抵抗素基因rs34861192多態(tài)性與東北漢族 人群2型糖尿病相關(guān)性研究

李勁然，張桂珍，陳 琰,2，叢樂(lè)樂(lè)﹟，宋 旸，楊期巍，于 衫，張 琳，杜珍武*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中心研究室,吉林 長(zhǎng)春130033;2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院 內(nèi)分泌科)

糖尿病是危害老年人健康的重要疾病之一。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)糖尿病的發(fā)病不僅與生活方式有關(guān)，也與遺傳因素密切相關(guān)。一些與糖尿病發(fā)生易感基因以及位點(diǎn)先后被發(fā)現(xiàn)，這些易感基因的發(fā)現(xiàn)有利于進(jìn)一步闡明生活方式與基因共同作用的糖尿病發(fā)生機(jī)制，為糖尿病防治提供理論依據(jù)。

抵抗素作為一種炎性因子來(lái)源于單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)[1]，在小鼠的研究認(rèn)為抵抗素與2型糖尿病(T2DM)發(fā)病過(guò)程中胰島素抵抗有關(guān)。而在人類是否是誘發(fā)胰島素抵抗，導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生還存在爭(zhēng)議。近幾年發(fā)現(xiàn)抵抗素基因存在幾個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)與抵抗素在血清中的含量以及與2型糖尿病有密切的關(guān)系。其中抵抗素基因的rs34861192以及rs1862513兩個(gè)位點(diǎn)被認(rèn)為是與日本人群2型糖尿病發(fā)病密切的兩個(gè)SNP[2-4]。在我國(guó)，抵抗素基因的rs1862513位點(diǎn)與我國(guó)2型糖尿病相關(guān)性研究較多，但是否與我國(guó)的2型糖尿病發(fā)病有相關(guān)性的研究結(jié)果不一致[5-7]；抵抗素基因的rs34861192位點(diǎn)在我國(guó)研究較少，特別是東北地區(qū)的人群。因此本研究擬進(jìn)行抵抗素基因的rs34861192位點(diǎn)與我國(guó)東北地區(qū)糖尿病發(fā)病的相關(guān)性以及臨床表型相關(guān)性進(jìn)行研究，以此闡明該位點(diǎn)是否為糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)基因之一。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

2型糖尿病患者113例均來(lái)自吉林大學(xué)第二醫(yī)院內(nèi)分泌科，在獲取血液樣本的同時(shí)，跟蹤收集這些研究對(duì)象的臨床資料包括年齡、性別、體重指數(shù)、空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)等。正常對(duì)照組107例來(lái)自吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院體檢中心健康體檢者，明確排除糖尿病。

1.2 血細(xì)胞DNA提取

獲取研究對(duì)象外周抗凝靜脈血2 ml，200 g離心10 min，吸取血漿保存。剩余的血細(xì)胞應(yīng)用血液DNA提取試劑盒(北京天恩澤公司，中國(guó))進(jìn)行血細(xì)胞DNA提取。提取的DNA應(yīng)用分光光度計(jì)進(jìn)行DNA含量與質(zhì)量的測(cè)定。提取DNA置于-80℃保存。

1.3 基因分型

應(yīng)用連接酶檢測(cè)反應(yīng)分型方法進(jìn)行113例糖尿病患者與107例健康人的抵抗素基因的rs34861192位點(diǎn)基因分型檢測(cè)。該檢測(cè)委托上海捷瑞生物技術(shù)有限公司完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

抵抗素基因的rs34861192位點(diǎn)在人群中的基因型等位基因頻率以及Hardy-Weinberg equilibrium應(yīng)用Shesis軟件(http://analysis.bio-x.cn/SHEsisMain.htm)進(jìn)行分析；臨床相關(guān)指標(biāo)包括體重指數(shù)、空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)等與抵抗素基因的rs34861192位點(diǎn)的相關(guān)性采用獨(dú)立T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 抵抗素基因rs34861192多態(tài)性與2型糖尿病相關(guān)性

抵抗素基因rs34861192基因型在兩組人群中分布頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。抵抗素基因rs34861192多態(tài)性的基因型頻率在T2DM組和正常對(duì)照組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。等位基因頻率的分布在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.2 抵抗素基因rs34861192多態(tài)性與2型糖尿病患者臨床表型相關(guān)性分析

