四制香附對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響及作用機制研究*

★ 郭慧玲 許茜茜 胡志方 胡律江 趙曉娟 閆柏屹

(1.江西中醫(yī)藥大學 江西 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥高等專科學校 江西 撫州 344000)

香附，為莎草科植物莎草(CyperusrotundusL.)的干燥根莖。其主要含有揮發(fā)油類成分。此外，還有糖類、生物堿等。有行氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛之功效。用于肝郁氣滯，胸脅脹痛，疝氣疼痛，乳房脹痛，脾胃氣滯，脘腹痞悶、脹滿疼痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)[1]。研究結(jié)果表明，從香附石油醚部位分離得到的α-香附酮是香附調(diào)經(jīng)解痛的主要有效成分，且鎮(zhèn)痛效果與劑量呈正相關(guān)[2]。本課題組前期研究已探明建昌幫四制香附中α-香附酮成分含量優(yōu)于醋蒸法、醋炒法[3]。本文通過對四制香附作用縮宮素誘導大鼠離體子宮痙攣性收縮的影響考察，探討香附四制炮制前后對未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮作用異同，可為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 試藥 己烯雌酚片：合肥久聯(lián)制藥有限公司，批號20100920；縮宮素(SGS)：河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號1105301；95%乙醇：天津市大茂化學試劑廠，批號20110122；石油醚(60～90℃)：天津市恒興化學試劑制造有限公司，批號20110427；乙酸乙酯：國藥集團化學試劑有限公司，批號T20110913；吐溫-80為藥用級；水為超純水。吲哚美辛(阿拉丁，批號13931)；硝苯地平(中國食品藥品檢定研究院，批號100338-201103)。

1.2 實驗儀器 powerlab生物信號采集系統(tǒng)(ADIntruments公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司，型號：HH-2)；麥氏浴槽。

1.3 實驗動物 昆明種清潔級大鼠，雌性，體重(200±20g)，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。許可證號：SCXK(湘)2011-0003。

2 實驗方法

2.1 供試品制備 生香附、四制香附供試品制備：取生香附、四制香附[3]粗粉各2g，加入8倍量95%乙醇，加熱回流提取3次，每次2h，回收溶劑得浸膏，浸膏用3%吐溫-80定容至2mL，即得生香附、四制香附供試品，備用。

四制香附石油醚部位供試品制備：取四制香附2g，加入8倍量95%乙醇，加熱回流提取3次，每次2h，合并醇液，回收溶劑得浸膏，加水混懸，用石油醚(60～90℃)萃取，即得石油醚部位浸膏。浸膏用3%吐溫-80定容至2mL，得四制香附石油醚部位供試品，備用。

2.2 離體子宮標本的制備 取SD未孕雌性大鼠，于實驗前連續(xù)7d灌胃己烯雌酚0.2mg/100g，以同步化子宮并增加子宮的敏感性，人工造成大鼠的動情期。用頸椎脫臼法將大鼠處死,剪開腹腔，游離卵巢，取出子宮置于充有混合氣體(95%O2和5%CO2)的Loke'S液(NaCl 9.2g，KCl 0.42g，CaCl20.24g，NaHCO30.15g，Glucose 1.0g，溶于1000mL超純水)中清洗，從子宮頸端剪開，將子宮頸端固定于浴槽內(nèi)固定器底部小鉤上，卵巢端連接在張力換能器上。置于含10mL Loke'S液的恒溫浴槽中，溫度為37±0.1℃，通入95% O2+5% CO2混合氣體。通過調(diào)節(jié)螺母加2g的負荷，平衡60min，每15min換營養(yǎng)液一次，待子宮收縮穩(wěn)定，自發(fā)節(jié)律恢復后，開始進行實驗。

