Academy of Medical Sciences,Jin'an 250062,China;3.Peripheral Vascular Surgery Department,Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jin'an 250014,China

[Abstract] Objective To evaluate the role of Th1/Th2 shift in deep vein thrombasis (DVT) and elucidate the mechanism of Traditional Chinese Medicine (TCM) -Xiaoshuantongmai Decoction-in treating DVT animal models. Methods 40 DVT rats were divided randomLy in to DVT group and TCM group.Additionally, 20 rats with sham operation were taken as sham operation group and 20 normal rats were taken as normal group respectively. Rats of TCM group were treated with Xiaoshuantongmai Decoction for 8-15 days,while rats of other groups were treated with double distilled water for the same duration. Then,the proportions of Th1 (CD4+TNFα+) subset and Th2 (CD4+IL-4+) subset were detected by Flowcytometry. Moreover,the protein expressions of TNF-α and IL-4 in rat serum were analyzed by ELISA assay. Results Compared with normal and sham operation group, the proportion of Th1 subset was increased while that of Th2 subset was decreased significantly in DVT group. In addition,protein expression of TNF-α was enhanced while that of IL-4 was inhibited markedly in DVT rats. After TCM administration,the proportion of Th1 subset was down-regulated while that of Th2 subset was up-regulated significantly in DVT rats. Moreover,the protein expression of TNF-α decreased while that of IL-4 increased obviously after TCM administration. Conclusion Th1/Th2 shift was involved in DVT.TCM- Xiaoshuantongmai decoction-down-regulated the Th1 subsets whereas up-regulated the Th2 subsets;thereby, Xiaoshuantongmai decoction exerted the curative effect on DVT mice.

[Key words] Xiaoshuantongmai decoction;Th1/Th2 subsets;Deep vein thrombosis; Cytokine

深靜脈血栓形成（deep vein thrombosis，DVT）

1是周圍血管病科常見病及多發(fā)病，年發(fā)病率約1.0‰[1]，且有逐年升高趨勢(shì)。在急性期容易出現(xiàn)肺栓塞而危及生命，慢性期可以出現(xiàn)患肢腫脹、淤積性皮炎、頑固性小腿潰瘍等后遺癥，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。前期研究證實(shí)，DVT模型大鼠存在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡的現(xiàn)象[2]，但導(dǎo)致這一現(xiàn)象的免疫學(xué)根源尚未明確。Th1/Th2亞群是免疫調(diào)節(jié)的主體，通過產(chǎn)生特征性細(xì)胞因子，在抵抗病原體感染及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用，參與了多種疾病的發(fā)生與發(fā)展，但其在DVT中的作用及機(jī)制尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠DVT模型，觀察模型大鼠Th1/Th2亞群變化，闡釋其在DVT發(fā)病中的作用，并觀察中藥復(fù)方消栓通脈顆粒干預(yù)后DVT大鼠Th1/Th2亞群分化狀態(tài)及炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，揭示該中藥復(fù)方治療本病的作用靶點(diǎn)與機(jī)制。

endprint

1?材料與方法

1.1?主要材料

Wistar大鼠80只，12周齡，體重200～250g，♂，SPF級(jí)，購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（許可證號(hào)：SCXK魯20090001）。大鼠自由飲水和攝食，飼養(yǎng)室溫度23～25℃，相對(duì)濕度7%左右，定期紫外線室內(nèi)消毒，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后開始實(shí)驗(yàn)。消栓通脈顆粒（山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科制備，魯藥制字 Z0120030051）。藥物組成：茵陳、桃仁、赤芍等。制備：用蒸餾水制成懸濁液，每1mL含0.6g消栓通脈顆粒。生理鹽水（山東華魯制藥有限公司生產(chǎn)，H37022750）。大鼠抗小鼠熒光抗體：FITC-CD4、PE-IL-IFNγ、PE-IL-4均購自美國BD Pharmigen公司。

