一株羊源產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離與鑒定

金鐸+林家琪+董真等

摘要：2013年4月，揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院畜禽門診接診一例山羊急性死亡的病例，對(duì)其進(jìn)行剖檢，無(wú)菌恒溫厭氧分離培養(yǎng)，純化鑒別，革蘭氏染色，生化反應(yīng)，結(jié)果表明為產(chǎn)氣莢膜梭菌，并對(duì)此進(jìn)行了一定的討論。

關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭菌；分離；鑒定

中圖分類號(hào)：S858.26 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2014）06-0005-02

產(chǎn)氣莢膜梭菌舊名魏氏梭菌，產(chǎn)氣莢膜桿菌，根據(jù)致死性毒素與其抗毒素的中和試驗(yàn)，將此菌分為A、B、C、D、E 5個(gè)類型，以菌體抗原進(jìn)行血清型分類意義不大，菌體抗原與毒素分型之間沒(méi)有明顯關(guān)系，毒素至少已經(jīng)發(fā)現(xiàn)15種，其中α、β、ε、ι、δ、θ、κ、λ、μ、υ、CPE、其他毒素、神經(jīng)氨酸酶等。A型、C型、D型的某些菌株可以產(chǎn)生腸毒素，A型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要引起動(dòng)物的氣性壞疽，牛、羔羊、新生羊駝、馴鹿、仔豬、家兔的腸毒血癥，B型菌主要引起羔羊痢疾，還可以引起犢牛、羔羊、山羊的腸毒血癥或壞死性腸炎，C型菌是綿羊猝狙的病原。D型、E型菌也是導(dǎo)致牛羊腸毒血癥和豬的腹瀉[1]。筆者結(jié)合相關(guān)知識(shí)，將一例羊源產(chǎn)氣莢膜梭菌感染病例介紹如下。

1 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

2013年4月，江蘇某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的240多只母山羊陸續(xù)產(chǎn)羔，羔羊在產(chǎn)后24～48 h開始出現(xiàn)劇烈腹瀉，拉水樣黑色稀糞，虛弱，隨后死亡，死亡率達(dá)60%。剖檢后發(fā)現(xiàn)病死羊羔嚴(yán)重脫水，真胃和大腸內(nèi)容物呈糊狀，小腸壁變薄，或黃或黑，透明，充滿空氣，部分腸道黏膜充血，卡他性出血性炎癥，肝臟腫大。疑似為產(chǎn)氣莢膜梭菌感染，需進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.2 細(xì)菌分離

取山羊的腸道、肝臟、脾臟、腎臟等病變組織在無(wú)菌環(huán)境下接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基，在37℃條件下用燭缸厭氧培養(yǎng)24 h。然后在無(wú)菌條件下分別挑取血平板上的單個(gè)菌落，用鮮血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別培養(yǎng)。取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

1.3 生化試驗(yàn)

利用細(xì)菌微量生化反應(yīng)管（購(gòu)于杭州微生物試劑有限公司，操作方法與判定標(biāo)準(zhǔn)參照該公司操作方法與標(biāo)準(zhǔn)）對(duì)所分離的菌株進(jìn)行生化指標(biāo)測(cè)定，牛乳發(fā)酵活性實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離

取山羊的病變組織（肺臟）在無(wú)菌環(huán)境下接種于血瓊脂培養(yǎng)基中，37 ℃條件培養(yǎng)24 h后出現(xiàn)圓形光滑、隆起、淡黃色的菌落。菌落周圍有溶血環(huán)，出現(xiàn)明顯的雙溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)為完全溶血，外圍為不完全溶血環(huán)。經(jīng)過(guò)純化培養(yǎng)，麥康凱瓊脂板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果菌體為直桿狀，兩端鈍圓，單個(gè)或成雙的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。

2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

分離菌接種在生化反應(yīng)管后于37℃培養(yǎng)24h后，取出觀察，分離細(xì)菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖等，牛乳發(fā)酵活性試驗(yàn)呈陽(yáng)性。結(jié)合剖檢癥狀，確定為產(chǎn)氣莢膜棱菌感染。