表1 各供試品對大鼠離體子宮肌張力的實驗結(jié)果

注：*P<0.05。

圖1 各供試品對大鼠離體子宮平滑肌收縮運動抑制率比較

圖2 各供試品對大鼠離體子宮平滑肌的影響

表2 拮抗劑對大鼠離體子宮平滑肌的影響

組別(n=15)劑量(mg)肌肉張力(g)給藥前給藥后平均抑制率(%)對照組-3.1208±0.0282.8055±0.13410.1±0.142生香附組172.7451±0.1692.3304±0.22818.8±0.172*四制香附組173.4205±0.1942.3447±0.09132.1±0.167*石油醚部位組173.4790±0.0232.1598±0.18836.9±0.129*α-香附酮組225μL3.2602±0.0712.5560±0.07121.5±0.285*吲哚美辛組-3.4373±0.3272.6395±0.20823.2±0.275*硝苯地平組-3.3644±0.4483.2095±0.9524.6±0.567吲哚美辛+生香附組173.1919±0.2232.4172±0.09828.2±0.068▲吲哚美辛+四制香附組173.4169±0.1212.0726±0.07644.8±0.004▲吲哚美辛+石油醚部位組173.6127±0.9842.0447±0.49744.3±0.031▲吲哚美辛+α香附酮組225μL2.9790±0.0382.3164±0.59627.5±0.013▲硝苯地平+生香附組173.113±0.03922.687±0.232321.3±0.153*硝苯地平+α-香附酮組173.4231±0.2922.6935±0.42124.1±0.110*硝苯地平+四制香附組173.2427±0.0452.4732±0.98925.4±0.080*硝苯地平+石油醚部位組255μL4.5590±0.2212.8906±0.42838.7±0.136*

注：與對照組比較＊P<0.05，與單用藥物組比較▲P<0.05。

2.3 方法 將大鼠隨機分為13組，每只大鼠取四條平滑肌標本，按2.2制備子宮平滑肌并分別安置在恒溫平滑肌槽中，每個肌槽中分別盛有10mL營養(yǎng)液。每15min更換一次。肌條平穩(wěn)后加入縮宮素(5U/L)觀察記錄10min。對照組：給藥3%吐溫-80，記錄給藥張力。單用藥物組：分別累計加入生香附、四制香附、石油醚部位及α-香附酮使其終濃度分別為1.7g/L、0.0255μL/mL為單用藥物組。受體拮抗劑﹢藥物組：即子宮加入縮宮素，觀察記錄10min后，分別加入吲哚美辛、硝苯地平，5min后再加入四種不同藥物。用powerlab生物信號采集系統(tǒng)記錄子宮平滑肌收縮運動,各組分別觀察和記錄給藥前后10min內(nèi)的子宮平滑肌子宮肌肉張力，每次給藥后沖洗3遍，進行下一次實驗觀察。

統(tǒng)計給藥前及給藥后子宮肌肉張力，計算抑制的百分率，應用SPSS18.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果見表1。

抑制率計算方法：抑制率=(給藥前平均張力-給藥后平均張力)/給藥前平均張力×100%。

圖3 不同拮抗劑對大鼠離體子宮平滑肌的影響

3 結(jié)果

3.1 生香附、四制香附、石油醚部位、α-香附酮對縮宮素引起大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響 見表1、圖1、圖2。

3.2 拮抗劑對抗各供試品對大鼠離體子宮平滑肌的作用 依據(jù)文獻[4-6]，加入拮抗劑考察各供試品對大鼠離體子宮平滑肌的影響，結(jié)果見表2、圖3。

4 討論

本實驗結(jié)果表明，四制香附組及其石油醚部位對大鼠離體子宮平滑肌的抑制率強于α-香附酮組及生香附組，并且與劑量成正相關(guān)。由此，從抑制子宮平滑肌收縮的作用強度可說明，四制香附石油醚部位是抗痛經(jīng)作用的主要有效部位。通過作用機制的初步探討，提示香附及其炮制品抑制子宮平滑肌收縮的平均張力的作用可能與前列腺素的合成與釋放有關(guān)，與L型鈣通道無關(guān)。

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