E-cad及EpCAM在子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義

周猷偉，方旖驊，楊媛媛，顏士杰

E-cad及EpCAM在子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義

周猷偉，方旖驊，楊媛媛，顏士杰

目的 研究上皮型鈣黏素（E-cad）及上皮細胞黏附分子（EpCAM）在子宮內(nèi)膜癌中的表達及其在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和預后中的意義。方法 應(yīng)用免疫組化PV法檢測30例正常增生期子宮內(nèi)膜、30例單純性增生子宮內(nèi)膜、30例復雜型或伴不典型增生子宮內(nèi)膜和40例子宮內(nèi)膜癌中E-cad及EpCAM的表達情況，并結(jié)合臨床進行分析。結(jié)果

E-cad在正常增生期子宮內(nèi)膜至癌性內(nèi)膜的發(fā)展過程中以及隨著子宮內(nèi)膜癌患者肌層浸潤深度的增加、淋巴轉(zhuǎn)移及FIGO臨床分期的增加，其表達陽性率逐漸下降，EpCAM則反之（P＜0.05）;E-cad及EpCAM在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達呈負相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 子宮內(nèi)膜癌中E-cad蛋白的低表達與EpCAM蛋白的高表達和兩者之間的負相關(guān)與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度及預后有關(guān)，同時提示了以Wnt信號通路為基礎(chǔ)的分子靶向治療的可能性。

子宮內(nèi)膜癌;上皮型鈣黏素;上皮細胞黏附分子

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，以來源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最常見，是女性生殖道最常見的惡性腫瘤之一［1］。近年來，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢，其病因仍不十分明確。上皮型鈣黏素（E-cadherins，E-cad）是一類介導同種細胞間相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，廣泛存在于機體上皮組織，是維持上皮細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)完整性和極性的重要分子［2］。上皮細胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）是一種單次跨膜蛋白，幾乎表達于所有的腺癌中，多位于細胞間緊密連接處，具有參與調(diào)節(jié)細胞間黏附，介導信號轉(zhuǎn)導、細胞遷移、增殖及分化等作用［3］。目前，對于E-cad和EpCAM在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程中的表達變化仍不清楚。為此，該研究通過免疫組化PV法檢測E-cad及EpCAM在40例子宮內(nèi)膜癌組織中的表達情況，探討其表達變化在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和預后中的意義。

1 材料與方法

1.1 病例資料 選取安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科2012年1月～2013年1月收治資料完整的經(jīng)手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者40例，年齡42～77（54.37±7.75）歲。按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO，1988）子宮內(nèi)膜癌病理分期方法進行病理組織學分級，其中G1為16例，G2為12例，G3為12例;同時按照FIGO（2009）子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)-病理分期，Ⅰ期為17例，Ⅱ期為13例，Ⅲ期為10例;其中肌層浸潤深度＜1/2肌層為26例，≥1/2肌層為14例;無淋巴轉(zhuǎn)移者27例，有淋巴轉(zhuǎn)移者13例;腺癌37例，鱗癌3例?；颊咝g(shù)前均未行放療、化療和激素治療，標本均經(jīng)病理學診斷復核。另取經(jīng)診斷性刮宮或手術(shù)切除子宮患者的子宮內(nèi)膜存檔蠟塊，經(jīng)病理證實為正常增生期子宮內(nèi)膜30例、單純性增生子宮內(nèi)膜30例、復雜型或伴不典型增生子宮內(nèi)膜30例，作為對照。

1.2 主要試劑及實驗方法 標本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，切成4 μm厚的切片。采用免疫組化PV法進行染色。即用型鼠抗人E-cad單克隆抗體（貨號為ZM-0092）、通用型二步法檢測試劑盒（PV-6000）、DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物制品公司;純化的鼠抗人EpCAM單克隆抗體（貨號為SC-66020）購自美國Santa Cruz公司，稀釋倍數(shù)為1∶100。染色步驟參照說明書進行。用既往陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判斷 以細胞膜出現(xiàn)明顯的線性棕黃色著色為陽性細胞，無著色或與背景顏色一致為陰性細胞。免疫組化染色強度參照Formwitz評分方法［4］，E-cad及 EpCAM 細胞計分為:無陽性細胞為0分，陽性細胞百分率1% ～25%為1分，26% ～50%為2分，＞50%為3分;根據(jù)多數(shù)細胞的著色強度計算強度得分，無顯色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分。依據(jù)二者的乘積，將染色情況分為三級:0分為（－）;l～3分為（+）;4～9分為（++）。

1.4 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，各組間的比較采用χ2檢驗和Fisher概率法。

