番木瓜抗炎活性研究

鄭雪梅，易 蘭

(1. 重慶市合川中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，重慶 401520; 2. 西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶 402460)

木瓜素有“百益果王”之稱，分為薔薇科木瓜屬植物木瓜與熱帶水果番木瓜科木瓜(即番木瓜Carica papaya Linn.)兩種[1-2]。薔薇科木瓜可食用、藥用，花色美麗，可供觀賞[1]。番木瓜是番木瓜科(Caricaceae)植物的果實(shí)，原產(chǎn)東南亞地區(qū)，可食用和藥用，但不供觀賞[2]。番木瓜既可作為食品，在傳統(tǒng)醫(yī)藥中又作為抗菌和避孕藥物使用。番木瓜廣泛種植于世界各地，中國(guó)是主要生產(chǎn)國(guó)之一。伊朗德黑蘭大學(xué)的Mehdipour 等研究發(fā)現(xiàn)，番木瓜果汁具有顯著的抗氧化活性。研究發(fā)現(xiàn)，薔薇科木瓜屬植物所含木瓜總皂苷及白芍總苷對(duì)免疫性關(guān)節(jié)炎大鼠血液的濃、黏、凝、聚狀態(tài)具有不同程度的改善作用[3-6];木瓜總苷具有抗炎作用[7-8]。但目前關(guān)于番木瓜是否具有抗炎活性，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究中擬對(duì)番木瓜的抗炎活性進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 儀器和試藥、動(dòng)物

FA2104A 型電子分析天平(上海精天電子儀器廠);3K15 型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(美國(guó)Sigma 公司);HH-W420 型數(shù)顯恒溫三用水箱(江蘇榮華儀器公司);UV-1800 型分光光度計(jì)(日本HITACHI 公司);超純水儀(美國(guó)Millipore 公司);KQ5200DB 型超聲波清洗器(江蘇昆山超聲儀器有限公司)。二甲苯、NaCl、冰醋酸、無(wú)水乙醇、甲醇、KOH、角叉菜膠均購(gòu)于重慶東方化學(xué)試劑公司;丙二醛(MDA)測(cè)試盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒和一氧化氮(NO)化學(xué)法試劑盒等均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。昆明種小鼠，體重18 ～20 g，SPF級(jí)，購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證編號(hào)為

712099。

2 方法與結(jié)果

2.1 乙醇浸膏提取

取干燥番木瓜片100 g，粉碎，過(guò)40 目篩，用40%乙醇750 mL在50 ℃水浴中回流提取1.5 h，過(guò)濾;藥渣再加入40%乙醇750 mL回流提取1 h，過(guò)濾。合并2 次濾液，70 ℃下濃縮得到乙醇浸膏。

2.2 試驗(yàn)分組及處理[9]

將30 只雄性小鼠隨機(jī)分為番木瓜乙醇浸膏高、低劑量組(A1組、A2組)和生理鹽水組(B 組)等3 組，每組10 只。A1組和A2組小鼠分別按每1 kg 體重灌胃2.0 g 和1.0 g 番木瓜乙醇浸膏，B組小鼠灌胃等容積的生理鹽水。番木瓜浸膏溶于純化水中，每只小鼠灌胃容積均為每10 g 體重0.2 mL，每天灌胃1 次，連續(xù)7 d。

2.3 二甲苯致炎試驗(yàn)[9]

試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方式同2.2 項(xiàng)，第7 天給藥后1 h，以移液槍移取0.15 mL 二甲苯滴加上小鼠右耳，用棉球均勻涂抹小鼠右耳雙側(cè)，15 min 后頸椎脫臼處死動(dòng)物，用直徑8 mm 皮帶沖于左右耳廓相對(duì)應(yīng)部位各打下一耳片，稱重，以左右耳片重之差為腫脹度，計(jì)算各組腫脹度值及耳腫脹抑制率，并與B 組比較。耳腫脹度=右耳重-左耳重，耳腫脹抑制率% = [(B 組耳腫脹度-A 組耳腫脹度)/B 組耳腫脹度] ×100%。結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，以二甲苯涂抹小鼠耳廓兩面后，可引起鼠耳明顯腫脹;灌胃2.0 g/kg 和1.0 g/kg 番木瓜浸膏均可使鼠耳腫脹度顯著降低，與B 組比較，差異均非常顯著(P ＜0.01)，說(shuō)明番木瓜乙醇浸膏具有較好的抑制二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹作用。

