不同產(chǎn)地枳實(shí)藥材柚皮苷含量分析

★ 李兵 譚梅英 朱俊鋒 詹利之

(1.佛山市中醫(yī)院三水醫(yī)院藥劑科 廣東 佛山 528100；2.廣東省第二中醫(yī)院藥學(xué)部 廣東 廣州 510095；3.佛山市三水區(qū)西南街道社區(qū)衛(wèi)生中心 廣東 佛山 528133；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)青蒿研究中心 廣東 廣州 510445)

枳實(shí)[1]為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。5～6月收集自落的果實(shí)，除去雜質(zhì)，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥，較小者直接曬干或低溫干燥。枳實(shí)具有破氣消積，化痰散痞的功效，用于治療積滯內(nèi)停，痞滿脹痛，瀉痢后重，大便不通，痰滯氣阻，胸痹，結(jié)胸，臟器下垂等癥。柚皮苷是枳實(shí)的主要有效成分之一[2]。而《中國藥典》2010年版枳實(shí)項(xiàng)下只規(guī)定了辛弗林的含量。本文在現(xiàn)行版《中國藥典》的基礎(chǔ)上，對不同產(chǎn)地枳實(shí)中柚皮苷的含量進(jìn)行測定，完善了現(xiàn)行版《中國藥典》枳實(shí)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其質(zhì)量評價提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫1200型高效液相色譜儀(美國)，四元梯度泵，配有DAD檢測器；雙杰JJ-BC系列電子分析天平(美國)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海)。

1.2 試藥 枳實(shí)藥材來自江西清江、新干，重慶江津，四川瀘州，湖南沅江，貴州晴隆，福建閩清、漳州，浙江磐安，廣東新會共10個產(chǎn)地，經(jīng)鑒定為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果；柚皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究，批號：110722-201111)；乙腈為色譜純，水為高純水。

2 方法與結(jié)果[3,4]

2.1 柚皮苷含量測定色譜條件 所使用的色譜柱為安捷倫公司出品的Agilent Zobax Eclipse XDB C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm) ；柱溫25℃；流動相：乙腈-0.3%磷酸(20:80) (V/V)；流速1.0 mL/min；檢測波長：283nm。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取于中國食品藥品檢定研究院購買的柚皮苷對照品(批號：110722-201111)12.03mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4812mg的柚皮苷對照品溶液，在10℃以下保存，備用。

2.3 供試品溶液的制備 稱取不同產(chǎn)地枳實(shí)藥材粗粉約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定其重量，加熱回流1.5 h，取出，放冷，再稱定其重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述柚皮苷對照品溶液(0.4812 mg/mL) 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述一系列柚皮苷對照品溶液各10μL，注入安捷倫高效液相液相色譜儀中，依法測定。得到線性回歸方程Y=1.5817X+6.7613(r=0.99993)，其中自變量(X)為進(jìn)樣量(μg)，因變量(Y)為峰面積。結(jié)果表明，柚皮苷進(jìn)樣量在481.20～2887.20 ng 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(S1，江西清江)，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，同法測定，計(jì)算柚皮苷峰面積的RSD=0.13%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品(S1，江西清江)，按照上述方法制備供試品溶液，分別于0、1、3、6、10、18、24 小時各進(jìn)樣10μL。計(jì)算柚皮苷峰面積RSD=1.32%，表明供試品溶液在 24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批次枳實(shí)樣品(S1，江西清江)6份，按照上述方法制備供試品溶液，同法測定。計(jì)算其平均含量為10.79%，RSD=1.37%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品(S1，江西清江)共9份，每份約0.05g，精密加入一定量的柚皮苷對照品，依上法制成供試品溶液，同法測定含量，計(jì)算平均回收率為98.16%，RSD為1.82%，表明該含量測定方法可行。

2.9 樣品含量測定 取不同產(chǎn)地的枳實(shí)樣品，按照上述方法制備供試品溶液，同法測定，計(jì)算樣品中柚皮苷的含量，結(jié)果見表1，圖1。

表1 不同產(chǎn)地枳實(shí)樣品中柚皮苷含量測定結(jié)果

圖1 枳實(shí)供試品、柚皮苷對照品高效液相色譜圖

3 討論

本文分別對提取方法(超聲提取、回流提取)和提取時間(30、60、90、120min)進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，加熱回流提取選擇1.5 h，枳實(shí)中柚皮苷基本能夠提取完全。此外，分別考察了不同的色譜柱和流動相，最終以Agilent Zobax Eclipse XDB C18為色譜柱，選擇乙腈-0.3%磷酸(20∶80) (V/V) 為流動相，此時柚皮苷峰形良好且達(dá)到較好的分離效果。

從柚皮苷含量測定結(jié)果可見，不同產(chǎn)地枳實(shí)樣品中柚皮苷含量存在較大的差異。

其中，四川瀘州所產(chǎn)的枳實(shí)柚皮苷含量最高，達(dá)到13.25%；其次為重慶江津、江西新干和清江產(chǎn)地的枳實(shí)，柚皮苷含量分別為12.03%、11.51%和10.79%。柚皮苷含量最低為福建漳州所產(chǎn)枳實(shí)(3.82%)，與福建閩清產(chǎn)地枳實(shí)柚皮苷含量(9.63%)形成鮮明對比；兩者從性狀上看，本次實(shí)驗(yàn)所采集的福建閩清枳實(shí)個頭較大。上述結(jié)果表明，枳實(shí)中柚皮苷的含量與藥材產(chǎn)地有關(guān)。現(xiàn)行版《中國藥典》只規(guī)定了枳實(shí)中辛弗林的含量，本文所建立的含量測定方法，可以提高了枳實(shí)的質(zhì)量控制水平。

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：230-231.

[2]衛(wèi)生部藥政管理局，中國藥品生物檢定所. 現(xiàn)代實(shí)用本草(中冊)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：182-185.

[3]梁遠(yuǎn)園，馮彪，祝晨蔯，等. HPLC法測定枳實(shí)藥材中橙皮苷與柚皮苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2006，17(9)：359-361.

[4]謝貞建，焦士蓉，李愷，等. RP-HPLC法測定不同產(chǎn)地枳實(shí)中的柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷[J].西華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2009，28(2)：65-67.