仔豬黃白痢滅活疫苗制備及應(yīng)用

胡輝+鄧治邦+蘇五珍+等

摘要：從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗，應(yīng)用于多個(gè)發(fā)病豬場。結(jié)果表明，滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢效果明顯優(yōu)于基因工程苗。

關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；黃白??；自體滅活菌苗；疫苗

中圖分類號(hào)： S858.282.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）06-0169-02

收稿日期：2013-09-22

基金項(xiàng)目：湖南省科學(xué)計(jì)劃（編號(hào)：2011NK3162）；湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：12C1204）。

作者簡介：胡輝（1970—），女，湖南寧遠(yuǎn)人，副教授，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huhui5909@126.com。

通信作者：胡艷，高級(jí)獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的，以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征，是規(guī)?；?、集約化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多（目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種，K抗原有103種，H抗原有60種），不同地區(qū)、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異，存在一定的區(qū)域性，經(jīng)抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此，現(xiàn)有疫苗應(yīng)用效果差異較大，有的豬場免疫效果好，對(duì)仔豬保護(hù)率高，有的豬場免疫效果差，甚至發(fā)生免疫失敗[3]。為了有效預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成黃白痢自體滅活菌苗，應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況，旨在為減少仔豬黃白痢發(fā)病率提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個(gè)有典型黃白痢病史的集約化豬場（編號(hào)A、B）的妊娠母豬進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實(shí)驗(yàn)室研制（病料采自上述2豬場）。 K88、K99 基因工程苗系中國科學(xué)院上海生物工程中心研制，批號(hào)：090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產(chǎn)前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗；工程苗組于母豬產(chǎn)前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份；對(duì)照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預(yù)防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發(fā)病以及藥物治療等情況，7日齡內(nèi)不發(fā)生黃痢、30日齡內(nèi)不發(fā)生白痢表示預(yù)防有效[4]。所有母豬及所產(chǎn)仔豬均按常規(guī)方法進(jìn)行其他疫苗的免疫預(yù)防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經(jīng)過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h后制成菌懸液，經(jīng)過計(jì)數(shù)確保菌液濃度為4×109～5×109 CFU/mL，加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h，其間每隔4～5 h搖振1次，再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞，充分振搖，即為自體滅活苗，檢驗(yàn)后分裝、加蓋、密封、貼簽，4 ℃保存?zhèn)溆肹5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經(jīng)過無菌檢驗(yàn)，要求菌苗無任何雜菌污染，劃線平板培養(yǎng)基無活菌生長。取4～5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只，設(shè)對(duì)照組，觀察 7～8 d，要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭，各肌注菌苗10 mL/頭，觀察7 d，要求無明顯不良反應(yīng)，若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭，各注射菌苗10 mL/頭，觀察有無不良反應(yīng)。將收集自懷化市10個(gè)豬場經(jīng)過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗，免費(fèi)應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察應(yīng)用效果。

2結(jié)果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬，分為3組，分別用基因工程苗、自體滅活苗接種，對(duì)照組不作任何處理，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況。由表1、表2可知，自體滅活苗組仔豬保護(hù)率分別為91%、90%，比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%，對(duì)照組仔豬發(fā)病率分別高達(dá)47%、51%。自體滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知，黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，是預(yù)防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費(fèi)分別應(yīng)用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個(gè)集約化豬場，共計(jì)6 L，免疫母豬達(dá)1 000余頭。對(duì)部分豬場抽樣并測定，免疫接種后，仔豬保護(hù)率均達(dá)90%以上。

3結(jié)論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明，筆者所制菌苗免疫效果比較理想，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢的效果明顯優(yōu)于基因工程苗，這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關(guān)。本試驗(yàn)選用的K88、K99基因工程苗對(duì)B豬場預(yù)防仔豬黃白痢效果差，這可能與長途運(yùn)輸、售發(fā)保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關(guān)[7]。

3.2研制多價(jià)菌苗

任何單一抗原均很難誘導(dǎo)全面有效的免疫保護(hù)作用，成功的仔豬大腸桿菌疫苗應(yīng)該是多價(jià)聯(lián)苗[8]。多價(jià)菌苗雖能很好地預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價(jià)菌苗商品化難度較大，故而在黃白痢多發(fā)豬場應(yīng)用自體菌苗是1種有效的控制方法，同時(shí)也可以降低生產(chǎn)成本。