病例組中GG基因型的患者空腹胰島素含量以及胰島素抵抗指數(shù)均明顯高于GA基因型患者(P值均<0.05)，患者體重指數(shù)、空腹血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和胰島素敏感指數(shù)在病例組中GG基因型與GA基因型的患者之間沒(méi)有差異(P值均>0.05 )結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 rs34861192基因型與2型糖尿病相關(guān)性

表2 rs34861192等位基因與2型糖尿病相關(guān)性

表3 rs34861192多態(tài)性與2型糖尿病患者相關(guān)生化指標(biāo)的關(guān)系

*P< 0.05

3 討論

抵抗素基因多態(tài)性位點(diǎn)與T2DM的關(guān)系國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行廣泛研究，其中抵抗素基因-420多態(tài)位點(diǎn)與+299多態(tài)位點(diǎn)研究較多。抵抗素基因rs34861192位點(diǎn)在國(guó)外人群中有一定突變率，我國(guó)楊冰等對(duì)廣東地區(qū)2型糖尿病患者與抵抗素基因該單核苷酸多態(tài)相關(guān)性進(jìn)行初步研究[8]，而東北地區(qū)人群該基因位點(diǎn)多態(tài)性的相關(guān)研究未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究應(yīng)用連接酶檢測(cè)反應(yīng)分型方法檢測(cè)漢族人群113 例2型糖尿病患者，107例正常對(duì)照者rs34861192(G/A)多態(tài)性。分析該基因位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性，并分析該基因多態(tài)性與糖尿病患者體重指數(shù)、空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果顯示2型糖尿病組和對(duì)照組抵抗素rs34861192位點(diǎn)的基因型分布分別為AA0.9%、AG35.4%、GG63.7%和AA 1.9%、AG35.5%、GG62.6%；等位基因頻率分別為A 18.6%、G 81.4%和A 19.6%、G 80.4%，該位點(diǎn)的基因型分布和等位基因頻率在2型糖尿病組和對(duì)照組間分布均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。病例組中GG基因型的患者空腹胰島素含量以及胰島素抵抗指數(shù)均明顯高于GA基因型患者(P值均<0.05)，患者體重指數(shù)、空腹血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和胰島素敏感指數(shù)在病例組中GG基因型與GA基因型的患者之間沒(méi)有差異(P值均>0.05 )。上述研究結(jié)果表明抵抗素基因rs34861192多態(tài)性與東北漢族人群2型糖尿病無(wú)顯著相關(guān)性，但與臨床胰島素抵抗有關(guān)系。我們研究結(jié)果與楊冰等研究結(jié)論不一致，這種不同結(jié)論可能由于(1)各個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間存在差異，需要進(jìn)一步進(jìn)行meta分析，進(jìn)行數(shù)據(jù)整合，(2)同一民族同一疾病發(fā)生的遺傳背景存在一定地域差異性。

作者簡(jiǎn)介：李勁然(1991-),男，吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部2010級(jí)本科在讀。

參考文獻(xiàn)：

[1]Steppan CM，Bailley ST，Bhats，et al.The hormone resistin links obesity to diabetes[J].Nature，2001，409(6818)：307.

[2]Onuma H,Tabara Y,Kawamura R,et al.A at single nucleotide polymorphism-358 is required for G at -420 to confer the highest plasma resistin in the general Japanese population[J].PLoS One,2010，5(3):e9718.

[3]Osawa H,Tabara Y,Ohashi J,et al.Is rs34861192 or rs1862513 a more promising variant for determining plasma resistin in an aged Japanese population[J]?Diabetologia,2010，53(4):795.

[4]Asano H,Izawa H,Nagata K,et al.Plasma resistin concentration determined by common variants in the resistin gene and associated with metabolic traits in an aged Japanese population[J].Diabetologia,2010，53(2):234.

[5]張 維,畢婭欣.抵抗素基因多態(tài)性與2型糖尿病及肥胖相關(guān)性研究[J].實(shí)用全科醫(yī)學(xué),2007,06:478.

[6]董 艷,李 果,駱天紅,等.抵抗素基因多態(tài)性與華東地區(qū)2型糖尿病的相關(guān)性[J].上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,02:97.

[7]孫亞?wèn)|,馬 彥,楊 樂(lè).抵抗素基因多態(tài)性與中國(guó)東北地區(qū)漢族老年人群2型糖尿病患病的相關(guān)性[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2011,23:4515.

[8]楊 冰,劉忠民.抵抗素基因單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2012，50(21):40.