商洛何首烏提取物的抗氧化活性研究

賈朝

（商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院,陜西商洛726000）

商洛何首烏提取物的抗氧化活性研究

賈朝

（商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院,陜西商洛726000）

為了研究商洛何首烏提取物抗氧化能力。采用DPPH、超氧陰離子、亞硝酸基和總還原能力等方法對(duì)商洛何首烏提取物和二苯乙烯苷進(jìn)行體外抗氧化活性研究。結(jié)果表明：商洛何首烏提取物具有抗氧化活性,并且何首烏提取物抗氧化活性高于二苯乙烯苷的抗氧化活性。

何首烏；二苯乙烯苷；抗氧化活性

何首烏為蓼科多年生草本植物的塊根。又稱首烏、血娃娃、夜交藤根等。味苦、甘、澀、性溫。生何首烏用于瘰疬瘡癰,風(fēng)疹瘙癢,腸燥便秘。制首烏用于血虛萎黃,眩暈耳嗚,須發(fā)早白,腰膝酸軟,肢體麻木,崩漏帶下,久瘧體虛,高血脂,系著名的滋補(bǔ)中藥[1]。何首烏具有抗衰老、增強(qiáng)免疫力、降血酯、抗菌等多方面的藥理作用[2]。何首烏主要含三類有效成分：二苯乙烯苷類化合物、蒽醌類化合物及聚合原花青素,此外還含有卵磷脂、多種微量元素[3]和黃酮類化合物[4]。目前一般以二苯乙烯苷作為何首烏有效成分的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)何首烏抗氧化研究發(fā)現(xiàn),制何首烏多糖和何首烏總苷有抗氧化作用[5]。Yongchen等[6]認(rèn)為抗氧化活性成分為沒(méi)食子酸、兒茶素以及2,3,5,4-四羥基反式二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。二苯乙烯苷是何首烏中特有的水溶性生物活性成分,具有強(qiáng)的抗氧化活性[7]。呂麗爽等[8]從何首烏中分離出單體二苯乙烯苷,對(duì)其清除DPPH自由基的抗氧化機(jī)理進(jìn)行初步探討。商洛何首烏分布廣泛,質(zhì)量上乘,近年來(lái)種植面積不斷擴(kuò)大,本文對(duì)商洛何首烏的提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

何首烏購(gòu)自商洛香菊大藥房（產(chǎn)地：商洛）。

1.2 試劑

2,2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基(DPPH,阿拉丁試劑,純度96%),鄰苯三酚、K3Fe(CN)6、對(duì)氨基苯磺酸、FeSO4、Vc等均為AR試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 何首烏提取物制備

精確稱取何首烏粉末200.00 g,加入80%乙醇900 mL,超聲2 h,取濾液,濾液中再加入900 mL 80%乙醇超聲1 h,合并濾液,濃縮至原體積的1/5,濃縮液用乙醚萃取,分液,萃余相加入3倍體積的乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯層濃縮至原體積的1/5,然后放冷析晶,過(guò)濾得何首烏提取物。

1.3.2 何首烏提取物抗氧化活性測(cè)定

1）超氧陰離子清除能力測(cè)定

采用鄰苯三酚自氧化法[9],分別取4只試管標(biāo)號(hào)1-4,在試管中按表1加入緩沖液和二次蒸餾水,于25℃恒溫20 min后加入25℃預(yù)熱過(guò)的鄰苯三酚(對(duì)照管用0.01 mol·L－1鹽酸代替),迅速搖勻,立即倒入比色杯中,在波長(zhǎng)420 nm處每0.5 min測(cè)定1次吸光度值A(chǔ)0,共測(cè)4 min。計(jì)算對(duì)照溶液吸光度值隨時(shí)間的變化率△A0。樣品測(cè)定：加入0.2 mL樣品液,相應(yīng)減少同體積水,測(cè)定加樣后自氧化速率△A1。清除超氧陰離子能力計(jì)算：

清除率=(△A0－△A1)/△A0×100%。

表1 鄰苯三酚自氧化法加樣表

2)NO2-清除作用測(cè)定

分別取不同濃度的何首烏提取物和Vc（0.0005、0.001、0.01、0.1、0.25 mg·mL－1）溶液1 mL,加入5 mg·mL－1的亞硝酸鈉溶液0.5 mL,再加入0.4%的對(duì)氨基苯磺酸溶液1 mL,混勻,然后加入0.2%的鹽酸萘乙二胺顯色劑0.5 mL,搖勻加水至25 mL,在540 nm處測(cè)定吸光度值為A1,以原亞硝酸的吸光度值為A2,計(jì)算出清除率[10],

清除率＝(A2-A1)/A2。

3)DPPH清除作用測(cè)定

精密稱取樣品0.01 g用蒸餾水稀釋并定容至25mL容量瓶中,得到濃度為0.4 mg·mL－1的溶液,再分別稀釋成不同濃度(0.04、0.02、0.01、0.005、0.0025 mg·mL－1)。分別取不同濃度的樣品溶液各0.5 mL至試管中,加入2.5 mL 0.032 mg·mL－1的DPPH溶液,室溫避光反應(yīng)30 min,在517 nm處以蒸餾水為空白對(duì)照測(cè)定吸光度值為A2,以0.5 mL樣品溶液加入2.5 mL蒸餾水的吸光度值為A1,以0.5 mL蒸餾水加入2.5 mL DPPH溶液的吸光度值為A0。計(jì)算出DPPH的清除率[11]，