3.3加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與獸醫(yī)衛(wèi)生

黃白痢免疫效果與飼養(yǎng)管理方式、豬場衛(wèi)生狀況關(guān)系密切，引起仔豬大腸桿菌病的因素很多，對(duì)本病的防治，除了應(yīng)用相應(yīng)的大腸桿菌滅活苗進(jìn)行免疫預(yù)防接種外，還應(yīng)采取加強(qiáng)管理、控制環(huán)境條件、提高飼料品質(zhì)、選擇特效藥物進(jìn)行治療等綜合防制措施[9]。

參考文獻(xiàn)：

[1]蔡寶祥. 家畜傳染病學(xué)[M]. 3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[2]石愛華. 仔豬黃白痢的調(diào)查與防治[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2003，33（1）：28-29.

[3]黎滿香，寧玲忠，董偉. 湖南豬致病性大腸桿菌的分離及藥物敏感性監(jiān)測[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2005，24（1）：6-8.

[4]胡輝. 仔豬大腸桿菌多價(jià)基因工程苗推廣應(yīng)用試驗(yàn)[J]. 湖北畜牧獸醫(yī)，2007（6）：26-27.

[5]馬海利，李永強(qiáng)，王瑞吉，等. 仔豬黃白痢大腸桿菌滅活苗的研制與應(yīng)用[J]. 養(yǎng)豬，1995（3）：38-39.

[6]王多福，魏玉明，馮國延.仔豬大腸桿菌滅活苗的研制及效果觀察[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2005，17（5）：29-30.

[7]熊忠良，周紹鳳，宋如錫，等. 仔豬黃白痢自體滅活菌苗的研制與應(yīng)用效果觀察[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2000，30（6）：4-6.

[8]孫宇，沈玉春. 仔豬大腸桿菌K88-ST1-LTB三價(jià)基因工程滅活疫苗的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)[J]. 中國獸藥雜志，2002，36（9）：35-36.

[9]彥桂軍，丁家波，周明榮. 仔豬大腸桿菌四價(jià)提純苗對(duì)仔豬黃痢的預(yù)防效果[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，20（4）：371，413.李娜，張保平，王文彬，等. 常德地區(qū)雞場致病性大腸桿菌血清型鑒定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（6）：171-172.

摘要：從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗，應(yīng)用于多個(gè)發(fā)病豬場。結(jié)果表明，滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢效果明顯優(yōu)于基因工程苗。

關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；黃白??；自體滅活菌苗；疫苗

中圖分類號(hào)： S858.282.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）06-0169-02

收稿日期：2013-09-22

基金項(xiàng)目：湖南省科學(xué)計(jì)劃（編號(hào)：2011NK3162）；湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：12C1204）。

作者簡介：胡輝（1970—），女，湖南寧遠(yuǎn)人，副教授，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huhui5909@126.com。

