孟魯司特對哮喘患者肺功能及炎癥因子IL-25、IL-33的影響

劉 粉，張才擎

0 引言

支氣管哮端早期的治療仍以抗炎治療為主，盡早吸入糖皮質激素(ICS，Inhaled corticosteroids)治療仍是GINA推薦的哮喘首選治療方案。哮喘早期小劑量吸入糖皮質激素可使后期哮喘急性發(fā)作次數(shù)明顯減少[1]，但對于輕中度哮喘患者單純ICS治療并不能有效控制癥狀。研究發(fā)現(xiàn)，白三烯是引發(fā)哮喘的一種重要炎性介質，炎癥細胞釋放白三烯并與其受體結合導致嗜酸細胞聚集、支氣管黏膜水腫、支氣管痙攣，阻斷白三烯可減少哮喘的急性發(fā)作[2]。孟魯司特是目前臨床上常用的白三烯受體拮抗劑，其在哮喘治療中有重要作用。

白細胞介素25(IL-25)、IL-33是新近發(fā)現(xiàn)的與哮喘炎癥反應密切相關的細胞因子，其水平高低可能與哮喘控制水平密切相關，本研究主要觀察口服白三烯受體拮抗劑孟魯司特對哮喘炎癥因子IL-25、IL-33及肺功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2013年2月就診于我院呼吸內科的初治哮喘患者89例，將其隨機分成2組：觀察組45例，其中男21例，女24例，平均年齡(46.15±9.87)歲，給予吸入糖皮質激素及β受體激動劑+口服白三烯受體拮抗劑孟魯司特；對照組44例，其中男20例，女24例，平均年齡(45.98±9.04)歲，給予吸入糖皮質激素及β受體激動劑+口服安慰劑。所有患者在就診前4周內未使用激素或抗生素，均為輕度至中度哮喘，診斷均符合中華醫(yī)學會呼吸病學分會制定的哮喘診治指南[3]。選取同期就診于我院的健康體檢患者45例為正常對照組，其中男22例，女23例，平均年齡(45.67±8.85)歲，正常對照組患者在過去的4周均無呼吸道感染或者過敏性疾病史。所有受試者入組前均無口服白三烯受體拮抗劑、苯妥英鈉、利福平、酮替芬及其他抗組胺類藥物史，無心、肝、腎等嚴重器質性疾病，所有受試者均簽署知情同意書，并通過醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 試劑 人IL-25 ELISA及人IL-33 ELISA試劑盒(北京科盈美科技有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 哮喘控制評分 所有哮喘患者治療前均根據(jù)哮喘控制測試量表(Asthma control test scale，ACT)計數(shù)ACT評分。ACT是一個含5項內容的哮喘調查問卷，5項內容包括：活動受限、喘息癥狀、急救藥物的使用頻次和患者對哮喘控制的自我評估。以上5項內容分5個等級，用1～5分的評分方法進行評估，最后將總分相加，若得分低于20分為沒有控制，20～24分為良好控制，25分為完全控制。

1.3.2 肺功能檢測 肺功能檢測參照標準指南，應用山東省千佛山醫(yī)院Jaeger肺功能儀(Jaeger Co，Hoechberg，Germany)，使用相同的技術指標，對每次受試者均測定用力肺活量(FVC)，第一秒用力肺活量(FEV1)和一秒率(FEV1/FVC)等肺功能的參數(shù)。

1.3.3 采集外周血 采集受試者清晨空腹外周血4 mL置于促凝劑采血管中，置于冷凍離心機，以2 500 r/min離心15 min，分離上層血清，置于-80 ℃冰箱凍存待檢。

1.3.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清IL-25、IL-33水平 按照IL-25 ELISA試劑盒及IL-33 ELISA試劑盒的步驟檢測IL-25、IL-33在血清中的水平，加入終止液15 min內應用酶標儀(MULTISKAN FC，Thermo，America)在450 nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。根據(jù)標準品的濃度及其對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸曲線上計算出對應的樣品濃度。

