核因子κB 65及黏附分子在妊娠高血壓綜合征患者胎盤組織中的表達(dá)及意義

牟華平，袁志平，陳佳蓮，鄧 黎

(四川省宜賓市第二人民醫(yī)院，1.婦產(chǎn)科; 2.腫瘤科，四川 宜賓，644000)

妊娠高血壓綜合征(PIH)是妊娠期的常見疾病，是孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒發(fā)病及死亡的主要原因，但其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未明確。近年來(lái)的研究[1-3]表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活和損傷是PIH病理生理變化中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。核因子κB(NF-κB)是調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞激活的重要轉(zhuǎn)錄因子之一[4-5]，細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)及血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)是介導(dǎo)炎性細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附和結(jié)合的主要黏附分子，均含有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)[6-7]，本研究通過(guò)檢測(cè)PIH患者胎盤組織中NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)水平，探討其在PIH發(fā)病中可能的參與機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

選取2013年1月—2014年1月住院分娩的PIH患者58例設(shè)為PIH組，所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)《妊娠期高血壓疾病診治指南(2012版)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。年齡23～34歲，平均(28.45±3.16)歲；分娩時(shí)孕周37～41.5周，平均(38.37±1.21)周；輕度20例、中度18例、重度20例。另選取同期正常產(chǎn)婦40例設(shè)為對(duì)照組，年齡22～34歲，平均(29.12±3.57)歲；分娩時(shí)孕周37～42周，平均(38.69±1.44)周。2組均為無(wú)感染征象、胎膜早破或妊娠合并癥的初產(chǎn)婦，且年齡、分娩孕周等比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2組均于胎盤娩出即刻在距臍帶附著點(diǎn)3 cm處的母體面取無(wú)機(jī)化、鈣化及出血的胎盤組織，大小為1.0 cm×1.0 cm×0.6 cm，沖掉血液后，以10%甲醛固定6～12 h，石蠟包埋后4 ℃冰箱保存待測(cè)。

采用免疫組化法檢測(cè)胎盤組織中NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)。NF-κB65、ICAM-1免疫組化SP試劑盒及鼠抗人單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；VCAM-1免疫組化SABC試劑盒及兔抗人多克隆抗體均購(gòu)自武漢博士德生物公司。

陽(yáng)性表達(dá)以綜合計(jì)分法進(jìn)行半定量分析：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分為5級(jí): <5%計(jì)1分，5%～25%計(jì)2分，26%～50%計(jì)3分，51%～75%計(jì)4分，≥76%計(jì)5分。染色強(qiáng)度分為3級(jí)：弱染色計(jì)1分，中度染色計(jì)2分，強(qiáng)染色計(jì)3分。每張切片計(jì)分=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)得分×染色強(qiáng)度得分，最終計(jì)分<3為陰性，≥3為陽(yáng)性。表達(dá)強(qiáng)度判定：每張切片隨機(jī)測(cè)定5個(gè)區(qū)域的陽(yáng)性細(xì)胞平均吸光度值，反映各指標(biāo)表達(dá)強(qiáng)度。

2 結(jié) 果

2.1 2組胎盤組織中NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1的陽(yáng)性表達(dá)率比較

NF-κB65主要表達(dá)于絨毛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及滋養(yǎng)細(xì)胞的胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)，ICAM-1、VCAM-1主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。PIH組NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)，且隨著病情加重，陽(yáng)性表達(dá)率呈現(xiàn)出逐步升高的趨勢(shì)。PIH組NF-κB65、ICAM-1在滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，VCAM-1的表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，且陽(yáng)性表達(dá)率同樣呈現(xiàn)出隨病情加重逐步升高或降低的趨勢(shì)。見表1。

表1 2組胎盤組織中各指標(biāo)的陽(yáng)性表達(dá)率[n(%)]

2.2 2組胎盤組織中NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)強(qiáng)度值比較

PIH組NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，且隨著病情加重呈現(xiàn)逐步增強(qiáng)的趨勢(shì)。PIH組NF-κB65、ICAM-1在滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度值高于對(duì)照組(P<0.01)，VCAM-1的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，且同樣呈現(xiàn)出隨病情加重，表達(dá)強(qiáng)度逐步升高或降低的趨勢(shì)。PIH組輕、中、重度患者之間各指標(biāo)在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)強(qiáng)度均有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 2組胎盤組織中各指標(biāo)的表達(dá)強(qiáng)度值±s)

