• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    4種含硫化合物對鏈霉菌B221固體發(fā)酵羽毛角蛋白過程的影響

    2014-07-18 03:24:00羅蕾史玉峰崔丹丹姜婻婻王玲王睿勇
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年2期
    關(guān)鍵詞:亞硫酸鹽降解

    羅蕾 史玉峰 崔丹丹 姜婻婻 王玲 王睿勇

    摘要:利用自行分離得到的鏈霉菌B221固體發(fā)酵羽毛角蛋白,設(shè)置硫酸鈉、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和二硫蘇糖醇4種含硫化合物添加組,分析發(fā)酵后7 d的發(fā)酵物中角蛋白酶活力、可溶性蛋白含量以及各種含硫化合物的消長變化規(guī)律。結(jié)果表明添加的4種含硫化合物對角蛋白酶都具有激活作用,但沒有顯著增加發(fā)酵產(chǎn)物中可溶性蛋白的含量;亞硫酸鹽含量、二硫鍵化合物含量和S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)含量之間存在著密切的相關(guān)性,B221固體發(fā)酵角蛋白過程中存在著亞硫酸鹽解作用;硫代硫酸鹽含量、二硫鍵化合物含量、S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)含量、巰基化合物含量之間存在著密切的相關(guān)性,B221固體發(fā)酵角蛋白過程中存在著另一種降解機(jī)制——硫代硫酸鹽解作用。

    關(guān)鍵詞:羽毛角蛋白;降解;含硫化合物;硫解;亞硫酸鹽;硫代硫酸鹽

    中圖分類號(hào): Q935文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2014)02-0310-04

    收稿日期:2013-12-16

    基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金(編號(hào):30571354);江蘇省科技支撐計(jì)劃(編號(hào):BE2008405)。

    作者簡介:羅蕾(1987—),女,湖南邵陽人,碩士研究生,從事應(yīng)用微生物學(xué)研究。Tel:(025) 83592685。

    通信作者:王睿勇。Tel:(025) 83592685;Email:wangry@nju.edu.cn。隨著全球家禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展,在家禽加工處理過程中產(chǎn)生了大量的羽毛廢棄物。據(jù)食品與農(nóng)業(yè)政策研究協(xié)會(huì)(FAPRI)預(yù)測:2019年全世界雞肉產(chǎn)量預(yù)計(jì)達(dá)到7 936萬t,屆時(shí)將產(chǎn)生近600萬t雞毛[1]。這些羽毛中,除了少量用于制備氨基酸、蛋白質(zhì)飼料以及羽絨制品外,絕大部分都被直接丟棄到環(huán)境中,造成了大量的資源浪費(fèi),同時(shí)造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染[2]。

    羽毛的主要成分是β角蛋白,粗蛋白含量可達(dá)80%以上,半胱氨酸和胱氨酸含量更是為天然蛋白質(zhì)飼料之冠。角蛋白化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,不溶于水,也不能被胃蛋白酶、胰蛋白酶等水解[3]。傳統(tǒng)處理羽毛角蛋白的方法是利用物理、化學(xué)水解法,但存在能耗高、環(huán)境污染嚴(yán)重、三廢不易處理、某些必需氨基酸破壞嚴(yán)重、生產(chǎn)的羽毛粉消化率低等問題[4]。因此,利用生物技術(shù)途徑來解決角蛋白的分解利用近年來越來越受關(guān)注。

