絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠顱骨改變的實(shí)驗(yàn)研究

聶巍++高鶯++焦艷軍

【摘要】目的：為探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥對(duì)顱骨造成的影響，建立去勢(shì)大鼠模型，觀察其顱骨骨密度、骨礦含量以及組織學(xué)改變。方法：取2月齡未交配雌性SD大鼠40只，隨機(jī)分為2組：A組為實(shí)驗(yàn)組20只，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)；B組為對(duì)照組20只，行假手術(shù)。模型建立完成后3個(gè)月處死大鼠，取顱骨，雙能X線檢測(cè)骨密度及骨礦含量，HE染色觀察骨微觀結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：雙側(cè)卵巢摘除術(shù)后3個(gè)月，大鼠顱骨骨密度：實(shí)驗(yàn)組為0.333±0.006g/cm2，對(duì)照組為0.402±0.035g/cm2；骨礦含量：實(shí)驗(yàn)組為：2.185±0.047g，對(duì)照組為：2.553±0.180g，兩組骨密度（BMD）及骨礦含量具有明顯差異（P<0.05）。結(jié)論：雙側(cè)卵巢摘除術(shù)所造成的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥可引起大鼠顱骨骨密度、骨質(zhì)量明顯下降。

【關(guān)鍵詞】絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松；顱骨；骨密度；骨質(zhì)量

The change of skulls from postmenopausal osteoporosis rats

[Abstract]Objective：To explore the effects of osteoporosis on the skull，we established animal model of postmenopausal osteoporosis and observed the changes of skulls in bone mineral density，bone mineral content，and histology.Method：2-month-old female SD rats （n=40） were randomly divided into 2 groups：the experimental group underwent bilateral ovariectomy；the control group underwent sham operation.Three months after the operation，all rats were sacrificed and skulls were harvested.DEXA method was used to detect bone mineral density and bone mineral content，while HE staining was performed to access the trabeculae.Result：Bone mineral density：the experimental group was （0.333±0.006）g/cm2，the control group was （0.402±0.035）g/cm2；bone mineral content：the experimental group was （2.185±0.047）g，the control group was （2.553±0.180）g.The data were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Postmenopausal osteoporosis may result in obvious decrease in the bone mass and bone density of skulls.

[Key words]Postmenopausal osteoporosis；skull；bone mass；bone density

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是一種常見(jiàn)的骨骼系統(tǒng)疾病，主要發(fā)生在絕經(jīng)后中老年婦女，由于雌激素缺乏引起骨量減少、骨組織結(jié)構(gòu)變化、易發(fā)生骨折，可能導(dǎo)致骨骼變形、骨痛，甚至發(fā)生死亡[1]。臨床上，骨質(zhì)疏松癥患者常常表現(xiàn)為脊椎、髖部、前臂、腕骨等部位骨折，相關(guān)研究較為多見(jiàn)，但關(guān)于骨質(zhì)疏松癥患者顱骨改變卻鮮見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)摘除大鼠雙側(cè)卵巢建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，觀察其顱骨骨密度、骨質(zhì)量發(fā)生的相應(yīng)變化，以期為骨質(zhì)疏松癥患者臨床診斷及預(yù)防提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

資料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇SD大鼠（由山西醫(yī)科大學(xué)生理教研室提供）40只，2個(gè)月齡（180～200g），雌性，隨機(jī)分為兩組，每組20只，A組為實(shí)驗(yàn)組，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)；B組為對(duì)照組，行假手術(shù)。

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型建立：使用10%水合氯醛按1mg/kg的劑量行大鼠腹腔內(nèi)注射麻醉，背部消毒，在正中行縱切口，分別切開(kāi)皮膚、皮下、肌層，分別在兩側(cè)行小切口進(jìn)入腹腔，實(shí)驗(yàn)組完整摘除雙側(cè)卵巢；對(duì)照組切除卵巢周圍脂肪組織，分層縫合。所有大鼠飼養(yǎng)條件一致，單籠喂養(yǎng)，喂以標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由攝食。

樣本檢測(cè)：①顱骨骨密度及骨礦含量測(cè)定：模型建立后3個(gè)月后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于4%戊巴比妥鈉按1mg/kg腹腔麻醉，以雙能X線骨密度測(cè)定儀（DEXA）作顱骨骨密度及骨礦含量測(cè)定。②HE染色：每組取顱骨編號(hào)，剔除表面軟組織，4%多聚甲醛固定48小時(shí)、10%EDTA-Na2/0.1MPBS（ph7.40）室溫下脫鈣5周（每2天更換脫鈣液），乙醇梯度脫水，石蠟包埋，5μm組織切片，HE染色，Olympus BH-2型顯微鏡下觀察骨小梁形態(tài)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)兩組各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