2.3 NF-κB65表達(dá)強(qiáng)度與ICAM-1、VCAM-1表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析，在PIH患者胎盤絨毛毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中，NF-κB65表達(dá)強(qiáng)度與ICAM-1、VCAM-1表達(dá)強(qiáng)度呈顯著正相關(guān)(r=0.951，0.894，P<0.01); 在絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中，NF-κB65表達(dá)強(qiáng)度與ICAM-1表達(dá)強(qiáng)度呈顯著正相關(guān)(r=0.801，P<0.01)，與VCAM-1表達(dá)強(qiáng)度無(wú)顯著相關(guān)性(r=-0.256，P>0.05)。見圖1～3。

圖1 血管內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB65與ICAM-1表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)趨勢(shì)圖

圖2 血管內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB65與VCAM-1表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)趨勢(shì)圖

圖3 滋養(yǎng)細(xì)胞中NF-κB65與ICAM-1表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)趨勢(shì)圖

3 討 論

PIH是妊娠中晚期的特發(fā)性疾病，以廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)、高脂血癥、血管痙攣、氧化應(yīng)激增加和凝血系統(tǒng)的激活為特征，主要臨床表現(xiàn)有高血壓、水腫、蛋白尿及凝血系統(tǒng)激活等。隨著遺傳學(xué)、分子生物學(xué)和免疫學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，越來(lái)越多的研究[9]表明血管內(nèi)皮細(xì)胞激活和損傷是PIH發(fā)病中的重要環(huán)節(jié)，其大多數(shù)臨床表現(xiàn)均與內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)密切相關(guān)。

NF-κB廣泛存在于多種類型細(xì)胞中，參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、凋亡及免疫細(xì)胞激活等多種生理病理過(guò)程[10]。激活的NF-κB通過(guò)與靶基因上的κB位點(diǎn)相結(jié)合，激活并影響其轉(zhuǎn)錄和翻譯，上調(diào)其表達(dá)水平。此外，NF-κB還參與生殖過(guò)程的某些重要環(huán)節(jié)，如維持母嬰之間的免疫平衡，調(diào)控妊娠過(guò)程中多種細(xì)胞因子的表達(dá)等。如顏露春等[11]研究表明，NF-κB65可能與其他因素共同作用啟動(dòng)孕婦劇烈的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生大量的人β-防御素-2，從而引發(fā)早產(chǎn)胎膜早破。NF-κB在靜息狀態(tài)下以無(wú)活性狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中，可通過(guò)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活并啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。在NF-κB家族成員中，p65是主要的促炎亞單位，因此本研究檢測(cè)NF-κB65可代表胎盤組織內(nèi)有生物活性的NF-κB。

細(xì)胞黏附分子是一類廣泛分布于細(xì)胞表面及細(xì)胞外基質(zhì)的糖蛋白，通過(guò)與配體結(jié)合發(fā)揮其生理、病理作用。ICAM-1和VCAM-1是介導(dǎo)炎性細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附結(jié)合的黏附分子，二者均含有NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)，其表達(dá)受NF-κB調(diào)控。在炎癥狀態(tài)下，VCAM-1可在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。曲鑫等[12]研究表明，ICAM-1和VCAM-1在PIH患者胎盤毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于正常產(chǎn)婦，且隨病情的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)表達(dá)逐步增加的趨勢(shì)。高嵐[13]、李敏清[14]等學(xué)者均認(rèn)為，ICAM-1和VCAM-1在PIH產(chǎn)婦的血清及胎盤組織中表達(dá)上調(diào)，可作為產(chǎn)婦內(nèi)皮細(xì)胞功能激活的標(biāo)記物。

本研究結(jié)果表明，在正常產(chǎn)婦胎盤組織中，NF-κB65、ICAM-1、VCAM-1均有一定表達(dá)，但在PIH產(chǎn)婦胎盤絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞中，這3項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)水平均顯著上升，與上述報(bào)道基本一致，提示其可能參與了PIH的發(fā)病過(guò)程，分析其機(jī)制可能與孕婦體內(nèi)高水平的氧自由基、脂多糖等激活NF-κB65，從而使ICAM-1和VCAM-1的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)上調(diào)，造成大量?jī)?nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞黏附，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活與損傷有關(guān)。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，在PIH產(chǎn)婦胎盤組織絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中，NF-κB65、ICAM-1的表達(dá)上升，且兩者呈顯著正相關(guān)，而VCAM-1的表達(dá)則顯著下調(diào)，且與NF-κB65、ICAM-1無(wú)顯著相關(guān)性，分析其原因可能是滋養(yǎng)細(xì)胞中ICAM-1主要受NF-κB65調(diào)控，而VCAM-1的表達(dá)同時(shí)還受其他因素的影響。

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