幽門螺旋桿菌及CA724、CEA聯(lián)檢對胃癌早期篩查的價(jià)值

李茂林，臧 嘉，蔣瑤麗，蔣 皎

(1. 江蘇省宜興市腫瘤醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 宜興，214200;2. 江蘇省無錫市婦幼保健醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 無錫，214002)

胃癌屬于一種胃黏膜上皮細(xì)胞癌癥，是消化道常見的惡性腫瘤之一，具有臨床發(fā)病率高、分布廣泛、死亡率高的特點(diǎn)，在中國胃癌死亡率占惡性腫瘤的23%，居惡性腫瘤之首，其發(fā)病的原因和病情發(fā)展的過程是多種因素共同作用的結(jié)果[1]。目前胃鏡是確診胃癌的最好方法，但早期胃癌易發(fā)生漏診。如何選擇特異性的腫瘤標(biāo)志物和相關(guān)指標(biāo)早期篩查胃癌，避免延誤病情，在臨床尤為重要。本文通過對本院就診的79例胃癌患者進(jìn)行血清幽門螺旋桿菌及CA724、CEA的聯(lián)合檢測，并與健康體檢者和胃良性病變者進(jìn)行對照，評估單獨(dú)及聯(lián)檢對胃癌早期篩查的應(yīng)用價(jià)值，為臨床早期診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

79例胃癌患者為2011年12月—2013年12月在本院門診及住院患者，均行電子胃鏡檢查并經(jīng)病理確診，其中男51例，女28例，平均54.5歲。選擇同期門診及住院的胃良性病變患者75例為胃良性病變組，其中男49例，女26例，平均55.2歲，其中慢性胃炎31例，胃潰瘍23例，胃息肉21例。選取同期來本院進(jìn)行體檢的健康人群85例為對照組，男46例，女39例，平均53.8歲。經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室排除消化系統(tǒng)腫瘤及胃良性病變，所有實(shí)驗(yàn)對象未合并高血壓和免疫系統(tǒng)疾病，且在近期無服藥史，在年齡、性別等無顯著差異，具有可比性。

1.2 幽門螺旋桿菌Hp檢測

幽門螺旋桿菌(Hp)IgG抗體檢測采用快速檢測法(膠體金法)，試劑來自新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司，常規(guī)采用血清標(biāo)本，操作之前對高脂、脂血、黃疸或受污染樣本在使用前過濾(0.45 μm)或離心處理；在檢測反應(yīng)板上標(biāo)上樣本名稱；加入25 μL的血清或血漿樣本至Assure H.Pylori Rapid Test加樣方孔；待樣本前沿剛越過粉紅色的質(zhì)控線(A)時(shí)，即刻加入2滴緩沖液至橢圓孔，不能讓樣本過線太多，必須在樣本前沿流出觀察孔之前加入緩沖液；拉下標(biāo)有Hp字樣的分離片直到感覺有阻力，再加入1滴緩沖液于加樣方孔，由于抗原抗體結(jié)合反應(yīng)濃集于膜上可使標(biāo)記物顯紅色，15 min后觀察結(jié)果判讀。

1.3 結(jié)果判讀

陽性結(jié)果：質(zhì)控線(A)，CIM(B)和測試線(C)均顯示顏色條帶，或質(zhì)控線(A)和測試線(C)均顯示顏色條帶，僅有C線陽性提示曾經(jīng)感染。不同顏色深度的條帶都示為陽性反應(yīng)。陰性結(jié)果：僅質(zhì)控線(A)顯示顏色條帶。無效結(jié)果：質(zhì)控線(A)未顯示顏色條帶或質(zhì)控線(A)和CIM(B)皆顯示條帶而測試線(C)未有顯現(xiàn)。若出現(xiàn)此情況，需要用新的檢測反應(yīng)板重新檢測。

1.4 血清CEA 、CA724檢測

儀器采用瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)E 170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀；儀器校準(zhǔn)：每批試劑盒必須用新鮮試劑和Cal 1，Cal 2定標(biāo)1次；采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過程18 min完成。CEA>3.4 ng/mL,CA724>6.9 IU/mL為陽性診斷界值。采用Elecsys腫瘤標(biāo)志物質(zhì)控品1和2 (PreciControl Tumor Marker)。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24 h或每1次定標(biāo)后測定1次。檢測值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌、胃良性疾病患者及對照組Hp檢出率與血清CEA 、CA724水平比較

胃癌組Hp檢出率與血清CEA 、CA724水平與胃良性疾病患者及對照組比較均明顯升高(P<0.05)，胃良性疾病患者與對照組Hp檢出率有明顯變化(P<0.05)而血清CEA 、CA724無明顯變化(P>0.05)。見表1。

表1 各組Hp檢出率與血清CEA 、CA724檢測水平

2.2 胃癌、胃良性疾病患者及對照組Hp及CEA、CA724陽性檢出率比較

胃癌組Hp及血清CEA 、CA724陽性檢出率明顯高于胃良性疾病組和對照組(P<0.05)，胃良性疾病組與對照組Hp陽性檢出率有明顯變化(P<0.05)，血清CEA 、CA724陽性檢出率無明顯變化(P>0.05)。見表2。