表1 番木瓜乙醇浸膏對(duì)小鼠二甲苯致耳腫脹及角叉菜膠致足腫脹的影響(± s，n=10)

表1 番木瓜乙醇浸膏對(duì)小鼠二甲苯致耳腫脹及角叉菜膠致足腫脹的影響(± s，n=10)

注:與B 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。表2 同。

二甲苯致炎試驗(yàn) 角叉菜膠致炎試驗(yàn)組別給藥劑量(g/kg)A1 組A2 組B 組2.0 1.0同體積耳廓腫脹度(mg)2.01±0.45▲3.19±2.82▲6.87±2.52抑制率(%)70.74 53.57-足腫脹度(mg)28.1±12.08▲33.1±9.6△42.6±12.95抑制率(%)34.38 22.30-

2.4 角叉菜膠致炎試驗(yàn)[9]

試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方式見(jiàn)2.2 項(xiàng)，第7 天給藥后1 h，在左后足跖注射1%角叉菜膠50 μL 致炎，于致炎后4 h 于踝關(guān)節(jié)處剪下左右后肢，稱重，以左右后肢重之差作為炎癥腫脹程度。足腫脹度=左后肢量-右后肢量，足腫脹抑制率% =[(B 組足腫脹度-A 組足腫脹度)/B 組足腫脹度] ×100%。將炎足剝皮剪碎，放入2.5 mL 生理鹽水中浸泡40 min，3 000 r/min 離心15 min，上清液即為炎足上清液，于-20℃冰箱保存，備用。結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，角叉菜膠能引起小鼠足爪腫脹反應(yīng)，灌胃高、低劑量番木瓜乙醇浸膏均能抑制角叉菜膠所致小鼠足爪腫脹，差異顯著(P ＜0.05 或P ＜0.01)，高劑量番木瓜乙醇浸膏抗炎效果優(yōu)于低劑量。

2.5 對(duì)炎足上清液中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響

取2.4 項(xiàng)下制備的炎足上清液0.5 mL，加0.5 mol/L KOH甲醇液2 mL，在50 ℃下異構(gòu)化20 min，用甲醇稀釋至4 mL，于278 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(OD)值，以每g 炎性組織相對(duì)應(yīng)的吸光度值表示前列腺素E2(PGE2)的含量[10]。MDA，NO，TNF-α 含量的測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明操作[9]。結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)，番木瓜乙醇浸膏灌胃可抑制角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，高劑量抑制作用顯著(P ＜0.05)，低劑量抑制作用不顯著(P ＞0.05);番木瓜乙醇浸膏灌胃時(shí)高、低劑量對(duì)角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中MDA 均有抑制作用(P ＜0.05)，且灌胃劑量越大，抑制作用越好;番木瓜乙醇浸膏灌胃時(shí)高劑量、低劑量均能導(dǎo)致小鼠炎足上清液中NO 含量升高，高劑量組升高顯著(P ＜0.05)，低劑量組升高不明顯(P ＞0.05)。番木瓜乙醇浸膏灌胃時(shí)高劑量與低劑量均能導(dǎo)致小鼠炎足上清液中TNF -α 含量下降，高劑量組下降顯著(P ＜0.05)，低劑量組下降不顯著(P ＞0.05)。

表2 番木瓜乙醇浸膏對(duì)角叉菜膠致小鼠炎足中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響(± s，n=10)

表2 番木瓜乙醇浸膏對(duì)角叉菜膠致小鼠炎足中炎性因子及氧化損傷因子含量的影響(± s，n=10)