2 結(jié)果

2.1 E-cad在各組的表達情況 E-cad主要表達于細胞膜，部分細胞胞質(zhì)著色。從正常增生期子宮內(nèi)膜至癌性內(nèi)膜的進展過程中，E-cad的表達強度逐漸下降，見圖1。E-cad在正常增生期子宮內(nèi)膜中表達最強，陽性率為93.3%（28/30），而在癌性內(nèi)膜中表達最弱，陽性率為42.5%（17/40），在單純性增生子宮內(nèi)膜和復雜型或伴不典型增生子宮內(nèi)膜中的表達介于二者之間，陽性率分別為73.3%（22/30）和53.3%（16/30），見表1。

圖1 E-cad在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達 PV×40

表1 E-cad在各組的表達情況

2.2 EpCAM在各組的表達情況 EpCAM主要表達于細胞膜，部分胞質(zhì)或核著色。從正常增生期子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜、復雜型或伴不典型增生子宮內(nèi)膜至子宮內(nèi)膜癌的進展過程中，EpCAM的表達強度逐漸增加，見圖2，陽性率分別為33.3%、46.7%、66.7%和77.5%，見表2。

圖2 EpCAM在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達 PV×40

表2 EpCAM在各組的表達情況

2.3 E-cad及EpCAM的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床指標的關(guān)系 E-cad的表達與子宮內(nèi)膜癌患者的肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)-病理分期均有關(guān)。E-cad在病理分級G1、G2、G3患者表達陽性率分別為43.8%、41.7%和41.7%，組間差異無統(tǒng)計學意義;肌層浸潤深度＜1/2患者E-cad的表達高于浸潤深度≥1/2的患者（P＜0.05）;無淋巴轉(zhuǎn)移者表達高于有淋巴轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）;臨床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者表達陽性率分別為64.7%、30.8%和20.0%，組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。EpCAM的表達隨著肌層浸潤深度的增加、淋巴轉(zhuǎn)移及FIGO臨床分期的增加而逐漸增強（P＜0.05），見表3。

2.4 子宮內(nèi)膜癌組織中E-cad及EpCAM表達的相關(guān)性 E-cad及EpCAM在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達呈負相關(guān)（χ2=4.198，P=0.04），見表4。

表3 E-cad及EpCAM表達與子宮內(nèi)膜癌臨床指標的關(guān)系（n）

表4 E-cad及EpCAM在子宮內(nèi)膜癌中的表達相關(guān)性

3 討論

3.1 E-cad蛋白的表達與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性鈣黏附素家族是一類介導同種細胞間相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，其中E-cad是參與形成和維護細胞間連接最重要的分子之一，廣泛表達于上皮細胞膜的側(cè)緣和細胞間黏附區(qū)。本研究顯示，在從正常增生期子宮內(nèi)膜到癌性內(nèi)膜的進展過程中，E-cad表達強度下降，從正常內(nèi)膜到復雜型或伴不典型增生內(nèi)膜，再發(fā)展至癌性內(nèi)膜這個過程并無明確界限，細胞間失去相互連接，成為腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)，即E-cad表達異?；蛉笔Э赡軈⑴c啟動了這一過程。E-cad在上皮極性和完整性維持等方面發(fā)揮作用，促使不同細胞間形成如縫隙連接、橋粒連接等，同時可促進旁分泌信號的傳遞，具有傳遞信息和穩(wěn)定細胞的作用［5］。同時本研究顯示，E-cad在子宮內(nèi)膜癌中的表達隨著肌層浸潤深度的增加、淋巴轉(zhuǎn)移及FIGO臨床分期的增加而逐漸降低，提示E-cad表達明顯異?；蛉笔c腫瘤細胞高侵襲力密切相關(guān)，導致腫瘤細胞黏附性下降并促進其浸潤、局部復發(fā)、淋巴轉(zhuǎn)移和遠處播散。Caldeira et al［6］發(fā)現(xiàn)，E-cad在具有侵襲性組織學特性的腫瘤細胞中表達下降或缺失，在浸潤性生長的腫瘤中其表達異常的發(fā)生率顯著高于膨脹性生長的腫瘤。

3.2 EpCAM蛋白的表達與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性EpCAM是一種由位于2p21染色體的腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導1基因編碼，屬于黏附分子家族的單次跨膜Ⅰ型糖蛋白。本研究顯示，從正常增生期子宮內(nèi)膜到癌性內(nèi)膜的進展過程中，EpCAM表達強度增加，提示EpCAM在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著啟動從正常增生期子宮內(nèi)膜到癌性內(nèi)膜這一過程的功能。Maetzel et al［7］發(fā)現(xiàn)，EpCAM 通過參與 β－連環(huán)蛋白依賴的Wnt級聯(lián)反應(yīng)激活c-myc、cyclinA/E等原癌基因的表達而具有致癌作用，同時發(fā)現(xiàn)通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)EpCAM蛋白降解可激活EpCAM作為有絲分裂信號傳導器的功能。本研究顯示，Ep-CAM在子宮內(nèi)膜癌中的表達隨著肌層浸潤深度的增加、淋巴轉(zhuǎn)移及FIGO臨床分期的增加而逐漸增加，提示EpCAM蛋白可能是子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要指示因子，對判斷患者的病情發(fā)展及預后具有重要的參考價值。Du et al［8］發(fā)現(xiàn)，EpCAM 在胃癌轉(zhuǎn)移灶中的表達明顯高于原發(fā)灶，通過siRNA使EpCAM表達降低可以抑制胃癌細胞的侵襲性和遷移能力，提示EpCAM可能具有促進癌細胞轉(zhuǎn)移的作用。