3 討 論

該病例羊的腸道出現(xiàn)明顯卡他性滲出并伴有出血癥狀，肝臟和腎臟有壞死灶。分離菌株為直桿狀，兩端鈍圓，單個(gè)或成雙的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，芽孢大而卵圓。通過(guò)生化試驗(yàn)檢驗(yàn)，與產(chǎn)氣莢膜梭菌的生化反應(yīng)結(jié)果一致，從而證明分離菌是產(chǎn)氣莢膜梭菌。該病例的死亡率較高，對(duì)羊群危害較大。該病的防治重在飼養(yǎng)管理，保持環(huán)境，溫濕度穩(wěn)定。平時(shí)要注意環(huán)境衛(wèi)生，及時(shí)清理舍內(nèi)糞便，定期用生石灰、百毒殺等消毒。不要突然更換飼料，平時(shí)可在飼料中添加微量元素和益生菌以調(diào)節(jié)腸道中的正常菌群平衡對(duì)減少該病的發(fā)生具有一定的效果[3]。加強(qiáng)對(duì)畜舍環(huán)境和糞便內(nèi)產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢測(cè)和監(jiān)控有利于該病的防控，對(duì)暴發(fā)過(guò)該病的地區(qū)，需要掌握其流行形勢(shì)以便于采取合理防治措施[4]。該疾病發(fā)展太快，治療一般效果不明顯。接種疫苗是預(yù)防該病的有效方法，預(yù)防羔羊痢疾、猝狙，腸毒血癥等，可用三聯(lián)菌苗和五聯(lián)菌苗進(jìn)行免疫防治。

由于產(chǎn)氣莢膜梭菌病常呈急性散發(fā)， 目前尚無(wú)有效的治療措施，治療時(shí)一般遵循強(qiáng)心補(bǔ)液、解毒、鎮(zhèn)靜、調(diào)理腸胃的原則， 進(jìn)行對(duì)癥治療；給予抗生素等藥物， 如青霉素、四環(huán)素等，值得注意的是，磺胺嘧啶和多黏菌素類藥物對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌沒(méi)有抑制作用，對(duì)其他的細(xì)菌卻有較強(qiáng)的抑制作用[5]，應(yīng)用這兩類藥物治療產(chǎn)氣莢膜梭菌往往不會(huì)得到理想的結(jié)果；采用同型的高免血清治療， 可收到一定的效果。在中藥治療方面，一般用能增加胃腸蠕動(dòng)、清熱解毒、涼血止痢、阻止瘟疫熱毒進(jìn)入機(jī)體的中藥， 如黃芩黃連解毒湯加減， 煎水灌服， 每天2次，連用3～5 d， 可收到良好的效果[6]。臨床上，產(chǎn)氣莢膜梭菌常與其他細(xì)菌混合感染，如巴氏桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌等[7]，在診斷和治療的時(shí)候應(yīng)格外注意，不僅要針對(duì)單一病原采取對(duì)癥治療措施，也要注意可能的繼發(fā)感染。

產(chǎn)氣莢膜梭菌是羊腸道內(nèi)正常菌，正常情況下數(shù)量有限，腸道菌群處于平衡狀態(tài)，其發(fā)病原因主要與氣候變化飼養(yǎng)管理不當(dāng)或疫苗免疫失敗等有關(guān)，如長(zhǎng)期陰雨潮濕飼喂精料過(guò)多粗纖維含量較少，致使腸道正常菌群失調(diào)，產(chǎn)氣莢膜梭菌大量繁殖，產(chǎn)生毒素，使機(jī)體發(fā)病產(chǎn)氣莢膜梭菌有不同的血清型[8]，確診該病應(yīng)依靠實(shí)驗(yàn)室診斷血清型鑒定，否則可能導(dǎo)致誤診。

參考文獻(xiàn)：

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