舌蓮胃康膠囊總黃酮的含量測定

匡菊香，安丹丹

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 藥劑科，貴州 遵義 563099；2. 遵義醫(yī)學(xué)院，貴州 遵義 563099)

慢性萎縮性胃炎(CAG)是一種消化道疾病，轉(zhuǎn)變?yōu)橄到y(tǒng)惡性腫瘤幾率較大，臨床診療表明中醫(yī)藥防治慢性萎縮性胃炎獨(dú)具特色，能有效控制該病向腫瘤轉(zhuǎn)化。舌蓮胃康處方源于本院一名老中醫(yī)臨床上治療慢性萎縮性胃炎的基礎(chǔ)方，在臨床實(shí)踐中廣泛應(yīng)用并取得良好效果。由白花蛇舌草、半枝蓮、白術(shù)、黃芪[1]等藥材組成，該方組方合理、標(biāo)本兼治、能扶正祛邪,增強(qiáng)機(jī)體免疫力。將舌蓮胃康處方研發(fā)為膠囊劑作為醫(yī)院制劑，可達(dá)到質(zhì)量可控，臨床使用方便快捷之目的。舌蓮胃康膠囊由該處方中的藥材經(jīng)提取純化、過濾、濃縮、制備干膏、粉碎、制囊和質(zhì)檢等過程自制而成。該方主藥白花蛇舌草和半枝蓮具有良好的抗腫瘤功效[2-5]，其主要生物活性成分是黃酮類物質(zhì)[6-10]，其中含蘆丁含量豐富，故以蘆丁為考察指標(biāo)，對該膠囊中的總黃酮進(jìn)行含量測定[10-11]，確保舌蓮胃康膠囊劑質(zhì)量的穩(wěn)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU -1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；RE -2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHB - IIIA循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城工貿(mào)有限公司)；FW 80微型高速萬能試樣粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；手工(0號)膠囊填充板(浙江省新昌縣匯普錦機(jī)械設(shè)備廠)；KQ -500DE 數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHA -9123A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；Sartorius BS 224S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；1200 UV/VIS 紫外檢測器；DZKW -4型電子恒溫水浴鍋(上?？莆鲈囼?yàn)儀器廠)；80-2B 臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 試藥 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院,批號：100081-200907)；糊精(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；中藥材購自重慶慧遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司；其余試劑均為分析純。

2 舌蓮胃康膠囊的制備

2.1 舌蓮胃康膠囊處方 白花蛇舌草150g，半枝蓮150g，黃芪 100g和白術(shù)75g等組成。

2.2 舌蓮胃康藥材的提取 舌蓮胃康處方中各藥物的有效成分具有良好的水溶性，因此選擇水作為提取劑。每次加藥材6倍量的水即5 700 mL，煎煮3次，每次1小時，濾去藥渣合并煎液[12]。

2.3 藥物溶液的純化、干燥及膠囊的制備 將舌蓮胃康藥物提取液靜置后，進(jìn)行抽濾，濾液經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1∶1(干藥材重量g：濃縮液體積mL)約為950 mL，按最佳純化工藝(6倍65%的乙醇，沉淀24 h)進(jìn)行處理，然后回收乙醇，低溫干燥，最后放入真空干燥箱中，干燥至恒重，稱量并記錄[12]。將得到的干浸膏放入粉碎機(jī)中粉碎成細(xì)粉，將預(yù)先制備好的80目的三七粉混入藥物干膏粉中，加入適量糊精，混勻，過80目篩后，所得藥物粉末用0號手工膠囊板進(jìn)行填充、壓緊，制備成0號膠囊[12-13]。分別用天平稱取20顆膠囊，所得膠囊平均重量為0.58g,RSD=3.8%,說明膠囊重量均勻,裝量差異小。

3 舌蓮胃康膠囊總黃酮的含量測定

3.1 選擇測定波長 以蘆丁作為考察指標(biāo)，測定舌蓮胃康膠囊中總黃酮的含量[14-18]。精密稱取蘆丁對照品25.00 mg置25 mL量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，再加入10% 硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，繼續(xù)靜置6 min，加1 mol·L-1氫氧化鈉溶液10 mL，搖勻，靜置15 min 顯色[14-15]，定容至25 mL；用 60%乙醇溶液進(jìn)行相同處理后作為空白溶液，在400～700 nm下掃描光譜圖(見圖1)，測得對照品最大吸收峰為506 nm，樣品按照蘆丁對照品配制的方法進(jìn)行相同處理，在該波長處檢測也有明顯的吸收峰出現(xiàn)，且無干擾，故選擇測定波長為506 nm[15-16]。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品波譜掃描圖

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25.00 mg，加60%乙醇超聲溶解30 min，并該濃度的乙醇定容成25 mL，即得1 mg·mL-1的蘆丁對照品溶液，備用。

