茶樹(shù)根抗痛風(fēng)作用的實(shí)驗(yàn)研究*

★ 余雄英 周軍 曹樹(shù)穩(wěn) 劉升長(zhǎng)

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004 ； 2.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江西 南昌 330047)

隨著人民生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，各國(guó)痛風(fēng)發(fā)病率均與日俱增，痛風(fēng)患者還出現(xiàn)了年輕化的趨勢(shì)。因此研究痛風(fēng)，開(kāi)發(fā)防治痛風(fēng)、高尿酸血癥的藥物已成為當(dāng)前醫(yī)藥界研究的一個(gè)熱點(diǎn)。黃嘌呤氧化酶 ( Xanthine Oxidase )，簡(jiǎn)稱 XOD ,是尿酸生成的關(guān)鍵酶，同時(shí)XOD也是治療高尿酸血癥的藥物作用靶點(diǎn)[1]。茶樹(shù)根為山茶科山茶屬植物茶的根，味苦，性平，具有強(qiáng)心利尿、抗菌消炎、收斂止瀉的功效。臨床上用于風(fēng)濕性、高血壓性及肺原性心臟病、冠心病、心律不齊等疾病[2]。目前茶樹(shù)根化學(xué)成分研究表明新鮮根含水蘇糖、棉子糖、蔗糖、葡萄糖、果糖等糖類，并含少量多酚化合物(黃烷醇等)、萜類皂苷類成分[3]。江西民間常用茶樹(shù)根來(lái)治療痛風(fēng)[4]。本實(shí)驗(yàn)就其抗痛風(fēng)作用的藥理作用進(jìn)行了研究。

1 材料

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，雄性，體重(30±2 )g，許可證號(hào)：Scxk(贛)2011-0001，江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究室提供。使用前在實(shí)驗(yàn)室1周以適應(yīng)環(huán)境。

1.2 儀器和試劑 7200型可見(jiàn)分光光度計(jì)(尤尼柯(上海)儀器有限公司)。游標(biāo)卡尺(桂林廣陸數(shù)字測(cè)控股份公司);尿酸(Sigma)，氧嗪酸鉀鹽(potassium oxonate，Aldrich Chemical Company)，尿酸測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號(hào)20110527)，XOD測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號(hào)20110628)，別嘌呤醇片(上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份有限公司), 吲哚美辛片(江蘇亞邦藥業(yè)集團(tuán)股份有限制造分公司生產(chǎn))。

茶樹(shù)根采自茶園，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院吳志瑰講師鑒定為山茶科山茶屬植物茶Camellia sinensis(L.)O.Kuntze[Thea sinensis L.]的干燥根。

2 方法

2.1 試劑配制

2.1.1 尿酸、氧嗪酸鉀鹽混懸液的制備 精密稱取尿酸、氧嗪酸鉀鹽，分別用0.9%CMC-Na 配制混懸液，其濃度分別為 15 g·L-1和45 g·L-1。

2.1.2 別嘌呤醇液制備 取別嘌呤醇片10片,加蒸餾水溶解配成1.5 g·L-1。

2.1.3 茶樹(shù)根水煎劑的制備 按水煎煮工藝自制，配制成含生藥2 g·mL-1。

2.1.4 尿酸鈉結(jié)晶及尿酸鈉溶液的制備 參照文獻(xiàn)[5]略作改進(jìn)，取194mL蒸餾水加6 mL NaOH (1 M) ，煮沸后加1.0 g尿酸，用1NHCl ，調(diào)pH至7.2 ，攪拌冷卻 ，貯存于4 ℃冰箱中24 h抽濾，干燥得尿酸鈉結(jié)晶。取1250mg尿酸鈉結(jié) 晶 ，加入45mL生理鹽水，同時(shí)加入5mL吐溫80 ，加熱攪拌 ，配成50mL尿酸鈉混懸溶液備用 (25mg/mL)。

2.2 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的建立 參照文獻(xiàn)[6]等的經(jīng)典方法略作改進(jìn)。用6號(hào)注射針在受試小鼠右足墊部注射尿酸鈉溶液0.05mL，誘導(dǎo)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。

2.3 痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠模型分組與給藥和測(cè)量 取50只小鼠隨機(jī)分為5組 ，造模前3天開(kāi)始灌胃給藥 ，每日1次 。生理鹽水組以同體積生理鹽水灌胃。于末次給藥后30min,除生理鹽水組小鼠在右足墊部注射生理鹽水0.05mL外，其余各組小鼠在右足墊部注射尿酸鈉混懸溶液0.05mL，誘導(dǎo)誘導(dǎo)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。分別用游標(biāo)卡尺測(cè)量各組小鼠在致炎前和致炎后1、3、5 h小鼠右足墊部的寬度，以致炎前后的差值作為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的腫脹度。

觀察造模大鼠治療前后各組關(guān)節(jié)腫脹的變化，進(jìn)行組間差異性比較。

2.4 高尿酸血癥模型的建立 參照文獻(xiàn)[7,8]并略作改進(jìn)，選用氧嗪酸鉀(0.3 g·kg-1)和尿酸(0.25 g·kg-1)ip小鼠每天1次，連續(xù)3 d進(jìn)行造模，增加血清尿酸水平，造成小鼠高尿酸血癥模型。