組別PGE2(OD 值)MDA(nmol/mgprot)NO(μmol/L)SOD(U/mL)TNF-α(ng/L)A1 組(2.0 g/kg)0.42 ±0.82△1.42 ±0.85△1.28 ±3.51△112.42 ±6.85 34.02 ±0.95△A2 組(1.0 g/kg)0.59 ±1.65 1.89 ±0.65△1.12 ±0.55 101.98 ±7.55 43.71 ±24.46 B 組0.67 ±0.29 3.07 ±10.29 1.07 ±8.29 103.07 ±8.29 48.83 ±7.27

2.6 對(duì)致炎小鼠血清中SOD 含量的影響[9]

試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方式同2.2 項(xiàng)，用對(duì)角叉菜膠致炎按照2.4 項(xiàng)下方法進(jìn)行。于致炎4 h 后，眼眶靜脈取血，血樣靜置15 min 后，2 500 r/min 離心10 min，取上清液(血清)0.2 mL，按照試劑盒說(shuō)明操作測(cè)定致炎小鼠血清中SOD 含量。結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)，番木瓜乙醇浸膏灌胃高劑量能導(dǎo)致小鼠血清中SOD 含量升高，但作用不顯著(P ＞0.05)，而低劑量則無(wú)此作用。

3 討論

“十病九炎”。炎癥是一種極常見(jiàn)而又十分重要的基本病理過(guò)程，也是人類以防御性為主的一種保護(hù)性反應(yīng)。在炎癥過(guò)程中，由細(xì)胞釋放或體液中產(chǎn)生的PGE2，MDA，NO，TNF-α 和白細(xì)胞介素1α(IL-1α)等炎性因子通過(guò)各種途徑作用于血管，使血管擴(kuò)張、通透性增加，引起滲出，吸引白細(xì)胞到達(dá)炎癥部位，導(dǎo)致組織損傷，引起局部炎癥反應(yīng)和全身反應(yīng)。

抗炎試驗(yàn)多采用化學(xué)致炎劑二甲苯引起某些炎癥，角叉菜膠所致小鼠炎足中，也可能是造成了過(guò)多炎性因子的釋放。番木瓜乙醇浸膏的高、低劑量可有效緩解二甲苯所致耳廓腫脹，以及減輕小鼠炎足腫脹度的作用，說(shuō)明其對(duì)炎癥反應(yīng)早期的急性滲出性腫脹有明顯的抑制作用。PGE2是重要的炎性因子，灌胃高劑量番木瓜乙醇浸膏能降低角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，具有明顯抗炎作用。MDA 是氧自由基攻擊生物膜中不飽和脂肪酸而形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物，可反映出機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化和機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的損傷程度。番木瓜乙醇浸膏灌胃高、低劑量能降低角叉菜膠所致小鼠炎足上清液中MDA 含量，且浸膏灌胃劑量越大，抑制作用越好。NO 作為自由基，可以損傷正常細(xì)胞，在心肌和腦組織缺血-再灌注損傷過(guò)程中起著重要的作用，低濃度的NO 促進(jìn)細(xì)胞凋亡，NO 含量過(guò)低可造成血管過(guò)度擴(kuò)張和滲漏、氣道充血、加重氣道炎癥反應(yīng)和組織損傷[11-13]。高劑量番木瓜灌胃能導(dǎo)致小鼠炎足上清液中NO 的含量升高，說(shuō)明能減少炎癥反應(yīng)。TNF-α 也是炎性反應(yīng)介質(zhì)，番木瓜灌胃高劑量與低劑量均能導(dǎo)致小鼠炎足上清液中TNF-α 含量下降，降低炎性因子水平。SOD 是機(jī)體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡至關(guān)重要，能清除超氧陰離子自由基(O2-)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。SOD 活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，是反映細(xì)胞膜功能和機(jī)體炎性反應(yīng)的主要指標(biāo)[13]。番木瓜乙醇浸膏灌胃高劑量也不顯著升高小鼠血清中SOD 含量，說(shuō)明炎性反應(yīng)中炎性介質(zhì)的種類是多樣的，機(jī)體中不同炎性介質(zhì)對(duì)同一種抗炎物質(zhì)的反應(yīng)還存在一定差異。

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