口蹄疫基因工程疫苗研究進(jìn)展

宋昌霖

摘要：口蹄疫是感染偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，預(yù)防的該病的首要方式為疫苗接種。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗存在長期帶毒、毒力返強(qiáng)等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：口蹄疫；新型疫苗；構(gòu)建；效力

中圖分類號(hào)：S851.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動(dòng)物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病之首。疫苗接種是預(yù)防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是預(yù)防口蹄疫發(fā)生先決條件。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗多為滅活疫苗和弱毒疫苗，但此類疫苗由于面臨長期帶毒、毒性較大、產(chǎn)生抗體緩慢和毒力返強(qiáng)等不安全因素，國內(nèi)外研究者致力于研究新型疫苗以解決傳統(tǒng)口蹄疫所產(chǎn)生的問題。本文就新型口蹄疫苗研究進(jìn)展作詳細(xì)闡述。

1活載體疫苗

口蹄疫活載體疫苗是利用基因雜交技術(shù)將FMDV的主要抗原基因插入某種缺陷病毒的基因組中構(gòu)建而成的重組病毒，該重組病毒能在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)FMDV抗原蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而來的非復(fù)制型載體[1]。因?yàn)榭谔阋卟《臼峭ㄟ^呼吸道感染的，而且容易形成持續(xù)感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重點(diǎn)，例如沙門氏菌、分枝結(jié)核桿菌作載體的活載體疫苗?；钶d體疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的熱點(diǎn)之一。

1.1口蹄疫重組腺病毒載體疫苗

賈俊濤等[2]等究選擇O型FMDV VPI基因上保守序列作為可能的干擾位點(diǎn)，合成了siRNA，重組表達(dá)載體pShuttle-VPl。將rAdeno-VPl感染IBRS-2細(xì)胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。結(jié)果顯示，重組腺病毒能夠抑制FMDV的復(fù)制。盧曾軍分別構(gòu)建了FMDV O、A型P1-2A和3C編碼區(qū)基因重組腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后獲得較好的保護(hù)性免疫反應(yīng)，免疫豬28d后用同型的FMDV攻擊，免疫豬的保護(hù)率為75%。

1.2口蹄疫重組痘病毒載體疫苗

金明蘭等[4]對(duì)FMDV衣殼蛋白前體P1-2A和蛋白酶3C基因重組痘病毒在豚鼠、仔豬體內(nèi)的毒性、分布及抗體消長規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，F(xiàn)MD重組雞痘病毒免疫的動(dòng)物在整個(gè)試驗(yàn)期間，未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀和不良反應(yīng)，病理組織切片檢測(cè)無明顯的組織學(xué)變化；PCR、RT—PCR檢測(cè)各主要臟器內(nèi)檢測(cè)到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分組織能存在3 d左右；FMD重組雞痘病毒均可誘導(dǎo)免疫動(dòng)物產(chǎn)生較高水平的抗FMDV特異性抗體和中和抗體。Ma等[5]用雞痘病毒作載體構(gòu)建了表達(dá)FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重組疫苗，進(jìn)一步證明了該重組疫苗的免疫效果。在攻毒試驗(yàn)中，免疫豬保護(hù)率可達(dá)到80%。

1.3口蹄疫重組沙門氏菌載體疫苗

劉明秋等[6]將口蹄疫病毒疫苗基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pB01電轉(zhuǎn)化到減毒的豬霍亂沙門菌C3500中，構(gòu)建成抗O型口蹄疫病毒的重組活菌苗pB01/S.cho.血清凝集實(shí)驗(yàn)顯示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，檢測(cè)重組菌在家兔體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化學(xué)合成法人工根據(jù)抗原表位的氨基酸序列合成抗原決定簇的小肽，再鏈接到大分子載體，并加入佐劑制成的疫苗。合成的小肽由多個(gè)B細(xì)胞和T細(xì)胞抗原表位決定，具有高純度和穩(wěn)定的特性。我國已研制出了豬用O型口蹄疫合成