3.3 E-cad與EpCAM蛋白表達的相關(guān)性 E-cad通過與胞質(zhì)內(nèi)配體連接素（cat）α、β、γ形成復合體而發(fā)揮作用，其中β-cat既是Wnt信號傳導途徑中的重要成分，又可以在α和γ-cat的作用下維持細胞間的黏附。E-cad蛋白表達下降可能會影響Wntβ-cat信號通路完整性，使細胞內(nèi)游離的β-cat增加，導致與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的異常表達。EpCAM可通過Wnt-β-cat信號通路激活原癌基因的表達以致使其具有致癌作用。本研究顯示E-cad與EpCAM在子宮內(nèi)膜癌中的表達呈負相關(guān)。E-cad與EpCAM均可通過Wnt信號通路發(fā)揮作用，兩者可能存在相互影響，在子宮內(nèi)膜癌患者中E-cad蛋白的低表達與EpCAM蛋白的高表達可能共同促進癌癥的侵襲轉(zhuǎn)移。Gostner et al［9］發(fā)現(xiàn)，EpCAM 在乳腺癌細胞中呈高表達，而Wnt信號通路分泌型卷曲相關(guān)蛋白1表達卻下降，提示EpCAM參與Wnt信號通路的激活。EpCAM既可以調(diào)節(jié)同源細胞間的黏附，抑制細胞遷移;同時EpCAM又可以通過破壞α-cat和F-肌動蛋白間的連接，從而破壞E-cad介導的細胞間黏附作用［10］。

綜上所述，E-cad與EpCAM在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，聯(lián)合檢測E-cad與EpCAM可能增加子宮內(nèi)膜癌的早期診斷率，并為子宮內(nèi)膜癌的病情監(jiān)測、綜合治療、預后判斷提供依據(jù)。E-cad與EpCAM可以通過Wnt信號通路發(fā)揮作用，兩者之間相互影響，因此以Wnt信號通路中的酶為靶點來調(diào)節(jié)E-cad與EpCAM的信號轉(zhuǎn)導，可能成為子宮內(nèi)膜癌的治療靶點，從而提高子宮內(nèi)膜癌的遠期生存率。

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Expression and significance of E-cad and EpCAM in endometrial carcinoma

Zhou Youwei，F(xiàn)ang Yihua，Yang Yuanyuan，et al
（Dept of Obstetrics and Gynecology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei230022）

ObjectiveTo study the expressioon of E-cadherins（E-cad）and epithelial cell adhesion molecule（Ep-CAM）in endometrial carcinoma and to explore the significance of E-cad and EpCAM in the initiation，progression and prognosis of endometrial carcinoma.MethodsThe expressions of E-cad and EpCAM in 30 specimens of normal proliferative phase endometrium，30 specimens of simple hyperplasia endometrium，30 specimens of complex hyperplasia or by atypical hyperplasia endometrium and 40 specimens of endometrial carcinoma were detected by immunohistochemial PV method，which were analysed with clinical feature.ResultsThe positive expression rate of the E-cad gradually declined in the process from normal proliferative phase endometrium to endometrial carcinoma as well as patients with an increase in the depth of myometrial invasion，lymph node metastasis and FIGO clinical stage，and EpCAM is opposite（P＜0.05）;the expressioon of E-cad and EpCAM in endometrial carcinoma was negatively correlated（P＜0.05）.ConclusionThe low expressioon of E-cad and high expressioon of EpCAM in endometrial carcinoma and the negative correlation between them are conneted with malignant degree and prognosis in endometrial carcinoma，which suggests the possibility of the Wnt signaling pathway-based molecular targeted therapy.

endometrial carcinoma;E-cadherins;epithelial cell adhesion molecule

R 711.7

A

1000－1492（2014）05－0629－04

2014－02－17接收

安徽省高等學校省級自然科學研究項目（編號:KJ2009B011Z）

安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，合肥 230022

周猷偉，男，碩士研究生;

楊媛媛，女，副主任醫(yī)師，責任作者，E-mail:wlj69513@sina.com;

顏士杰，女，主任醫(yī)師，碩士生導師，責任作者，E-mail:ysj5851@126.com