1.2?DVT大鼠模型建立

根據(jù)Reyers法建立大鼠深靜脈血栓形成模型40只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與模型組，各20只。造模術(shù)后動(dòng)物自由飲水，普通全價(jià)顆粒飼料，不用抗生素，按照人與動(dòng)物公斤體重比值進(jìn)行藥物劑量的折算。實(shí)驗(yàn)組灌胃消栓通脈顆粒組，劑量為0.6g/（100g·d），連續(xù)灌胃8～15d。模型組：連續(xù)灌胃生理鹽水8~15d。假手術(shù)組：20只大鼠，麻醉后，分離下腔靜脈，不予結(jié)扎，直接縫合腹膜、皮膚，術(shù)后給予生理鹽水連續(xù)灌胃8~15d。20只正常大鼠作為正常對(duì)照組，給予生理鹽水連續(xù)灌胃8～15d。

1.3?標(biāo)本收集與Th1、Th2亞群檢測(cè)

參照文獻(xiàn)報(bào)道[3]，無菌分離大鼠脾臟，針?biāo)ㄑ心ブ瞥蓡渭?xì)胞懸液，200目銅網(wǎng)過濾，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/mL，加入佛波酯30μg/L、離子霉素（Ionomycin）1mg/L、莫能霉素（Monensin）1.7μg/L，37℃，5% CO2孵育4h。收集細(xì)胞，1×PBS洗2遍，去上清，加入小鼠血清，室溫避光孵育30min。將外標(biāo)抗體FITC-CD4按說明書加入到細(xì)胞懸液中，4℃避光孵育30min；1×PBS洗2遍，去上清；BD固定穿膜試劑盒固定穿膜（按說明書操作），加入內(nèi)標(biāo)抗體（PE-TNF-α、PE-IL-4），4℃避光孵育30min；穿膜緩沖液洗2次，去上清，PBS重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)管，上機(jī)檢測(cè)。Winmidin 2.9分析Th1（CD4+TNF-α+）及Th2（CD4+IL-4+）亞群比例。

1.4?Th1、Th2細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的檢測(cè)

采用ELISA法，所有步驟均按照說明書進(jìn)行，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血清中TNF-α、IL-4蛋白濃度。

1.5?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS11.5軟件，計(jì)量資料以（）表示。采用One Way-ANOVA方差分析，兩組間比較采用Turkey法檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?Th1、Th2亞群比例及消栓通脈顆粒對(duì)其影響

造模后第8天，與正常組大鼠比較，實(shí)驗(yàn)組、模型組、假手術(shù)組大鼠Th1亞群比例顯著升高（P=0.022），Th2亞群比例顯著降低（P=0.015）；模型組大鼠Th1亞群比例顯著高于實(shí)驗(yàn)組（P=0.013），Th2亞群比例顯著低于實(shí)驗(yàn)組（P=0.021）。消栓通脈顆粒作用15d后，實(shí)驗(yàn)組大鼠Th1亞群比例顯著降低（P=0.008），Th2亞群比例顯著升高，與模型組比較有顯著性差異（P=0.011），與假手術(shù)組及正常組大鼠比較無明顯差異（P=0.153）。提示Th1/Th2亞群偏移參與了大鼠DVT形成，消栓通脈顆粒對(duì)DVT大鼠Th1/Th2亞群分化狀態(tài)具有調(diào)節(jié)作用，能優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)Th2亞群偏移。見表1。

表1??大鼠Th1/Th2亞群占CD4+細(xì)胞百分比及藥物對(duì)其影響（，%）

組別 只數(shù) 藥物作用天數(shù)

（d） Th1亞群

（CD4+TNF-α+） Th2亞群

（CD4+IL-4+）

實(shí)驗(yàn)組 10 8 25.45±5.44abc 2.70±0.55abc

10 15 17.32±4.16f 3.95±0.63f

模型組 10 8 32.64±3.52ab 2.15±0.42ab

10 15 26.60±3.85de 2.80±0.54de

假手術(shù)組 10 8 20.43±4.25ac 3.22±0.48ac

10 15 16.08±3.60f 3.64±0.76f

正常組 10 8 15.45±3.60c 3.89±0.84c

10 15 15.26±3.21f 3.83±0.74f

注：術(shù)后第8天，與正常組比較，aP＜0.05；與假手術(shù)組比較，bP＜0.05，與模型組比較，cP＜0.05；術(shù)后第15天，與正常組比較，dP＜0.05；與假手術(shù)組比較，eP＜0.05；與模型組比較，fP＜0.05