清除率＝A0-(A2-A1)。

4)總還原能力測(cè)定

采用普魯士藍(lán)法[12],精密稱取樣品（何首烏提取物、二苯乙烯苷和Vc）0.0125 g定容至25 mL容量瓶中,得到濃度為0.5 mg·mL－1的溶液,再分別稀釋成不同濃度的溶液（0.25、0.1、0.05、0.025、0.01 mg·mL－1）,分別取不同濃度樣品1 mL于試管中,依次加入1 mL,0.2 mol·mL－1pH6.6的磷酸緩沖液1 mL,1%的K3Fe(CN)6溶液,并于50℃水浴保溫20 min,取出加入1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸,混勻,靜置3 min,離心,取2 mL上清液加入3 mL去離子水,在加入0.2 mL 0.1%的三氯化鐵溶液混勻,在700 nm處以去離子水為參比測(cè)得吸光度值,得到曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 超氧陰氧離子清除能力

表2中二苯乙烯苷、何首烏提取物和Vc的濃度為0.5mg·mL－1。由表2可知,何首烏提取物和二苯乙烯苷對(duì)超氧陰氧離子都有清除作用。何首烏提取物的清除率高于二苯乙烯苷的清除率,這可能是因?yàn)樵诤问诪跆崛∥镏泻写簏S素和多糖類物質(zhì)的影響。

表2 超氧陰氧離子的清除率

2.2 NO2-清除作用

從圖1可知，何首烏提取物對(duì)亞硝基具有清除作用。清除率隨著樣品濃度的增加而先升高后降低,何首烏提取物濃度為0.01 mg·mL－1清除作用達(dá)到最大值。何首烏提取物對(duì)亞硝基的清除作用低于Vc。

圖1 亞硝基清除率

2.3 DPPH清除作用

從圖2可知,何首烏提取物和二苯乙烯苷對(duì)DPPH具有清除作用,其清除作用與濃度呈正相關(guān)。樣品半數(shù)抑制濃度IC50分別為：何首烏提取物（0.0029 mg·mL－1）,二苯乙烯苷(0.014 mg·mL－1)。何首烏提取物對(duì)DPPH的清除作用均大于二苯乙烯苷,這可能是因?yàn)樵诤问诪跆崛∥镏泻写簏S素和多糖類物質(zhì)等其它成分的影響。

圖2 何首烏提取物和二苯乙烯苷對(duì)DPPH的清除率

2.4 總還原能力

濃度為0.001-0.5 mg·mL－1,何首烏提取物的總抗氧化能力大于二苯乙烯苷,這可能是因?yàn)樵诤问诪跆崛∥镏泻写簏S素和多糖類物質(zhì)等其它成分的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 何首烏提取物和二苯乙烯苷的總還原能力

3 結(jié)論與討論

本文采用DPPH、超氧陰離子、亞硝酸基和總還原能力等方法對(duì)商洛何首烏提取物和二苯乙烯苷進(jìn)行體外抗氧化活性考察,發(fā)現(xiàn)商洛何首烏提取物和二苯乙烯苷都具有抗氧化活性,不同樣品濃度與抑制率之間均存在一定的量效關(guān)系。同時(shí)表明不同產(chǎn)區(qū)的何首烏由于種質(zhì)、生長(zhǎng)環(huán)境、栽培方式等因素造成其抗氧化活性存在一定的差異，如：商洛何首烏提取物清除DPPH自由基的能力（0.0029 mg·mL-1）大于貴州何首烏的乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基的能力（IC50= 0.00803 mg·mL-1）。其中何首烏提取物抗氧化活性普遍高于二苯乙烯苷的抗氧化活性,證實(shí)了呂麗爽等[13]認(rèn)為,何首烏中的其他組分（葸醌類化合物）對(duì)二苯乙烯苷的抗氧化具有一定的協(xié)同增效作用。自由基與許多病理生理現(xiàn)象都有密切的關(guān)系,從天然產(chǎn)物中尋找有效安全的抗氧化物質(zhì),減少自由基對(duì)人體的傷害顯得尤為重要。何首烏、黃芪和黨參為中國(guó)傳統(tǒng)大宗用藥,在中醫(yī)治療中常用于補(bǔ)氣、調(diào)補(bǔ),具有一定的抗衰老作用,通過(guò)和其它文獻(xiàn)[14]比較發(fā)現(xiàn)何首烏抗氧化清除自由基能力明顯高于黃芪和黨參,因此將進(jìn)一步開(kāi)發(fā)何首烏為天然抗氧化劑提供了理論依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：李堆淑）

Antioxidant Activity of Shangluo Polygonum Multiflorum Thumb

JIA Zhao
(College of Biopharanaceutical and Food Engineering,Shangluo University,Shangluo 726000,Shaanxi)

To evaluate the total antioxidant activity of extracts from Polygonum multiflorum in Shangluo. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radical scavenging,superoxide anion radical scavenging,scavenge nitrite and ferric reducing antioxidant power assay were used to analyze the antioxidant activity.The results showthe crude extracts obtained from Polygonum multiflorum in Shangluo were proved to have antioxidant activity.The crude extracts showed higher total antioxidant activity than that of the stilbene glucoside.

Polygonum multiflorum；stilbene glucoside;antioxidant activity

TS214.2

：A

：1674-0033（2014）04-0015-04

10.13440/j.slxy.1674-0033.2014.04.004

2014-06-21

商洛學(xué)院科研基金項(xiàng)目（13SKY024）；商洛學(xué)院教育教學(xué)改革研究項(xiàng)目（10JYJX02011）

賈 朝，男，陜西鎮(zhèn)安人，碩士，助教