通信作者：胡艷，高級(jí)獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的，以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征，是規(guī)?；⒓s化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多（目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種，K抗原有103種，H抗原有60種），不同地區(qū)、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異，存在一定的區(qū)域性，經(jīng)抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此，現(xiàn)有疫苗應(yīng)用效果差異較大，有的豬場免疫效果好，對(duì)仔豬保護(hù)率高，有的豬場免疫效果差，甚至發(fā)生免疫失敗[3]。為了有效預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成黃白痢自體滅活菌苗，應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況，旨在為減少仔豬黃白痢發(fā)病率提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個(gè)有典型黃白痢病史的集約化豬場（編號(hào)A、B）的妊娠母豬進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實(shí)驗(yàn)室研制（病料采自上述2豬場）。 K88、K99 基因工程苗系中國科學(xué)院上海生物工程中心研制，批號(hào)：090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產(chǎn)前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗；工程苗組于母豬產(chǎn)前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份；對(duì)照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預(yù)防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發(fā)病以及藥物治療等情況，7日齡內(nèi)不發(fā)生黃痢、30日齡內(nèi)不發(fā)生白痢表示預(yù)防有效[4]。所有母豬及所產(chǎn)仔豬均按常規(guī)方法進(jìn)行其他疫苗的免疫預(yù)防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經(jīng)過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h后制成菌懸液，經(jīng)過計(jì)數(shù)確保菌液濃度為4×109～5×109 CFU/mL，加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h，其間每隔4～5 h搖振1次，再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞，充分振搖，即為自體滅活苗，檢驗(yàn)后分裝、加蓋、密封、貼簽，4 ℃保存?zhèn)溆肹5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經(jīng)過無菌檢驗(yàn)，要求菌苗無任何雜菌污染，劃線平板培養(yǎng)基無活菌生長。取4～5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只，設(shè)對(duì)照組，觀察 7～8 d，要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭，各肌注菌苗10 mL/頭，觀察7 d，要求無明顯不良反應(yīng)，若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭，各注射菌苗10 mL/頭，觀察有無不良反應(yīng)。將收集自懷化市10個(gè)豬場經(jīng)過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗，免費(fèi)應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察應(yīng)用效果。

2結(jié)果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬，分為3組，分別用基因工程苗、自體滅活苗接種，對(duì)照組不作任何處理，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況。由表1、表2可知，自體滅活苗組仔豬保護(hù)率分別為91%、90%，比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%，對(duì)照組仔豬發(fā)病率分別高達(dá)47%、51%。自體滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知，黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，是預(yù)防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費(fèi)分別應(yīng)用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個(gè)集約化豬場，共計(jì)6 L，免疫母豬達(dá)1 000余頭。對(duì)部分豬場抽樣并測定，免疫接種后，仔豬保護(hù)率均達(dá)90%以上。

3結(jié)論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明，筆者所制菌苗免疫效果比較理想，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢的效果明顯優(yōu)于基因工程苗，這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關(guān)。本試驗(yàn)選用的K88、K99基因工程苗對(duì)B豬場預(yù)防仔豬黃白痢效果差，這可能與長途運(yùn)輸、售發(fā)保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關(guān)[7]。

3.2研制多價(jià)菌苗

任何單一抗原均很難誘導(dǎo)全面有效的免疫保護(hù)作用，成功的仔豬大腸桿菌疫苗應(yīng)該是多價(jià)聯(lián)苗[8]。多價(jià)菌苗雖能很好地預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價(jià)菌苗商品化難度較大，故而在黃白痢多發(fā)豬場應(yīng)用自體菌苗是1種有效的控制方法，同時(shí)也可以降低生產(chǎn)成本。

3.3加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與獸醫(yī)衛(wèi)生

黃白痢免疫效果與飼養(yǎng)管理方式、豬場衛(wèi)生狀況關(guān)系密切，引起仔豬大腸桿菌病的因素很多，對(duì)本病的防治，除了應(yīng)用相應(yīng)的大腸桿菌滅活苗進(jìn)行免疫預(yù)防接種外，還應(yīng)采取加強(qiáng)管理、控制環(huán)境條件、提高飼料品質(zhì)、選擇特效藥物進(jìn)行治療等綜合防制措施[9]。

參考文獻(xiàn)：

[1]蔡寶祥. 家畜傳染病學(xué)[M]. 3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[2]石愛華. 仔豬黃白痢的調(diào)查與防治[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2003，33（1）：28-29.

[3]黎滿香，寧玲忠，董偉. 湖南豬致病性大腸桿菌的分離及藥物敏感性監(jiān)測[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2005，24（1）：6-8.

[4]胡輝. 仔豬大腸桿菌多價(jià)基因工程苗推廣應(yīng)用試驗(yàn)[J]. 湖北畜牧獸醫(yī)，2007（6）：26-27.

[5]馬海利，李永強(qiáng)，王瑞吉，等. 仔豬黃白痢大腸桿菌滅活苗的研制與應(yīng)用[J]. 養(yǎng)豬，1995（3）：38-39.

[6]王多福，魏玉明，馮國延.仔豬大腸桿菌滅活苗的研制及效果觀察[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2005，17（5）：29-30.