2.2?血清TNF-α、IL-4水平及消栓通脈顆粒對(duì)其影響

造模后第8d，與正常組大鼠比較，實(shí)驗(yàn)組、模型組、假手術(shù)組大鼠TNF-α水平顯著升高（P=0.005），IL-4水平顯著降低（P=0.012）；實(shí)驗(yàn)組TNF-α水平明顯低于模型組、IL-4水平明顯高于模型組（P=0.033）。造模第15天后，實(shí)驗(yàn)組大鼠TNF-α表達(dá)明顯降低（P=0.036），IL-4表達(dá)明顯升高（P=0.018），與正常組、假手術(shù)組比較無顯著性差異（P=0.421）；模型組大鼠TNF-α表達(dá)明顯高于實(shí)驗(yàn)組，IL-4表達(dá)明顯低于實(shí)驗(yàn)組，差異有顯著性（P=0.003）。提示Th1型細(xì)胞因子TNF-α蛋白表達(dá)升高及Th2型細(xì)胞因子IL-4蛋白表達(dá)降低參與了DVT的形成過程，消栓通脈顆粒通過調(diào)節(jié)Th1/Th2亞群比例，降低Th1型細(xì)胞因子表達(dá)，增加Th2型細(xì)胞因子表達(dá)，其對(duì)TNF-α、IL-4水平的調(diào)節(jié)作用呈明顯劑量與時(shí)間依賴性，證實(shí)其對(duì)Th1/Th2亞群分化的調(diào)節(jié)作用是其減輕炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮治療DVT作用的靶點(diǎn)之一。見表2。

表2??大鼠外周血TNF-α、IL-4水平（，pg/mL）

組別 只數(shù) 藥物作用天數(shù)

（d） Th1型細(xì)胞

因子TNF-α Th2型細(xì)胞因子

IL-4

實(shí)驗(yàn)組 10 8 198.45±13.94abc 103.12±9.75abc

10 15 142.32±15.16f 147.95±11.63f

模型組 10 8 220.64±13.52ab 92.45±12.42ab

10 15 182.60±15.85de 122.25±10.54de

假手術(shù)組 10 8 180.43±14.25ac 113.04±10.68ac

10 15 144.08±13.20f 140.75±12.76f

正常組 10 8 130.45±13.60bc 143.89±10.84bc

10 15 135.26±16.21f 140.53±11.50f

注：術(shù)后第8天，與正常組比較，aP＜0.05；與假手術(shù)組比較，bP＜0.05，與模型組比較，cP＜0.05；術(shù)后第15天，與正常組比較，dP＜0.05；與假手術(shù)組比較，eP＜0.05；與模型組比較，fP＜0.05

3?討論

T細(xì)胞是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的主體細(xì)胞，在抵御外界病原體感染及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用[4]。初始T細(xì)胞受抗原刺激后，在分化誘導(dǎo)因子及特異性核轉(zhuǎn)錄因子作用下分化為不同的亞群，產(chǎn)生特異性細(xì)胞因子，主導(dǎo)不同的免疫反應(yīng)[5]。初始T細(xì)胞經(jīng)IFN-γ和IL-12誘導(dǎo)分化成Th1亞群，主要分泌TNF-α等炎性細(xì)胞因子，誘導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性，從而促進(jìn)細(xì)胞免疫應(yīng)答。初始T細(xì)胞經(jīng)IL-4誘導(dǎo)分化Th2亞群，分泌IL-4和IL-10等抑制性細(xì)胞因子，能拮抗性抑制Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，使機(jī)體的免疫應(yīng)答限制在適度范圍，避免過強(qiáng)的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的組織損傷。Th1/Th2亞群相互調(diào)節(jié)，處于動(dòng)態(tài)平衡之中[6-7]，維持機(jī)體正常免疫功能及自穩(wěn)狀態(tài)；Th1/Th2亞群參與了多種疾病的發(fā)病過程，但其在DVT中的作用機(jī)制尚未闡明[8-9]。