摘要：口蹄疫是感染偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，預(yù)防的該病的首要方式為疫苗接種。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗存在長期帶毒、毒力返強(qiáng)等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：口蹄疫；新型疫苗；構(gòu)建；效力

中圖分類號(hào)：S851.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動(dòng)物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病之首。疫苗接種是預(yù)防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是預(yù)防口蹄疫發(fā)生先決條件。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗多為滅活疫苗和弱毒疫苗，但此類疫苗由于面臨長期帶毒、毒性較大、產(chǎn)生抗體緩慢和毒力返強(qiáng)等不安全因素，國內(nèi)外研究者致力于研究新型疫苗以解決傳統(tǒng)口蹄疫所產(chǎn)生的問題。本文就新型口蹄疫苗研究進(jìn)展作詳細(xì)闡述。

1活載體疫苗

口蹄疫活載體疫苗是利用基因雜交技術(shù)將FMDV的主要抗原基因插入某種缺陷病毒的基因組中構(gòu)建而成的重組病毒，該重組病毒能在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)FMDV抗原蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而來的非復(fù)制型載體[1]。因?yàn)榭谔阋卟《臼峭ㄟ^呼吸道感染的，而且容易形成持續(xù)感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重點(diǎn)，例如沙門氏菌、分枝結(jié)核桿菌作載體的活載體疫苗?；钶d體疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的熱點(diǎn)之一。

1.1口蹄疫重組腺病毒載體疫苗

賈俊濤等[2]等究選擇O型FMDV VPI基因上保守序列作為可能的干擾位點(diǎn)，合成了siRNA，重組表達(dá)載體pShuttle-VPl。將rAdeno-VPl感染IBRS-2細(xì)胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。結(jié)果顯示，重組腺病毒能夠抑制FMDV的復(fù)制。盧曾軍分別構(gòu)建了FMDV O、A型P1-2A和3C編碼區(qū)基因重組腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后獲得較好的保護(hù)性免疫反應(yīng)，免疫豬28d后用同型的FMDV攻擊，免疫豬的保護(hù)率為75%。

1.2口蹄疫重組痘病毒載體疫苗

金明蘭等[4]對(duì)FMDV衣殼蛋白前體P1-2A和蛋白酶3C基因重組痘病毒在豚鼠、仔豬體內(nèi)的毒性、分布及抗體消長規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，F(xiàn)MD重組雞痘病毒免疫的動(dòng)物在整個(gè)試驗(yàn)期間，未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀和不良反應(yīng)，病理組織切片檢測(cè)無明顯的組織學(xué)變化；PCR、RT—PCR檢測(cè)各主要臟器內(nèi)檢測(cè)到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分組織能存在3 d左右；FMD重組雞痘病毒均可誘導(dǎo)免疫動(dòng)物產(chǎn)生較高水平的抗FMDV特異性抗體和中和抗體。Ma等[5]用雞痘病毒作載體構(gòu)建了表達(dá)FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重組疫苗，進(jìn)一步證明了該重組疫苗的免疫效果。在攻毒試驗(yàn)中，免疫豬保護(hù)率可達(dá)到80%。

1.3口蹄疫重組沙門氏菌載體疫苗

劉明秋等[6]將口蹄疫病毒疫苗基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pB01電轉(zhuǎn)化到減毒的豬霍亂沙門菌C3500中，構(gòu)建成抗O型口蹄疫病毒的重組活菌苗pB01/S.cho.血清凝集實(shí)驗(yàn)顯示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，檢測(cè)重組菌在家兔體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化學(xué)合成法人工根據(jù)抗原表位的氨基酸序列合成抗原決定簇的小肽，再鏈接到大分子載體，并加入佐劑制成的疫苗。合成的小肽由多個(gè)B細(xì)胞和T細(xì)胞抗原表位決定，具有高純度和穩(wěn)定的特性。我國已研制出了豬用O型口蹄疫合成

摘要：口蹄疫是感染偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，預(yù)防的該病的首要方式為疫苗接種。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗存在長期帶毒、毒力返強(qiáng)等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：口蹄疫；新型疫苗；構(gòu)建；效力

中圖分類號(hào)：S851.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007-273X（2014）05-0073-01