表2 各組Hp檢出率與血清CEA、CA724陽性檢出率比較 %

2.3 Hp、CEA、CA724及其聯(lián)合檢測在胃癌診斷中的評價(jià)

Hp、CEA、CA724聯(lián)合檢測的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均明顯高于單項(xiàng)檢測(P<0.05)，見表3。

表3 Hp、CEA、CA724及其聯(lián)合檢測在胃癌診斷中的評價(jià) %

3 討 論

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，因其發(fā)病率高，早診斷、早治療顯得尤為重要。目前臨床及實(shí)驗(yàn)研究大都集中于幾項(xiàng)比較敏感及特異的腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測上，而作為胃癌相關(guān)重要因素之一的Hp與胃癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測在胃癌早期診斷中的價(jià)值，目前研究較少。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)探討Hp及CA724、CEA聯(lián)合檢測的意義，評估單獨(dú)及聯(lián)檢對胃癌早期篩查的應(yīng)用價(jià)值，為臨床早期診斷提供依據(jù)。

幽門螺旋桿菌與胃癌關(guān)系密切，其是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌，長2.5～4.0 mm，寬0.5～1.0 mm，革蘭染色呈陰性，在胃黏膜上皮細(xì)胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。流行病學(xué)調(diào)查顯示，幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生存在顯著相關(guān)性，Hp感染后胃癌發(fā)生率增加4～9倍，且60%胃癌患者有Hp感染[2]。在20世紀(jì)90年代，國際癌癥研究中心(IARc)已將幽門螺桿菌為人類胃癌的第一類致癌物。近年來，通過對幽門螺桿菌感染的大量研究[3-5]中提出了其致胃癌的可能性，機(jī)制如下: ① 細(xì)菌的代謝產(chǎn)物直接轉(zhuǎn)化黏膜：釋放的胞質(zhì)毒素?fù)p傷胃黏膜的抗壞血酸分泌機(jī)制；Hp感染后所致的低胃酸導(dǎo)致細(xì)菌過度生長，亞硝酸鹽化合物聚集誘導(dǎo)癌變的發(fā)生; ② 上皮細(xì)胞的增殖：Hp感染后所致的炎性免疫反應(yīng)產(chǎn)生的細(xì)胞因子與細(xì)胞相互作用，促進(jìn)細(xì)胞增生，細(xì)胞增生加速亦可能是細(xì)胞損傷的一種代償反應(yīng)，與生長因子活性及數(shù)量成正比，導(dǎo)致上皮細(xì)胞更新加速; ③ 基因的變異：幽門螺桿菌本身能誘發(fā)基因毒性作用，類同于病毒的致病機(jī)制，Hp-DNA的某些片段轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，引起轉(zhuǎn)化，癌基因表達(dá)增多，與細(xì)胞生長因子特異性結(jié)合，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[6-7]。目前幽門螺旋桿菌Hp檢測采用快速檢測法(膠體金法)，靈敏度和特異性有一定局限性，陰性結(jié)果并不排除接觸或受幽門螺旋桿菌感染的可能性，現(xiàn)癥感染條帶呈陰性并不排除目前受感染的可能性，因?yàn)椴煌瑓^(qū)域人群的抗體對于現(xiàn)癥感染條帶抗體的反應(yīng)普遍性存在差異，所以需要結(jié)合其他特異性指標(biāo)來進(jìn)行胃癌的早期篩查。

腫瘤標(biāo)志物對腫瘤的診斷具有明確的臨床價(jià)值，其可在影像學(xué)檢查異常之前即有不同程度升高，故對早期診斷有重要價(jià)值[8]。理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)具備特異性強(qiáng)及靈敏性高的特點(diǎn)，但腫瘤標(biāo)志物是腫瘤發(fā)生和增殖中由腫瘤細(xì)胞生物合成釋放的一類物質(zhì)，是與腫瘤有關(guān)的抗原，而非腫瘤的特異性抗原。一種腫瘤可以出現(xiàn)多種腫瘤標(biāo)志物，同一種腫瘤標(biāo)志物可以出現(xiàn)在幾種不同的腫瘤中[9]，這就降低腫瘤標(biāo)志物靈敏性和特異性，在臨床應(yīng)用中有局限性，聯(lián)合檢測可彌補(bǔ)其局限性，提高腫瘤診斷的陽性率。癌胚抗原(CEA)是特異性的癌胚蛋白之一，正常CEA分泌進(jìn)入胃腸道而癌細(xì)胞分泌CEA進(jìn)入血液和淋巴，因此惡性腫瘤患者血中CEA增高。它主要是胃腸道腫瘤的標(biāo)志物，具有免疫抑制，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。TNM臨床分期I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清CEA含量隨著分期增加呈逐級遞增趨勢，其中Ⅳ期明顯高于其他各期，提示CEA升高有助于胃癌患者的篩查診斷、臨床分期、病情判斷和預(yù)后評價(jià)。有研究亦表明CEA升高可以輔助早期診斷，在胃癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者CEA升高較臨床影像或胃鏡提前2個(gè)月的時(shí)間[10]。高濃度CEA可干擾正常細(xì)胞黏附力，破壞上皮組織的完整性，有利于癌細(xì)胞黏附鄰近組織，促進(jìn)浸潤與轉(zhuǎn)移，提示CEA升高與癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[11]。