1.3.5 治療方法 哮喘對照組予以常規(guī)吸入激素及β受體激動劑，并給予安慰劑，哮喘觀察組在常規(guī)治療的基礎上加用孟魯司特鈉片(默沙東公司)10 mg/d，每晚睡前口服，連用3個月。治療期間哮喘發(fā)作者，可吸入短效β2受體激動劑。治療3個月后哮喘對照組和哮喘觀察組所有患者再次行ACT評分、肺功能檢測，外周血IL-25、IL-33水平測定，方法均同前。

2 結果

2.1 受試者治療前后肺功能水平 所有受試者均進行肺功能檢查，輕中度哮喘患者在兩組哮喘患者中所占比例無明顯差異，在哮喘觀察組輕度哮喘21例(占46.7%)，哮喘對照組輕度哮喘20例(占45.5%)。兩組哮喘患者及正常對照組間性別和年齡比較差異無統(tǒng)計學意義。哮喘觀察組和哮喘對照組患者與正常對照組比較，F(xiàn)EV1%、FVC(%)、FEV1/FVC(%)均有輕度受損，但兩組哮喘患者間上述指標比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。哮喘觀察組2例、哮喘對照組1例因不能堅持用藥而退出實驗，治療3個月后，哮喘觀察組和哮喘對照組患者FEV1%、FVC(%)、FEV1/FVC(%)均有好轉，且哮喘觀察組升高明顯，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 所有受試者治療前后肺功能水平

2.2 哮喘組患者ACT評分治療前后比較 哮喘觀察組與對照組治療前哮喘控制測試(ACT)評分比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，兩組治療前與治療后ACT評分差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但哮喘觀察組治療后ACT水平與哮喘對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 哮喘組患者治療前后ACT評分

2.3 受試者血清IL-25、IL-33水平比較 哮喘觀察組與對照組治療前血清IL-25、IL-33水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，兩組哮喘患者治療前與治療后血清IL-25、IL-33水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且哮喘觀察組治療后血清IL-25、IL-33水平明顯低于哮喘對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 所有受試者血清IL-25、IL-33水平

3 討論

支氣管哮喘是常見的慢性呼吸道疾病之一，近年來在全球范圍內有逐年增加的趨勢。是由多種細胞包括氣道的炎性細胞和結構細胞(如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞、平滑肌細胞、氣道上皮細胞等)和細胞組分(Cellular elements)參與的氣道慢性炎癥性疾病。這種慢性炎癥導致氣道高反應性，通常出現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣流受限，并引起反復發(fā)作性的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀，常在夜間和(或)清晨發(fā)作、加劇，多數(shù)患者可自行緩解或經(jīng)治療后緩解[3]。

哮喘是在氣道高反應性基礎上發(fā)生的一種變態(tài)反應性疾病，其實質是慢性非特異性的氣道炎癥。其中氣道上皮在哮喘發(fā)生發(fā)展中有重要作用，在外界過敏原、損傷因子、污染物等刺激下，損傷的氣道上皮產生各種炎癥因子，主要有細胞因子IL-25、IL-33，后者可刺激固有免疫細胞如自然輔助細胞、nuocytes、MPP細胞增生，固有免疫細胞產生白細胞介素4(IL-4)、白細胞介素13(IL-13)合成增加，進而導致哮喘氣道炎癥[4]。IL-25、IL-33是Th2型細胞因子，在哮喘炎癥反應中發(fā)揮重要作用[5]，IL-25(亦稱IL-17E)是IL-17細胞因子IL-17A-F家族成員之一，其受體是IL-25R(主要是IL-17BR)。IL-25是由活化的記憶T細胞和肥大細胞產生的一種前炎細胞因子，具有多效性，主要參與Th2細胞介導的免疫應答，可誘導多種趨化因子和細胞因子的表達，如通過促進IL-4、IL-5、IL-13的產生而在炎癥過程中發(fā)揮重要作用。在對IL-25中和抗體處理變應原誘導小鼠哮喘模型的試驗中發(fā)現(xiàn)，IL-25的過度表達導致嗜酸性粒細胞增多，Th2細胞因子和血IgE增加[6]。IL-33是新近發(fā)現(xiàn)的一種前炎癥細胞因子，是IL-1家族成員之一，它結合IL-l受體家族成員ST2，活化NF-κB和MAPK信號通路，促進Th2細胞因子的產生，參與哮喘炎癥反應過程[7]。ACT評分簡易實用，可靠有效，方便易行，是評估哮喘是否控制有效的驗證工具，其通過提供具體數(shù)值區(qū)分哮喘的控制程度，與肺通氣功能測定均有良好的相關性，ACT評分值越小，肺功能越差，表示哮喘控制越不理想[8]。

