血凝試驗(yàn)的影響因素分析

[摘要] 近年來(lái)，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，各種先進(jìn)的全自動(dòng)血凝分析儀在各級(jí)醫(yī)院普遍應(yīng)用，使血漿凝血試驗(yàn)的檢測(cè)更加趨于規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，不同醫(yī)院之間血凝試驗(yàn)結(jié)果的可比性日益提高，在出血與血栓性疾病的篩查、診斷及抗凝和溶栓治療的藥物監(jiān)測(cè)方面發(fā)揮了重要作用。血漿凝血試驗(yàn)不同于其他檢驗(yàn)項(xiàng)目，影響因素諸多，且具有特殊性，一旦凝血途徑過(guò)程中的某些凝血因子被啟動(dòng)，就會(huì)發(fā)生一系列連鎖反應(yīng)，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)極大偏差，這些影響因素大多集中在檢測(cè)分析前，因此對(duì)于實(shí)驗(yàn)室工作人員和臨床醫(yī)護(hù)人員來(lái)說(shuō)應(yīng)該掌握和了解這些影響因素，才能有效避免其對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

[關(guān)鍵詞] 血凝試驗(yàn)；標(biāo)本；影響因素

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.11[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1674-4721（2014）05（a）-0137-03

The influence factor analysis of hemagglutination test

ZHENG Hong-tu

Department of Laboratory,Central People′s Hospital of Siping City in Jilin Province,Siping 136000,China

[Abstract] Recent years,with the continuous development of laboratory medicine,all kinds of advanced full-automatic blood coagulation analyzer in levels of hospitals of general application,which is made the detection of plasma hemagglutination test more standardization,standardization,with the increasing in results comparable of blood hemagglutination test between different hospitals day by day,which is played an important role in hemorrhagic and thrombotic disease screening,diagnosis and anticoagulant therapy,drug monitoring in thrombolytic therapy.Plasma coagulation experiment of many influence factors and particularity,that is different from other inspection items,a series of chain reaction occurs once some clotting factors in the process of coagulation pathway was started,the reactions lead to a great deviation in test results,and these factors affecting mostly ocured before the analysis,so these factors should be grasped and understanded by the laboratory staff and clinical medical and nursing staff,in order to avoid the interference of these factors on the test results and to ensure the test results accurate and reliable.

[Key words] Hemagglutination test;Specimen;Influence factor

血凝試驗(yàn)是臨床工作中常用的檢測(cè)項(xiàng)目，血凝試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性是指導(dǎo)臨床正確治療的保障。影響血凝試驗(yàn)的因素很多，這要求實(shí)驗(yàn)室工作人員必須了解和掌握與之相關(guān)的因素，從而有效避免其對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，現(xiàn)就主要相關(guān)因素進(jìn)行探討。

1 標(biāo)本采集

正確采集標(biāo)本是獲得準(zhǔn)確檢驗(yàn)結(jié)果的前提，血凝試驗(yàn)的標(biāo)本采集，必須按照規(guī)定的方法，保存凝血因子的全部特性，嚴(yán)格防止凝血因子和血小板在采血過(guò)程中被激活。

1.1 合理采用注射器和試管

采血時(shí)應(yīng)用硅化或塑料注射器，試管用帶蓋的硅化玻璃試管或塑料試管，因?yàn)闊o(wú)蓋會(huì)使血液二氧化碳丟失，pH值增高，使血漿凝血酶原時(shí)間（PT）和活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）延長(zhǎng)。試管不能用普通玻璃試管，普通玻璃能引起內(nèi)源性凝血系統(tǒng)激活，影響最大的是Ⅷ因子的活性，可使其明顯降低。

1.2 正確使用止血帶

止血帶在抽血時(shí)不要扎的太緊，采血時(shí)間不要太長(zhǎng)[1]，如果采血不順利，血流速度緩慢或多次穿刺采血困難，會(huì)激活凝血機(jī)制，使凝血因子活性增高，導(dǎo)致血漿凝固時(shí)間縮短，也可產(chǎn)生微小凝塊，消耗凝血因子，導(dǎo)致血漿凝固時(shí)間延長(zhǎng)。

1.3 采集血液要避開(kāi)輸液側(cè)的肢體

不要在輸液時(shí)采集血液[2]，輸液時(shí)采集血液，血液被輸注的液體大量稀釋，造成凝血因子相對(duì)減少，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的時(shí)間延長(zhǎng)；更不能在靜脈留置針內(nèi)采血，因?yàn)殪o脈留置針內(nèi)含有某種抗凝劑，會(huì)嚴(yán)重影響某項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果的時(shí)間延長(zhǎng)。