CA724是一種腫瘤相關(guān)糖蛋白，是診斷胃癌的可靠腫瘤標(biāo)志物。TN M臨床分期Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清CA724含量隨著分期增加呈逐級遞增趨勢，提示血清CA724升高有助于胃癌的診斷、病情判斷、預(yù)后評價(jià)[12]。有研究表明CA724對胃癌診斷的陽性率要優(yōu)于其他腫瘤標(biāo)志物，是檢測胃癌進(jìn)程和治療效果的有用標(biāo)志物，其含量與胃癌分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)受累及浸潤轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為關(guān)系密切。各種腫瘤標(biāo)志物在不同病理類型的腫瘤有不同檢出率，單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物在腫瘤中的檢出率及靈敏度有一定局限性，聯(lián)合檢測可以提高腫瘤的檢出率[13]。

檢測胃癌患者血清Hp、CEA與CA724有助于胃癌的早期診斷，其檢測方法簡單，臨床應(yīng)用方便。本實(shí)驗(yàn)采用的膠體金血清標(biāo)本Hp檢測，不同于以往的胃組織標(biāo)本Hp檢測，無創(chuàng)、取樣方便，與腫瘤標(biāo)志物相比具有快捷、價(jià)格低、就診患者容易接受等優(yōu)點(diǎn)[14]，在對疑似胃癌或胃癌高危人群進(jìn)行篩查時(shí)，可以考慮將其作為首選檢查項(xiàng)目，但因在良性病變中陽性率也較高，所以需結(jié)合腫瘤標(biāo)志物CEA、CA724三聯(lián)檢測，提高胃癌診斷的靈敏度，有效防止漏診，為臨床早期診斷胃癌提供重要依據(jù)。

[1] Chun-Hao Huang，Shyh-Horng Chiou. Clinical proteomics identifies potential biomarkers in Helicobacter pylori for gastrointestinal diseases[J]. World J Gastroenterol，2014，20(6): 1529.

[2] IL Ju Choi. Current evidence of effects of Helicobacter pylori eradication on prevention of gastric cancer[J]. Korean J Intern Med，2013，28: 525.

[3] Jemai A，Bray F，Center M M，et al. Global cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin，20l1，61(2): 69.

[4] Correa P，Piazuelo M B. Evolutionary History of the Helicobacter pylori Genome: Implications for Gastric carcinogenesis[J]. Gut Liver，2012，6(1): 21.

[5] Miyashita T，Miwa K，Tajima H，et al. Spontaneous clearance of Helicobacter pylori after pylorus-preserving gastrectomy for gastric cancer[J]. Oncol Rep，2013，30: 299.

[6] Motoyama K，Inoue H，Mimori K，et al. Clinicopathological and prognostic significance of PDCD4 and microRNA-21 in human gastric cancer[J]. Int J Oncol，2011，36(5): 1089.

[7] Marquez R T，Wendlandt E，Galle C S，et al. MicroRNA-21 is upregulated during the proliferative phase of liver regeneration，targets Pellino-1，and inhibits NF-kappaB signaling[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2010，298(4): G535.

[8] 張輝. 胃癌患者CEA、CA19-9與CA724聯(lián)合檢測的臨床意義[J]. 當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15(16): 81.

[9] 粟文堂，舒玲玲，楊華喜，等. 聯(lián)合檢測血清腫瘤標(biāo)志物對胃癌的診療意義[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(10): 585.

[10] Miyake K，Imura S，Nishioka M，et al. Serum evaluation of soluble interferon-alpha/beta receptor and high-sensitivity C-reactive protein for diagnosis of the patients with gastrointestinal and hepatobiliary-pancreatic cancer[J]. Cytokine，2010，49(3): 251.

[11] McMillan D C，McArdle C S，Morrison D S. A clinical risk score to predict 3，5 and 10 year survival in patients undergoing surgery for Dukes B colorectal cancer[J]. Br J Cancer，2010，103(7): 970.

[12] Nabeshima K，Ogoshi K. Relationship between Helicobacter pylori and histological changes in the gastric remnant after subtotal gastrectomy[J]. Tokai J Exp Clin Med，2011，36: 139.

[13] Yang J Y，Wei W，Liu J G，et al. Clinical significance of elevation of serum CA125 level in patients with metastatic bladder carcinoma[J]. The Chinese-German Journal of Clinical Oncology，2008，7(8): 477.

[14] Malfertheiner P，Megraud F，Atherton J，et al. Management of Helicobacter pylori infection--the Maastricht IV/ Florence Consensus Report[J]. Gut，2012，61: 646.