[7]熊忠良，周紹鳳，宋如錫，等. 仔豬黃白痢自體滅活菌苗的研制與應(yīng)用效果觀察[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2000，30（6）：4-6.

[8]孫宇，沈玉春. 仔豬大腸桿菌K88-ST1-LTB三價(jià)基因工程滅活疫苗的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)[J]. 中國獸藥雜志，2002，36（9）：35-36.

[9]彥桂軍，丁家波，周明榮. 仔豬大腸桿菌四價(jià)提純苗對(duì)仔豬黃痢的預(yù)防效果[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，20（4）：371，413.李娜，張保平，王文彬，等. 常德地區(qū)雞場致病性大腸桿菌血清型鑒定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（6）：171-172.

摘要：從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗，應(yīng)用于多個(gè)發(fā)病豬場。結(jié)果表明，滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微。仔豬大腸桿菌滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢效果明顯優(yōu)于基因工程苗。

關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；黃白??；自體滅活菌苗；疫苗

中圖分類號(hào)： S858.282.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）06-0169-02

收稿日期：2013-09-22

基金項(xiàng)目：湖南省科學(xué)計(jì)劃（編號(hào)：2011NK3162）；湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：12C1204）。

作者簡介：胡輝（1970—），女，湖南寧遠(yuǎn)人，副教授，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huhui5909@126.com。

通信作者：胡艷，高級(jí)獸醫(yī)師，從事動(dòng)物疫病教學(xué)及技術(shù)推廣工作。E-mail：huyan0128@126.com。仔豬黃白痢是由腸毒素型大腸桿菌引起的，以哺乳仔豬排黃色、白色稀便為主要特征，是規(guī)模化、集約化大型豬場的常見病[1]。由于引起仔豬黃白痢的大腸桿菌血清型繁多（目前已確定的大腸桿菌O抗原有171 種，K抗原有103種，H抗原有60種），不同地區(qū)、不同豬場的致病性大腸桿菌血清型有較大差異，存在一定的區(qū)域性，經(jīng)抗菌藥物治療后患病仔豬血清型還在不斷變化[2]。因此，現(xiàn)有疫苗應(yīng)用效果差異較大，有的豬場免疫效果好，對(duì)仔豬保護(hù)率高，有的豬場免疫效果差，甚至發(fā)生免疫失敗[3]。為了有效預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，筆者從豬場黃白痢仔豬病料中分離出致病性大腸桿菌菌株，研制成黃白痢自體滅活菌苗，應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況，旨在為減少仔豬黃白痢發(fā)病率提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試豬選擇湖南省懷化市2縣2個(gè)有典型黃白痢病史的集約化豬場（編號(hào)A、B）的妊娠母豬進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.2疫苗仔豬黃白痢滅活苗由筆者所在實(shí)驗(yàn)室研制（病料采自上述2豬場）。 K88、K99 基因工程苗系中國科學(xué)院上海生物工程中心研制，批號(hào)：090201027。

1.2方法

滅活苗組于母豬產(chǎn)前30、15 d分別按4 mL/頭劑量各注射1次黃白痢滅活苗；工程苗組于母豬產(chǎn)前第24天至第21天按說明書要求每頭注射基因工程菌苗1頭份；對(duì)照組母豬不接種任何大腸桿菌疫苗。全部母豬不投喂抗菌藥物預(yù)防。仔豬出生后每天觀察并記錄仔豬排糞、發(fā)病以及藥物治療等情況，7日齡內(nèi)不發(fā)生黃痢、30日齡內(nèi)不發(fā)生白痢表示預(yù)防有效[4]。所有母豬及所產(chǎn)仔豬均按常規(guī)方法進(jìn)行其他疫苗的免疫預(yù)防接種。

1.2.1仔豬黃白痢滅活苗的制備將經(jīng)過鑒定的各豬場仔豬黃白痢致病性大腸桿菌菌株分別接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h后制成菌懸液，經(jīng)過計(jì)數(shù)確保菌液濃度為4×109～5×109 CFU/mL，加入0.4%甲醛溶液37 ℃滅活48 h，其間每隔4～5 h搖振1次，再加入菌液體積20%滅菌后的氫氧化鋁膠、0.01%硫柳汞，充分振搖，即為自體滅活苗，檢驗(yàn)后分裝、加蓋、密封、貼簽，4 ℃保存?zhèn)溆肹5]。