動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠鼻內滴入IL-25或IL-33，可導致哮喘氣道炎癥及氣道高反應性的發(fā)生[9]。氣道上皮來源IL-25與哮喘氣道炎癥密切相關，其主要在哮喘形成的誘導期促進肺上皮細胞和嗜酸性粒細胞的活化，進而導致哮喘氣道炎癥的發(fā)生[10]。在慢性哮喘急性發(fā)作期的哮喘小鼠，IL-33可導致肺泡巨噬細胞的活化和氣道炎癥的發(fā)生，阻斷IL-33后可顯著減輕氣道炎癥和減少肺泡巨噬細胞來源的細胞炎癥因子[11]。Kurowska-Stolarska等[12]研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，哮喘患者氣道粘膜及血漿中IL-33的表達水平明顯增加。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，哮喘患者外周血IL-25、IL-33水平明顯升高。

白三烯(Leukotriene)是花生四烯酸(Arachidonic acid，AA)經(jīng)5-脂加氧酶(5-lipoxygenase，5-LO)途徑代謝的一系列產物，包括白三烯B4和硫肽白三烯兩大類，前者主要引起氣道炎癥，后者是強烈的支氣管平滑肌收縮劑。白三烯是支氣管哮喘發(fā)病過程中重要的炎癥介質，在哮喘的發(fā)病機制中起重要作用。白三烯B4主要通過與半胱氨酰白三烯Ⅰ受體結合，趨化和激活中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和單核細胞，使微血管通透性增強、黏膜水腫、腺體分泌增加而發(fā)揮氣道致炎作用。因此，阻斷白三烯合成或阻斷白三烯受體，從而阻斷支氣管哮喘氣道炎癥反應是治療研究的熱點之一。孟魯司特鈉是新一代的白三烯受體拮抗劑，能阻斷白三烯與受體的結合，阻斷白三烯的致炎作用[13]。已有研究證實，孟魯司特可顯著改善哮喘患者的臨床癥狀[14]。

本研究中，觀察組經(jīng)使用孟魯司特鈉作為輔助性預防和治療哮喘發(fā)作的常規(guī)藥物后，可顯著降低患者外周血中IL-25、IL-33的水平，并使哮喘患者的肺功能及哮喘控制水平得到改善，減少哮喘急性發(fā)作次數(shù)。應用孟魯司特鈉可以抑制哮喘患者的氣道炎癥，緩解氣道痙攣，降低氣道高反應性，有效預防和抑制白三烯所導致的血管通透性增加，減少哮喘急性發(fā)作[15-16]。尤其與吸入糖皮質激素聯(lián)合使用，能快速和持久地改善肺功能，減輕癥狀和哮喘急性發(fā)作，從而減少支氣管擴張劑的使用[17]。有研究發(fā)現(xiàn)，應用孟魯司特作為哮喘輔助治療，可減輕哮喘炎癥反應，并減少吸入激素的用量及減輕咳嗽反應[18-19]。還有一項為期24周的臨床研究發(fā)現(xiàn)，應用白三烯受體拮抗劑口服作為輔助治療，可減輕氣道炎癥反應，并顯著改善哮喘患者的肺功能及哮喘控制水平[20]。這與本研究孟魯司特可降低哮喘患者外周血中炎癥因子IL-25、IL-33并改善哮喘患者的控制水平一致。

綜上所述，IL-25、IL-33作為炎癥因子參與哮喘的發(fā)生與發(fā)展，使哮喘患者肺功能受損，哮喘控制水平差，在哮喘常規(guī)治療的基礎上應用孟魯司特鈉，可顯著降低細胞因子IL-25、IL-33的水平，進而使哮喘患者肺功能及哮喘控制水平得到改善，但具體的作用機制目前尚不明確，這將是我們今后的研究熱點。

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