endprint

Th1型細(xì)胞因子TNFα可以通過促進(jìn)脂質(zhì)沉積和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞聚集，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生過量的單核細(xì)胞趨化因子-1（macophage/monocyte chemotactic protein1，MCP-1），導(dǎo)致內(nèi)皮損傷而促進(jìn)血管炎癥反應(yīng)[10-11]。Th2型細(xì)胞因子IL-4可以抑制TNFα的產(chǎn)生，同時(shí)抑制TNFα對(duì)巨噬細(xì)胞的活化作用，減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，抑制炎癥反應(yīng)，從而保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，在DVT初期，Th1炎性細(xì)胞因子比例明顯，Th2亞群比例明顯降低，Th1炎性細(xì)胞因子占主導(dǎo)地位，提示Th1/Th2亞群偏移參與了DVT形成過程。此時(shí)T細(xì)胞在MCP-1的作用下，與血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，以滲出的方式透過內(nèi)皮細(xì)胞層進(jìn)入內(nèi)皮下，參與炎癥反應(yīng)，加重內(nèi)皮損傷，促進(jìn)了血栓形成[14-15]。經(jīng)過中藥復(fù)方治療后，實(shí)驗(yàn)組Th1亞群比例及促炎因子表達(dá)降低，Th2亞群比例及抗炎因子表達(dá)升高。

消栓通脈顆粒具有清熱利濕、祛瘀通絡(luò)的功效。消栓通脈顆粒中茵陳、赤小豆清熱利濕，行血消腫共為君藥。赤芍藥清熱涼血，活血化瘀，水蛭破血逐瘀；通經(jīng)消癥；黃柏清熱燥濕，瀉火解毒，三藥相須配伍合而為臣藥，既助君藥祛濕、清熱、活血，又能涼血活血、破血祛瘀、軟堅(jiān)散結(jié)，使血脈通暢，水腫自消。山梔清熱，蒼術(shù)功擅燥濕健脾，桃仁、紅花活血散瘀。諸藥合用，共奏清熱利濕，祛瘀通絡(luò)，消腫止痛之功效，使?jié)窕崆?、瘀祛，脈絡(luò)通暢[16]。我們的前期研究證實(shí)，DVT急性期炎性細(xì)胞因子表達(dá)增高，消栓通脈顆?？梢员Ｗo(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，降低炎性細(xì)胞因子表達(dá)[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)消栓通脈顆粒治療后，DVT大鼠Th1亞群比例降低，Th2亞群比例升高，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)T細(xì)胞亞群向Th2漂移，逆轉(zhuǎn)Th1/Th2亞群失衡是消栓通脈顆粒治療DVT的靶點(diǎn)與分子機(jī)制。本研究進(jìn)一步闡釋了DVT形成的免疫學(xué)分子機(jī)制及消栓通脈顆粒治療本病的靶點(diǎn)，為精確制導(dǎo)臨床治療提供了新的途徑，為治療DVT中藥研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但在DVT發(fā)病過程中，Th1/Th2亞群失衡的始動(dòng)因素及信號(hào)通路關(guān)鍵分子變化與機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步深入探討。