1.2.2菌苗安全性檢查每批次滅活苗必須經(jīng)過無菌檢驗(yàn)，要求菌苗無任何雜菌污染，劃線平板培養(yǎng)基無活菌生長。取4～5只小鼠腹腔注射菌苗0.5 mL/只，設(shè)對(duì)照組，觀察 7～8 d，要求小鼠無異常情況。取體重40 kg以上的健康豬4頭，各肌注菌苗10 mL/頭，觀察7 d，要求無明顯不良反應(yīng)，若菌苗符合以上要求則為安全菌苗[6]。選擇妊娠90 d 的母豬2 頭，各注射菌苗10 mL/頭，觀察有無不良反應(yīng)。將收集自懷化市10個(gè)豬場經(jīng)過分離鑒定的致病性大腸桿菌菌株分別配制成滅活苗，免費(fèi)應(yīng)用于各發(fā)病豬場，觀察應(yīng)用效果。

2結(jié)果與分析

2.1自體滅活菌苗與基因工程苗免疫效果

選擇有代表性的2豬場的懷孕母豬，分為3組，分別用基因工程苗、自體滅活苗接種，對(duì)照組不作任何處理，觀察仔豬黃白痢發(fā)病情況。由表1、表2可知，自體滅活苗組仔豬保護(hù)率分別為91%、90%，比K88、K99 基因工程苗組高12%和28%，對(duì)照組仔豬發(fā)病率分別高達(dá)47%、51%。自體滅活苗組仔豬發(fā)病頭數(shù)少、病程短、癥狀輕微易治愈。由此可知，黃白痢自體滅活苗能明顯降低仔豬黃白痢發(fā)病率，是預(yù)防仔豬黃白痢的最佳疫苗。

將上述仔豬黃白痢自體滅活苗免費(fèi)分別應(yīng)用于懷化市芷江侗族自治縣、洪江市、沅陵縣、溆浦縣等地十幾個(gè)集約化豬場，共計(jì)6 L，免疫母豬達(dá)1 000余頭。對(duì)部分豬場抽樣并測定，免疫接種后，仔豬保護(hù)率均達(dá)90%以上。

3結(jié)論與討論

3.1黃白痢自體滅活菌苗效果

本研究表明，筆者所制菌苗免疫效果比較理想，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。利用仔豬大腸桿菌自體滅活菌苗預(yù)防仔豬黃白痢的效果明顯優(yōu)于基因工程苗，這可能與自體苗與豬場大腸桿菌菌型高度一致有關(guān)。本試驗(yàn)選用的K88、K99基因工程苗對(duì)B豬場預(yù)防仔豬黃白痢效果差，這可能與長途運(yùn)輸、售發(fā)保存條件及疫苗與豬場病原菌血清型不符有關(guān)[7]。

3.2研制多價(jià)菌苗

任何單一抗原均很難誘導(dǎo)全面有效的免疫保護(hù)作用，成功的仔豬大腸桿菌疫苗應(yīng)該是多價(jià)聯(lián)苗[8]。多價(jià)菌苗雖能很好地預(yù)防仔豬黃白痢的發(fā)生，但大腸桿菌致病性血清型眾多。將所有的多價(jià)菌苗商品化難度較大，故而在黃白痢多發(fā)豬場應(yīng)用自體菌苗是1種有效的控制方法，同時(shí)也可以降低生產(chǎn)成本。

3.3加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與獸醫(yī)衛(wèi)生

黃白痢免疫效果與飼養(yǎng)管理方式、豬場衛(wèi)生狀況關(guān)系密切，引起仔豬大腸桿菌病的因素很多，對(duì)本病的防治，除了應(yīng)用相應(yīng)的大腸桿菌滅活苗進(jìn)行免疫預(yù)防接種外，還應(yīng)采取加強(qiáng)管理、控制環(huán)境條件、提高飼料品質(zhì)、選擇特效藥物進(jìn)行治療等綜合防制措施[9]。

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