2.5 高尿酸血癥模型分組與給藥 生理鹽水組和高尿酸模型組每天均按20 mL/kg劑量ig生理鹽水,連續(xù)6d,別嘌呤醇組(10 mg/kg)每天ig給藥1次，持續(xù)6 d，茶樹(shù)根高劑量組(34.3 g/kg)、茶樹(shù)根低劑量組(17.15 g/kg)每天ig給藥1次，灌喂6d,從給藥第4天開(kāi)始，除生理鹽水組外，其他各組每天ig給藥前1h 均要ip氧嗪酸鉀和尿酸，氧嗪酸鉀和尿酸的劑量分別為0.3g/kg和0.25g/kg，每天1次，連續(xù)3天進(jìn)行造模。在第5天ig給藥后將小鼠放置代謝籠內(nèi)，每5只一籠，只給自由飲水，不給飼料，收集尿液5h, 新鮮尿樣以3 000 r/min離心15 min ，取上清液進(jìn)行尿液尿酸測(cè)定。在最后一次ig給藥1h后從小鼠股動(dòng)脈進(jìn)行采血，血樣分別置于1.5mL 離心管中，在4℃下凝固2h,在3 000 r/min離心5 min。每份血樣血清取200μL用于血清尿酸的測(cè)定與XOD活力的測(cè)定。

2.6 生化指標(biāo)檢測(cè) 分別測(cè)定小鼠血尿酸、尿尿酸水平和血黃嘌呤氧化酶活性。采用磷鎢酸法分別檢測(cè)各組小鼠尿酸，酶比色法檢測(cè)黃嘌呤氧化酶。具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

表1 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的影響±s，n=10)

表2 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響±s，n=10)

表3 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)高尿酸血癥小鼠血清XOD活力水平的影響±s，n=10)

3 結(jié)果

3 .1 茶樹(shù)根對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠的影響 小鼠右足墊部注射微晶尿酸鈉后，模型組與生理鹽水對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.01),說(shuō)明尿酸鹽誘導(dǎo)的小鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型成功。茶樹(shù)根水煎劑高低劑量組在不同時(shí)間點(diǎn)(3、5 h)對(duì)尿酸鹽誘導(dǎo)的小鼠足腫脹均有顯著抑制作用(P<0.01)，且劑量與抑制腫脹呈良好的量效關(guān)系(P<0.05)，說(shuō)明茶樹(shù)根對(duì)小鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有顯著拮抗作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)高尿酸血癥模型小鼠血尿酸的影響 與生理鹽水組比較，模型組中血清尿酸顯著升高(P<0.01)，說(shuō)明造模成功，與模型組比較，茶樹(shù)根高低劑量組均能顯著降低血清尿酸水平[P<0.01(高劑量)，P<0.05(低劑量)]。茶樹(shù)根高低劑量組之間有顯著差異(P<0.05)。而別嘌呤醇組極顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(P<0.001)，能降至正常值以下。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)高尿酸血癥小鼠尿液尿酸水平的影響 與生理鹽水組比較，模型組中尿尿酸顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，茶樹(shù)根高低劑量組均能顯著增加尿尿酸水平[P<0.01(高劑量)，P<0.05(低劑量)]。茶樹(shù)根高低劑量組之間有顯著差異(P<0.05)，別嘌呤醇組幾乎不能增加高尿酸血癥小鼠尿尿酸水平。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.4 茶樹(shù)根水煎劑對(duì)高尿酸血癥小鼠血清XOD活力水平的影響 與生理鹽水組比較，模型組中血清XOD活性顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，茶樹(shù)根高低劑量組均能顯著增加尿尿酸水平[P<0.01(高劑量)，P<0.05(低劑量)]。茶樹(shù)根高低劑量組之間有顯著差異(P<0.05)，別嘌呤醇組可極顯著降低高尿酸血癥小鼠血清XOD活性水平(P<0.001)，能降至正常值以下。結(jié)果見(jiàn)表3。

4 討論

痛風(fēng)是一種代謝性疾病，難以根治，其反復(fù)發(fā)作可產(chǎn)生痛風(fēng)石(尿酸鹽)沉積，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和腎結(jié)石，有較大的危害性。目前西藥治療痛風(fēng)有效，但長(zhǎng)期服用，毒副作用大，而使其臨床應(yīng)用受到較大限制。而茶樹(shù)根源自食物茶的根，一種中草藥，毒副作用小，安全指數(shù)高，江西民間常用它來(lái)治療痛風(fēng)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：茶樹(shù)根水煎劑對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎小鼠有明顯的抑制作用;對(duì)高尿酸血癥模型小鼠的血尿酸和血黃嘌呤氧化酶的活性都有明顯的降低作用，能促進(jìn)高尿酸血癥模型小鼠的尿尿酸的排泄。上述研究結(jié)果為茶樹(shù)根臨床治療痛風(fēng)提供了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù) 。

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