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（收稿日期：2014-03-09）

endprint

Th1型細(xì)胞因子TNFα可以通過促進(jìn)脂質(zhì)沉積和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞聚集，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生過量的單核細(xì)胞趨化因子-1（macophage/monocyte chemotactic protein1，MCP-1），導(dǎo)致內(nèi)皮損傷而促進(jìn)血管炎癥反應(yīng)[10-11]。Th2型細(xì)胞因子IL-4可以抑制TNFα的產(chǎn)生，同時(shí)抑制TNFα對(duì)巨噬細(xì)胞的活化作用，減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，抑制炎癥反應(yīng)，從而保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，在DVT初期，Th1炎性細(xì)胞因子比例明顯，Th2亞群比例明顯降低，Th1炎性細(xì)胞因子占主導(dǎo)地位，提示Th1/Th2亞群偏移參與了DVT形成過程。此時(shí)T細(xì)胞在MCP-1的作用下，與血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，以滲出的方式透過內(nèi)皮細(xì)胞層進(jìn)入內(nèi)皮下，參與炎癥反應(yīng)，加重內(nèi)皮損傷，促進(jìn)了血栓形成[14-15]。經(jīng)過中藥復(fù)方治療后，實(shí)驗(yàn)組Th1亞群比例及促炎因子表達(dá)降低，Th2亞群比例及抗炎因子表達(dá)升高。

消栓通脈顆粒具有清熱利濕、祛瘀通絡(luò)的功效。消栓通脈顆粒中茵陳、赤小豆清熱利濕，行血消腫共為君藥。赤芍藥清熱涼血，活血化瘀，水蛭破血逐瘀；通經(jīng)消癥；黃柏清熱燥濕，瀉火解毒，三藥相須配伍合而為臣藥，既助君藥祛濕、清熱、活血，又能涼血活血、破血祛瘀、軟堅(jiān)散結(jié)，使血脈通暢，水腫自消。山梔清熱，蒼術(shù)功擅燥濕健脾，桃仁、紅花活血散瘀。諸藥合用，共奏清熱利濕，祛瘀通絡(luò)，消腫止痛之功效，使?jié)窕崆?、瘀祛，脈絡(luò)通暢[16]。我們的前期研究證實(shí)，DVT急性期炎性細(xì)胞因子表達(dá)增高，消栓通脈顆?？梢员Ｗo(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，降低炎性細(xì)胞因子表達(dá)[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)消栓通脈顆粒治療后，DVT大鼠Th1亞群比例降低，Th2亞群比例升高，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)T細(xì)胞亞群向Th2漂移，逆轉(zhuǎn)Th1/Th2亞群失衡是消栓通脈顆粒治療DVT的靶點(diǎn)與分子機(jī)制。本研究進(jìn)一步闡釋了DVT形成的免疫學(xué)分子機(jī)制及消栓通脈顆粒治療本病的靶點(diǎn)，為精確制導(dǎo)臨床治療提供了新的途徑，為治療DVT中藥研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但在DVT發(fā)病過程中，Th1/Th2亞群失衡的始動(dòng)因素及信號(hào)通路關(guān)鍵分子變化與機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步深入探討。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Kesieme E，Kesieme C，Jebbin N，et al.Deep vein thrombosis：a clinical review [J]．J Blood Med，2011，2 （2）：59-69．

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[16] 王彬，李霞，張玥，等.炎性細(xì)胞水平變化與深靜脈血栓形成中醫(yī)癥候分型關(guān)系探討[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，30（2）：131-132．

[17] 王彬，劉明，張玉東，等. 消栓通脈顆粒調(diào)節(jié)Treg/Th17亞群平衡治療下肢深靜脈血栓形成研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，37（3）：203-205.

[18] 王彬，劉明，郝清智. 中藥調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫平衡在下肢深靜脈血栓形成治療中的作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2013，9（4）：355-358.