1.4 掌握血液注入試管內(nèi)的順序

采血完畢后，血液向試管內(nèi)注入的順序?qū)ρ囼?yàn)結(jié)果有一定的影響[3]。當(dāng)用注射器采血時(shí)，請(qǐng)將后一管血液用于凝血項(xiàng)目的檢查；當(dāng)用一次性采血針采血時(shí)，請(qǐng)將第一管血液用于凝血項(xiàng)目的檢查。原因是當(dāng)用注射器采血時(shí)，采血完畢后向試管內(nèi)注入血液的過(guò)程中，后一管血液是在抽血時(shí)先進(jìn)入注射器的部分；當(dāng)用一次性采血針采血時(shí)，血液直接注入試管，第一管血液是先采出的部分。采血過(guò)程中靜脈穿刺皮膚受損，組織因子會(huì)釋放激活外源性凝血系統(tǒng)，止血帶壓迫時(shí)間長(zhǎng)也會(huì)激活凝血系統(tǒng)，影響試驗(yàn)結(jié)果，這樣做能夠保證先采出的血液用于凝血項(xiàng)目的檢查所受的影響相對(duì)減少。

1.5 防止氣泡產(chǎn)生

血液向試管內(nèi)注入過(guò)程中，沿試管壁緩慢注入，避免產(chǎn)生氣泡，因?yàn)榕菽漠a(chǎn)生會(huì)使某些因子變性，從而影響試驗(yàn)結(jié)果。

1.6 保證正確的抗凝比例

嚴(yán)格按照抗凝劑的比例要求采血量，濃度為109 mmol/L，3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑0.2 ml，采血量1.8 ml，抗凝劑︰血液=1︰9。采血量過(guò)多，抗凝劑相對(duì)減少，引起血液抗凝不充分，血液產(chǎn)生微小的凝集，消耗凝血因子，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果時(shí)間延長(zhǎng)；采血量過(guò)少，抗凝劑相對(duì)增多，過(guò)剩的抗凝劑一方面會(huì)中和試劑中的鈣離子，另一方面也會(huì)稀釋血液，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的時(shí)間延長(zhǎng)。由于抗凝劑是針對(duì)血漿的量抗凝，所以當(dāng)血細(xì)胞比容＞55%或＜20%時(shí)，應(yīng)用下述公式校正抗凝劑的用量[4]，抗凝劑的用量（ml）=0.00185×采血量（ml）×（100－患者血細(xì)胞比容）。

1.7 恰當(dāng)?shù)幕靹蚍绞?/p>

血液注入試管，要立即顛倒混勻，混勻不完全，會(huì)產(chǎn)生微小凝塊，消耗凝血因子，導(dǎo)致錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果；混勻時(shí)避免用力震蕩而破壞凝血蛋白或?qū)е氯苎l(fā)生，以致影響試驗(yàn)結(jié)果。

1.8 試管專用

抽血完畢，血液一定要注入正確的試管，否則會(huì)引起錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于任何試驗(yàn)項(xiàng)目都不允許從其他試管移除血液到另一支試管，不同試驗(yàn)項(xiàng)目用途的試管內(nèi)所含物質(zhì)不同，會(huì)對(duì)另一個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目的結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響，甚至是錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果。

2 標(biāo)本分離

做血凝試驗(yàn)，對(duì)血漿分離的這一環(huán)節(jié)至關(guān)重要，不正確的離心力和離心時(shí)間會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

2.1 正確使用離心機(jī)

血漿分離時(shí)，要求的離心力是1500× g，離心時(shí)間15 min，以獲得乏血小板血漿[5]。不同的離心機(jī)，離心機(jī)的有效半徑不盡相同。測(cè)得離心機(jī)的有效半徑，根據(jù)公式RCF（g）=1.119×105×R×（r/s）2換算出所使用離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，其中RCF代表離心力，r/s代表每秒鐘離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，g代表重力加速度9.8 m/s2，R代表離心的有效半徑（m）。

2.2 獲得乏血小板血漿

乏血小板血漿指血小板的量＜10×109/L，如果樣本的離心速度不夠，時(shí)間不夠，則血漿中血小板的含量較高，會(huì)對(duì)血凝試驗(yàn)產(chǎn)生影響，因?yàn)檠“宓牧字⑴c凝血過(guò)程，血小板含有大量的磷脂，可以中和血漿中的狼瘡抗凝物，導(dǎo)致狼瘡抗凝物陰性。血小板中含有血小板因子（PF4），能中和標(biāo)本中的肝素。20%的因子Ⅴ來(lái)自血小板，可導(dǎo)致因子Ⅴ增高。鑒于上述原因，采取正確的離心速度和離心時(shí)間，對(duì)獲取正確的血凝試驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。

