葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷和治療中的臨床意義

姜國(guó)平,陳 琳,王曉紅,呂英春,李慧穎,付 堃,陳 晶,樊智清,韓 梅*

(1.吉林省人民醫(yī)院 血液風(fēng)濕科,吉林 長(zhǎng)春130021；2.吉林省人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)受累為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫病。RA患者體內(nèi)存在多種自身抗原及相應(yīng)抗體,而葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(GPI)既是一種在糖酵解和糖異生中起重要作用的酶類,又具有多種免疫學(xué)活性,國(guó)內(nèi)外多種文獻(xiàn)報(bào)道GPI是RA的一種自身抗原,可作為診斷RA 的一種新的指標(biāo)[1,2]。本研究旨在檢測(cè)RA患者治療前后血清中GPI含量變化,進(jìn)一步探討GPI與RA疾病活動(dòng)度的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 RA組：選擇自2008年1月至2011年6月在我院門(mén)診和住院的RA患者50例,其中男性19例,女性31例,年齡19-58歲,平均年齡36歲。以上患者均符合2009年ACR與EULAR制定的RA分類(診斷)標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 對(duì)照組 選擇同期我院門(mén)診和住院的其他風(fēng)濕性疾病47例,其中男15例,女32例,年齡20-72歲,平均年齡47歲,包括SLE10例、PM/DM4例、pSS10例、UCTD2例、MCTD4例、BD3例、AS5例、OA7例、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎2例,以上疾病均符合國(guó)際相應(yīng)風(fēng)濕病診斷(分類)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)內(nèi)容

RA組：①0周、2周、4周、8周:檢測(cè)血沉(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、GPI、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、記錄腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、計(jì)算DAS28；②0周、8周:檢測(cè)RF、抗CCP抗體。

非RA組0周、8周:檢測(cè)RF、抗CCP抗體。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 GPI抗原 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)病人血清中的GPI。實(shí)驗(yàn)步驟：病人血清加入樣品液中,檢測(cè)時(shí)加陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和GPI標(biāo)準(zhǔn)品(0、0.16、0.33、1.0、2.0、20.0 μg/ml)各100 μl,37℃1 h,棄樣本后PBS洗板3次,再加入酶標(biāo)記抗GPI抗體,37℃1 h,再次PBS洗板3次,加入OPD顯色液100 μl顯色10mit后,2 mol/L硫酸50 μl終止顯色,酶標(biāo)儀490 nm讀板,參比波長(zhǎng)630 nm。GPI的濃度大于0.25 μg/ml認(rèn)為陽(yáng)性。

1.3.2 抗CCP抗體的測(cè)定 應(yīng)用ELISA法,抗CCP抗體>25 U/ml被認(rèn)為陽(yáng)性。

1.3.3 CRP、C3、C4、RF測(cè)定 用速率散射比濁法測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用Spearman’s rho相關(guān)分析評(píng)價(jià)GPI抗原與抗CCP抗體關(guān)系,用Pearon相關(guān)分析評(píng)價(jià)GPI與ESR、CRP、C3、C4、RF之間的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 抗CCP抗體、RF、GPI在RA組和非RA組陽(yáng)性率如表1,其中抗CCP抗體和RF在兩組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而GPI在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表1 抗CCP抗體、RF、GPI在RA組和非RA組陽(yáng)性分布表

2.2 GPI抗原濃度在RA組和非RA組比較

0周時(shí)血清中GPI濃度RA組為0.38±0.14 μg/ml,非RA組為0.258±0.16 μg/ml,兩組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 0周時(shí)RA組和非RA組GPI濃度比較

2.3 RA組治療后GPI的測(cè)定結(jié)果

在RA組分別檢測(cè)第0、2周、4周、8周血清中的GPI濃度,其結(jié)果如下表2和圖2。

2.4RA組50例患者第0、2周、4周、8周血清中的GPI濃度、血沉、C-反應(yīng)蛋白、DAS28分值如下表3,在第2、4、8周時(shí)血沉、CRP明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),GPI抗原濃度和DAS28第4、8周具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P<0.05)。具體見(jiàn)下表3。

表2 RA組治療前后GPI的測(cè)定結(jié)果

注：2周、4周、8周的GPI分別與0周時(shí)對(duì)比

圖2 RA組治療前后GPI濃度變化

表3 RA組患者治療前后相關(guān)指標(biāo)變化

注：各組2、4、8周數(shù)值與其對(duì)應(yīng)0周相對(duì)比,*表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.05

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種滑膜炎癥性關(guān)節(jié)炎,其發(fā)病與多種自身抗原以及抗體相關(guān)。2001年Schaller等[3]首次報(bào)道GPI與RA相關(guān)。近年來(lái),關(guān)于GPI對(duì)于RA臨床診斷價(jià)值,特別是GPI與抗-CCP抗體相比持有兩種不同的觀點(diǎn),這也可能表明GPI不是RA的特異性抗原[4、5]。

目前抗CCP抗體和RF是診斷RA 的常用指標(biāo)[6,7],在本研究中50例RA中GPI抗原的陽(yáng)性檢出率為68%,抗CCP抗體的陽(yáng)性檢出率為91.28%,RF的陽(yáng)性檢出率82.35%。本研究提示GPI抗原在診斷RA時(shí)陽(yáng)性率低,對(duì)早期RA診斷意義不大。

在我們研究的50例RA患者中,GPI平均血清含量為0.38±0.14 μg/ml,高于疾病對(duì)照組,并且隨著系統(tǒng)DEMARDs藥物的治療,患者血清中GPI含量明顯下降[8]。應(yīng)用相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)血清GPI與RA病情活動(dòng)指標(biāo)關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、ESR 和CRP之間存在正相關(guān),可見(jiàn)GPI與RA病情活動(dòng)相關(guān),而我們發(fā)現(xiàn)GPI與補(bǔ)體C3、C4之間無(wú)相關(guān)性,這與國(guó)內(nèi)報(bào)道不一致,需進(jìn)一步觀察[9]。GPI誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的可能的發(fā)病機(jī)制為：①可溶性GPI抗原與抗GPI抗體形成免疫復(fù)合物,沉淀在滑膜的滑膜動(dòng)脈和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞壁,通過(guò)FC受體介導(dǎo)替代途徑,激活補(bǔ)體,誘導(dǎo)RA關(guān)節(jié)炎。②GPI抗原與抗GPI抗體結(jié)合,通過(guò)滑膜血管內(nèi)皮細(xì)胞受體,直接黏附在內(nèi)皮細(xì)胞表面,介導(dǎo)炎癥細(xì)胞向關(guān)節(jié)局部的遷移。因而GPI血清中甚至是關(guān)節(jié)液中大高濃度與關(guān)節(jié)炎的活動(dòng)相關(guān),隨著關(guān)節(jié)炎的好轉(zhuǎn)GPI的濃度也隨之下降。

綜上,GPI抗原在RA診斷時(shí)陽(yáng)性檢出率有限,單獨(dú)作為RA的診斷性指標(biāo)意義不大,但是RA病情活動(dòng)時(shí)患者血清GPI抗原含量明顯增高,并且隨著治療的好轉(zhuǎn)明顯下降,與DAS28、血沉、RP下降相一致,因而可作為RA疾病活動(dòng)度的判定指標(biāo)。

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