3.3 供試品溶液的制備 取舌連胃康膠囊，去膠囊殼，精密稱取藥物粉末0.2 g，加60%乙醇25 mL后搖勻，超聲提取30 min后用離心機(jī)離心10 min，取上清液用微孔濾膜過濾，收集濾液，即得供試品溶液[15-17]。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL分別裝入6個25 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液定容到10 mL,按“3.1”項(xiàng)顯色反應(yīng)后，以顯色后的60%乙醇溶液作空白，在506 nm處測定波長，并以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程Y=0.0107X+ 0.0079(r=0.9984)(見圖2)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在20～120 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

表1蘆丁對照品溶液的濃度、吸光度值(n=6)

編號濃度(μg·mL-1)吸光度(A)123456204060801001200.2230.4520.6230.8951.0591.309

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液2.5mL定容于25 mL容量瓶中，顯色反應(yīng)后，連續(xù)測定6 次，記錄吸光度，并計算RSD=0.66%(n=6) (見表2)，表明儀器精密度較好。

表2蘆丁對照品溶液精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

編號吸光度值(A)平均值RSD(%)1234561.0851.0671.0761.0841.0731.0821.0780.66

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按“3.2”項(xiàng)下方法，制備同批次樣品溶液6份,按既定方法處理后，測定并記錄吸光度，計算RSD值(見表3)。

根據(jù)Y=0.0107X+0.0079，計算出該測試樣品溶液濃度X=(0.254-0.0079)/0.0107=22.25 μg.mL-1。即每克粉末中蘆丁的含量為22.25 μg·mL-1×25 mL÷2.5 mL×25 mL÷0.2 g=27 812.5 μg·g-1,即27.813 mg·g-1。

表3樣品重復(fù)性性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

編號吸光度平均值RSD(%)1234560.2560.2580.2570.2530.2540.2470.2541.6

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液1份2.5 mL置于25 mL容量瓶中，顯色反應(yīng)后分別于0、1、2、4、6、8 h，在506 mm波長處測定其吸光度(見表4)。

表4供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

編號時間點(diǎn)(min)吸光度值(A)平均值RSD(%)1234560124680.2580.2600.2530.2490.2510.2470.2532.0

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(110127)含量27.813 mg·g-1供試品6份，按“3.2”項(xiàng)供試品制備方法處理，每份精密加入蘆丁對照品溶液。按“3.3”項(xiàng)方法顯色，在506 nm波長下測定，并記錄吸光度值分別為0.293、0.297、0.288、0.300、0.283和0.294。根據(jù) Y=0.0107 X+0.0079，計算出加標(biāo)樣品溶液濃度，從而計算出蘆丁的實(shí)測值，按 [加標(biāo)回收率=(加標(biāo)準(zhǔn)品樣品的測定值量-樣品理論含量)/標(biāo)準(zhǔn)品加入量×100%]計算回收率，結(jié)果(見表5)，RSD=2.4%，說明此法有較好的回收率。

表5蘆丁加樣回收率測定(n=6)

編號供試品取樣量(g)樣品蘆丁含量(mg)蘆丁對照品加入量(mg)蘆丁實(shí)測值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)1234560.2030.2070.1980.2100.1960.2055.6465.7575.5075.8415.4515.7021.01.02.02.03.03.06.6616.7557.5797.8058.4188.606101.599.8103.698.298.996.899.82.4

3.9 蘆丁含量測定 取3個批次(201311-1、201311-2、201311-3)自制備用的舌蓮胃康膠囊，按3.3項(xiàng)下方法分別配制樣品溶液于雙光束紫外分光光度計上各測定吸光度3次，并計算各樣品的平均吸光度值，再根據(jù)平均吸光度據(jù)算RSD值為3.9%，說明該膠囊的提取純化方法穩(wěn)定、檢測方法可靠。

表6樣品蘆丁含量測定結(jié)果(n=3)

樣品吸光度(A)吸光度平均值RSD(%)201311-10.2630.2670.2650.265201311-20.2480.2430.2460.246201311-30.2470.2500.2530.2503.9

4 討論

將舌蓮胃康處方藥材經(jīng)過提取、純化等工藝處理制成干浸膏細(xì)粉，再加入備用三七粉以及適量糊精，混合均勻，填充灌裝成0號膠囊。經(jīng)測試膠囊裝量均勻、重量差異小，表明制囊工藝穩(wěn)定。

以蘆丁作為對照品，采用紫外分光光度法測定舌蓮胃康膠囊中總黃酮的含量[14-18]，通過紫外波普掃描，精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等方法學(xué)考察，以及對3個批次舌蓮胃康膠囊樣品的含量測定，結(jié)果顯示各批次舌蓮胃康膠囊的總黃酮含量較穩(wěn)定，表明紫外分光光度法測定舌蓮胃康膠囊中總黃酮的含量可行，操作簡單快捷、效率高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

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