3 標(biāo)本存放

常規(guī)血凝試驗(yàn)在標(biāo)本采集完成后，應(yīng)盡快在最短時(shí)間，最好在1 h內(nèi)完成試驗(yàn)，如不能做到也應(yīng)在2 h內(nèi)檢測(cè)完畢，否則會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成明顯影響，隨著標(biāo)本存放時(shí)間延長(zhǎng)，凝血因子會(huì)不斷降解，不同的凝血試驗(yàn)項(xiàng)目，標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響也不盡相同。PT和凝血酶時(shí)間（TT）檢測(cè)結(jié)果在4 h內(nèi)是穩(wěn)定的，APTT檢測(cè)結(jié)果在1 h內(nèi)是穩(wěn)定的，纖維蛋白原檢測(cè)結(jié)果在2 h內(nèi)是穩(wěn)定的[6]。如果標(biāo)本不能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成，應(yīng)分離血漿，使用塑料試管。密封后快速冷凍，儲(chǔ)存于－20℃或－70℃，冷凍保存的樣本只能復(fù)融1次，要求在37℃水浴輕輕搖動(dòng)，迅速融化。

4 血漿性狀

標(biāo)本分離后血漿的性狀也會(huì)對(duì)血凝試驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生某些影響，如溶血、乳糜血、黃疸等這些性狀要引起檢驗(yàn)人員的注意，標(biāo)本溶血后，紅細(xì)胞內(nèi)容物的釋出、紅細(xì)胞膜表面的磷脂會(huì)對(duì)血凝試驗(yàn)產(chǎn)生影響[7]。含有乳糜顆粒的血漿，對(duì)應(yīng)用免疫比濁法的項(xiàng)目，如D-二聚體產(chǎn)生嚴(yán)重干擾，鑒于標(biāo)本本身的因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，檢驗(yàn)人員要與臨床醫(yī)生進(jìn)行溝通，闡明這些影響因素對(duì)試驗(yàn)的干擾，提示檢驗(yàn)結(jié)果的可靠程度，供臨床醫(yī)生參考，必要時(shí)重新采血進(jìn)行測(cè)定。

5 異常結(jié)果的處理

最常見(jiàn)的是反應(yīng)混合物不凝集或顯示結(jié)果失敗，處理方法首先要排除儀器或標(biāo)本本身的原因，包括標(biāo)本是否合格、是否溶血、是否乳糜血等，與臨床醫(yī)生進(jìn)行溝通，與臨床癥狀是否相符，是否應(yīng)用某些藥物引起。某些藥物本身就具有影響凝血機(jī)制的功能或是有協(xié)同抗凝作用[8]，如水合氯醛、阿司匹林、保泰松、氯貝丁酯、吲哚美辛等可使口服抗凝藥物在血液中濃度明顯增高。有資料表明，大劑量使用青霉素，當(dāng)血漿青霉素濃度達(dá)5000 U/ml時(shí)，PT、APTT明顯延長(zhǎng)，且隨藥物濃度的增加而時(shí)間延長(zhǎng)[9]；頭孢哌酮具有甲硫甲唑環(huán)的側(cè)鏈與前凝血酶原相仿；羧酶可錯(cuò)誤地與抗生素結(jié)合而導(dǎo)致凝血酶原的形成減少，干擾肝臟中維生素K的代謝，導(dǎo)致低凝血酶血癥[10]。肝素、華法林、雙香豆素、低分子右旋糖酐等可抑制凝血酶，從而妨礙纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，阻止血小板的黏附和聚集，使血漿中抗凝物質(zhì)含量增多，影響凝血試驗(yàn)，使凝固時(shí)間延長(zhǎng)，有以上病史或藥物史的患者都有可能影響血凝檢測(cè)結(jié)果。

6 正確使用儀器，精心維護(hù)、保養(yǎng)儀器是獲取準(zhǔn)確檢驗(yàn)結(jié)果的保障

嚴(yán)格按照儀器的操作規(guī)程使用儀器，按照使用說(shuō)明定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)、保養(yǎng)和校準(zhǔn)，使用儀器配套試劑，保證試劑上機(jī)的穩(wěn)定性，更換試劑的批號(hào)要重新定標(biāo)，保持室內(nèi)質(zhì)控的連續(xù)性，均是獲取準(zhǔn)確檢驗(yàn)結(jié)果所必需的。

綜上所述，血凝試驗(yàn)結(jié)果受多因素影響，以上是在進(jìn)行血凝試驗(yàn)過(guò)程中及在參加相關(guān)培訓(xùn)學(xué)習(xí)過(guò)程中，對(duì)影響試驗(yàn)結(jié)果的因素所進(jìn)行的歸納總結(jié)和一些粗淺體會(huì)，對(duì)于從事臨床檢驗(yàn)的工作者來(lái)說(shuō)，應(yīng)引起重視。在日常工作中只有規(guī)避這些影響因素，才能提供準(zhǔn)確可靠的血凝試驗(yàn)結(jié)果，用于臨床疾病的診斷和治療。

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（收稿日期：2014-03-21本文編輯：李亞聰）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）（2011 AA02A111）

[作者簡(jiǎn)介] 鄭宏圖（1970-），男，本科，副主任檢驗(yàn)師，檢驗(yàn)科副主任