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動(dòng)物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病之首。疫苗接種是預(yù)防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是預(yù)防口蹄疫發(fā)生先決條件。傳統(tǒng)口蹄疫疫苗多為滅活疫苗和弱毒疫苗，但此類疫苗由于面臨長期帶毒、毒性較大、產(chǎn)生抗體緩慢和毒力返強(qiáng)等不安全因素，國內(nèi)外研究者致力于研究新型疫苗以解決傳統(tǒng)口蹄疫所產(chǎn)生的問題。本文就新型口蹄疫苗研究進(jìn)展作詳細(xì)闡述。

1活載體疫苗

口蹄疫活載體疫苗是利用基因雜交技術(shù)將FMDV的主要抗原基因插入某種缺陷病毒的基因組中構(gòu)建而成的重組病毒，該重組病毒能在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)FMDV抗原蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而來的非復(fù)制型載體[1]。因?yàn)榭谔阋卟《臼峭ㄟ^呼吸道感染的，而且容易形成持續(xù)感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重點(diǎn)，例如沙門氏菌、分枝結(jié)核桿菌作載體的活載體疫苗?；钶d體疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的熱點(diǎn)之一。

1.1口蹄疫重組腺病毒載體疫苗

賈俊濤等[2]等究選擇O型FMDV VPI基因上保守序列作為可能的干擾位點(diǎn)，合成了siRNA，重組表達(dá)載體pShuttle-VPl。將rAdeno-VPl感染IBRS-2細(xì)胞后，12 h后再加入100 TCID50的FMDVO/HKN/2003。結(jié)果顯示，重組腺病毒能夠抑制FMDV的復(fù)制。盧曾軍分別構(gòu)建了FMDV O、A型P1-2A和3C編碼區(qū)基因重組腺病毒，O/Ad5-P12X3C免疫豚鼠后獲得較好的保護(hù)性免疫反應(yīng)，免疫豬28d后用同型的FMDV攻擊，免疫豬的保護(hù)率為75%。

1.2口蹄疫重組痘病毒載體疫苗

金明蘭等[4]對(duì)FMDV衣殼蛋白前體P1-2A和蛋白酶3C基因重組痘病毒在豚鼠、仔豬體內(nèi)的毒性、分布及抗體消長規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，F(xiàn)MD重組雞痘病毒免疫的動(dòng)物在整個(gè)試驗(yàn)期間，未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀和不良反應(yīng)，病理組織切片檢測(cè)無明顯的組織學(xué)變化；PCR、RT—PCR檢測(cè)各主要臟器內(nèi)檢測(cè)到FPV DNA和FMDV DNA，且在大部分組織能存在3 d左右；FMD重組雞痘病毒均可誘導(dǎo)免疫動(dòng)物產(chǎn)生較高水平的抗FMDV特異性抗體和中和抗體。Ma等[5]用雞痘病毒作載體構(gòu)建了表達(dá)FMDV P1-2A、3C和IL-18基因的重組疫苗，進(jìn)一步證明了該重組疫苗的免疫效果。在攻毒試驗(yàn)中，免疫豬保護(hù)率可達(dá)到80%。

1.3口蹄疫重組沙門氏菌載體疫苗

劉明秋等[6]將口蹄疫病毒疫苗基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pB01電轉(zhuǎn)化到減毒的豬霍亂沙門菌C3500中，構(gòu)建成抗O型口蹄疫病毒的重組活菌苗pB01/S.cho.血清凝集實(shí)驗(yàn)顯示即具有免疫原性.采用口服方式免疫家兔，檢測(cè)重組菌在家兔體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。

2合成肽疫苗

口蹄疫合成肽肽疫苗是利用化學(xué)合成法人工根據(jù)抗原表位的氨基酸序列合成抗原決定簇的小肽，再鏈接到大分子載體，并加入佐劑制成的疫苗。合成的小肽由多個(gè)B細(xì)胞和T細(xì)胞抗原表位決定，具有高純度和穩(wěn)定的特性。我國已研制出了豬用O型口蹄疫合成