（收稿日期：2014-03-09）

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Th1型細(xì)胞因子TNFα可以通過促進(jìn)脂質(zhì)沉積和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞聚集，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生過量的單核細(xì)胞趨化因子-1（macophage/monocyte chemotactic protein1，MCP-1），導(dǎo)致內(nèi)皮損傷而促進(jìn)血管炎癥反應(yīng)[10-11]。Th2型細(xì)胞因子IL-4可以抑制TNFα的產(chǎn)生，同時(shí)抑制TNFα對(duì)巨噬細(xì)胞的活化作用，減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，抑制炎癥反應(yīng)，從而保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，在DVT初期，Th1炎性細(xì)胞因子比例明顯，Th2亞群比例明顯降低，Th1炎性細(xì)胞因子占主導(dǎo)地位，提示Th1/Th2亞群偏移參與了DVT形成過程。此時(shí)T細(xì)胞在MCP-1的作用下，與血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，以滲出的方式透過內(nèi)皮細(xì)胞層進(jìn)入內(nèi)皮下，參與炎癥反應(yīng)，加重內(nèi)皮損傷，促進(jìn)了血栓形成[14-15]。經(jīng)過中藥復(fù)方治療后，實(shí)驗(yàn)組Th1亞群比例及促炎因子表達(dá)降低，Th2亞群比例及抗炎因子表達(dá)升高。

消栓通脈顆粒具有清熱利濕、祛瘀通絡(luò)的功效。消栓通脈顆粒中茵陳、赤小豆清熱利濕，行血消腫共為君藥。赤芍藥清熱涼血，活血化瘀，水蛭破血逐瘀；通經(jīng)消癥；黃柏清熱燥濕，瀉火解毒，三藥相須配伍合而為臣藥，既助君藥祛濕、清熱、活血，又能涼血活血、破血祛瘀、軟堅(jiān)散結(jié)，使血脈通暢，水腫自消。山梔清熱，蒼術(shù)功擅燥濕健脾，桃仁、紅花活血散瘀。諸藥合用，共奏清熱利濕，祛瘀通絡(luò)，消腫止痛之功效，使?jié)窕?、熱清、瘀祛，脈絡(luò)通暢[16]。我們的前期研究證實(shí)，DVT急性期炎性細(xì)胞因子表達(dá)增高，消栓通脈顆粒可以保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，降低炎性細(xì)胞因子表達(dá)[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)消栓通脈顆粒治療后，DVT大鼠Th1亞群比例降低，Th2亞群比例升高，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示優(yōu)勢(shì)誘導(dǎo)T細(xì)胞亞群向Th2漂移，逆轉(zhuǎn)Th1/Th2亞群失衡是消栓通脈顆粒治療DVT的靶點(diǎn)與分子機(jī)制。本研究進(jìn)一步闡釋了DVT形成的免疫學(xué)分子機(jī)制及消栓通脈顆粒治療本病的靶點(diǎn)，為精確制導(dǎo)臨床治療提供了新的途徑，為治療DVT中藥研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但在DVT發(fā)病過程中，Th1/Th2亞群失衡的始動(dòng)因素及信號(hào)通路關(guān)鍵分子變化與機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步深入探討。

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[10] Guo M，Mao X，Ji Q，et al.Inhibition of IFN regulatory factor-1 down-regulate Th1cell function in patients with acute coronary syndrome[J].J Clin Immunol，2010，30 （2）：241-252．

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[13] Christian A，Gleissner，Arne Zastrow，et al.IL-10inhibits endothelium-dependent T cell costimulation by up-Regulation of ILT3/4 in human Vascular endothelial cells [J].Eur J Immunol，2007，37（1）：177-192．

[14] Koga M，Kai H，Yasukawa H，et al.Inhibition of progression and stabilization of p-laques by postnatal interferon-gamma function blocking in ApoE-knockout mice[J].Circ Res，2007，101（4）：348-356．

[15] Packard RR，Lichtman AH，Libby P，et al.Innate and adaptive immunity in atherosclerosis[J].Semin Immunopathol，2009，31（1）：20-22．

[16] 王彬，李霞，張玥，等.炎性細(xì)胞水平變化與深靜脈血栓形成中醫(yī)癥候分型關(guān)系探討[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，30（2）：131-132．

[17] 王彬，劉明，張玉東，等. 消栓通脈顆粒調(diào)節(jié)Treg/Th17亞群平衡治療下肢深靜脈血栓形成研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，37（3）：203-205.

[18] 王彬，劉明，郝清智. 中藥調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫平衡在下肢深靜脈血栓形成治療中的作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2013，9（4）：355-358.

（收稿日期：2014-03-09）

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