骨密度：DXA法檢測(cè)骨密度，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物顯著低于對(duì)照組動(dòng)物，且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

骨礦含量：DXA法檢測(cè)骨礦含量，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物顯著低于對(duì)照組動(dòng)物，且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

HE染色：雙側(cè)卵巢摘除術(shù)后3個(gè)月，可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組（圖A）與對(duì)照組（圖B）相比，骨質(zhì)明顯疏松，雌激素缺乏導(dǎo)致骨小梁密度減低，骨質(zhì)量下降，骨髓腔內(nèi)松質(zhì)骨稀薄，分布不均勻，骨小梁呈斷裂狀態(tài)。

討論

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥又稱為Ⅰ型原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，屬高代謝型骨質(zhì)疏松。本實(shí)驗(yàn)選擇合適月齡的雌性大鼠采用雙側(cè)卵巢摘除術(shù)建立骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，是目前公認(rèn)的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥經(jīng)典病理模型，可以較好的復(fù)制出具有臨床特征的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥[2]。雌激素有抑制破骨細(xì)胞活性、減少骨吸收，促進(jìn)成骨細(xì)胞活性、增加骨形成等作用。絕經(jīng)期后雌激素缺乏，使骨吸收遠(yuǎn)快于骨形成，造成骨量不斷丟失，骨偶聯(lián)過(guò)程失衡，最終導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生[3]。

顱骨是容納和保護(hù)腦組織的器官，骨質(zhì)較厚，一般小的暴力不會(huì)造成非骨質(zhì)疏松患者顱骨骨折，較大的暴力或作用點(diǎn)在顱骨的薄弱區(qū)才會(huì)導(dǎo)致顱骨骨折的發(fā)生，但是骨質(zhì)疏松患者在遇到同樣輕微暴力時(shí)即可出現(xiàn)骨折[4]。此外，非骨質(zhì)疏松患者的顱骨骨折常常在受嚴(yán)重暴力時(shí)才會(huì)合并腦損傷，但在骨質(zhì)疏松患者受外力的情況下，合并腦損傷的幾率會(huì)大大增加。當(dāng)顱骨骨折并發(fā)顱腔內(nèi)容物的損傷時(shí)，所造成的腦及腦血管、顱神經(jīng)等繼發(fā)性損傷較骨折本身嚴(yán)重的多。雖不多見(jiàn)，但造成的并發(fā)癥往往非常嚴(yán)重，需要緊急處理，否則會(huì)致命。因此，在密切關(guān)注脊椎、四肢骨等承重骨的骨質(zhì)疏松預(yù)防及治療的同時(shí)，關(guān)注顱骨等非承重骨的改變也尤為重要，不可忽視。

X線平片是目前最常用的和首選檢查方法，但是只有骨量減少超過(guò)30%以上才會(huì)出現(xiàn)X線的征象[5]。而且，X線片還受到投射條件等多因素的影響，因此X線片對(duì)骨質(zhì)疏松癥患者的早起診斷有一定的限制[6]。本實(shí)驗(yàn)中采用的骨密度檢測(cè)方法采用目前國(guó)際公認(rèn)雙能X線吸收法（DXA），可正確判斷骨密度的量化診斷[7]。骨密度的檢測(cè)是目前診斷骨質(zhì)疏松癥的金標(biāo)準(zhǔn)。只有將BMD和骨質(zhì)疏松癥患者的骨折結(jié)合起來(lái)，其診治評(píng)估才更為準(zhǔn)確、客觀[8]。通過(guò)骨密度檢測(cè)，我們的研究得出結(jié)論：不論是骨密度亦或骨礦含量，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物均顯著低于對(duì)照組動(dòng)物。HE染色結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，絕經(jīng)后大鼠顱骨骨質(zhì)量明顯下降，骨髓腔內(nèi)松質(zhì)骨稀薄且分布不均。

綜上所述，絕經(jīng)引起顱骨骨質(zhì)量、骨密度明顯低于正常組，骨質(zhì)疏松被認(rèn)為是顱骨骨折的危險(xiǎn)因素[9]，探討骨質(zhì)疏松癥患者顱骨骨組織改變，有利于為骨質(zhì)疏松癥患者臨床診斷及預(yù)防提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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