    1963年,Nickerson等從弗氏鏈霉菌中分離到一種酶復(fù)合物,并在發(fā)酵液中檢測到大量巰基化合物,由此推論角蛋白的降解主要是由菌絲表面附著的角蛋白酶直接斷裂二硫鍵進(jìn)行的,即酶降解途徑[5]。1989年Kunert在真菌石膏樣小孢子菌分解角蛋白的試驗(yàn)中,從發(fā)酵液中檢測到亞硫酸鹽、硫酸鹽、少量巰基化合物和S-磺酸半胱氨酸,結(jié)合相關(guān)試驗(yàn)證據(jù)認(rèn)為該降解過程首先是亞硫酸鹽裂解二硫鍵(即亞硫酸鹽分解),然后亞硫酸分解變性的蛋白質(zhì)進(jìn)一步被溶液中的蛋白酶降解,亞硫酸鹽分解作為微生物降解角蛋白過程中的一種非酶降解機(jī)制首次被提出[6]。Kunert用弗氏鏈霉菌降解角蛋白時(shí),發(fā)酵液中未能檢測到亞硫酸鹽,硫酸鹽含量也很低,巰基化合物卻大量存在,硫代硫酸根為角蛋白中硫的主要轉(zhuǎn)化形式,由此認(rèn)為該菌降解角蛋白是由角蛋白酶直接還原二硫鍵進(jìn)行的[6]。2007年朱曉飛等利用鏈霉菌B221液體發(fā)酵進(jìn)行了羽毛角蛋白降解機(jī)制的初探,結(jié)果表明硫酸鹽是角蛋白降解過程中硫元素的主要轉(zhuǎn)化形式,同時(shí)在發(fā)酵液中還檢測到了亞硫酸鹽,其含量變化與角蛋白酶活、降解率、可溶性蛋白、巰基化合物的變化存在很強(qiáng)的相關(guān)性,表明亞硫酸鹽分解作用在角蛋白降解中可能起到非常關(guān)鍵的作用[7]。2010年聶慶霽等利用地衣芽孢桿菌nju-1411-1液體發(fā)酵羽毛角蛋白,檢測到硫元素以硫酸根、亞硫酸根、硫離子、硫代硫酸根、巰基化合物、二硫鍵化合物、半胱氨酸、胱氨酸以及S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)等9種形態(tài)存在,其中硫酸根、亞硫酸根、硫代硫酸根和S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)是主要形態(tài),亞硫酸根和S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)出現(xiàn)相互消長的關(guān)系,表明亞硫酸鹽分解作用的存在[8]。

    本研究利用筆者所在實(shí)驗(yàn)室自行篩選的鏈霉菌B221,研究角蛋白固體發(fā)酵過程中外源添加不同濃度的硫酸鈉、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和二硫蘇糖醇等四種含硫化合物對鏈霉菌B221角蛋白固體發(fā)酵過程的影響,加深對鏈霉菌B221降解角蛋白機(jī)制的認(rèn)識(shí),旨在為生物技術(shù)方法開發(fā)利用羽毛角蛋白資源奠定基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    1.1供試材料

    鏈霉菌B221,從畜禽場長年堆積羽毛等廢棄物的土壤中經(jīng)過富集培養(yǎng)和分離篩選獲得。

    基礎(chǔ)培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基[9]。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1羽毛角蛋白的固體發(fā)酵在250 mL錐形瓶中裝入34 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入10 g羽毛,121 ℃滅菌20 min。冷卻后,加入1 mL 4種含硫化合物溶液,使發(fā)酵體系中含硫化合物的濃度分別達(dá)到1 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL,接種2 mL孢子懸液,40 ℃下培養(yǎng)。添加的含硫化合物經(jīng) 0.22 μm 濾膜過濾除菌。以不添加含硫化合物的發(fā)酵組作為對照。B221固體發(fā)酵羽毛角蛋白周期一般為7 d,在研究中于發(fā)酵后7 d取樣,進(jìn)行含硫化合物含量和角蛋白酶活、可溶性蛋白含量測定。

    1.2.2含硫化合物的提取及測定取2 g發(fā)酵物,加入 60 mL 去離子水,40 ℃ 150 r/min振搖1 h,中速定性濾紙過濾,用濾液測定各種含硫化合物的含量。硫酸根:鉻酸鋇分光光度法;亞硫酸根:改進(jìn)的鹽酸副玫瑰苯胺法;硫化物:亞甲基藍(lán)分光光度法;巰基化合物:5,5′-二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)光度法;二硫鍵:NTSB顯色法;硫代硫酸鹽:硫酸銅存在下的硫氰酸冷解法;半胱氨酸:酸性茚三酮顯色法;胱氨酸:二硫蘇糖醇裂解后,再采用酸性茚三酮顯色法;S-磺酸半胱氨酸:堿性條件下與氰化鈉反應(yīng)釋放出亞硫酸根離子的間接方法[7,10]。

    1.2.3角蛋白酶活、可溶性蛋白含量測定測定方法參照文獻(xiàn)[11]。

    2結(jié)果與分析

    2.1外源添加含硫化合物對固體發(fā)酵過程中角蛋白酶活和可溶性蛋白的影響

    從圖1可以看出,硫酸鈉添加組和二硫蘇糖醇添加組的角蛋白酶活力比其他2個(gè)添加組的酶活力要高許多。硫酸鈉添加組在添加濃度為10 μmol/mL時(shí)酶活力最高,為 36.11 U/mL,比不添加組的酶活力增加了74.76%;二硫蘇糖醇添加組在添加濃度為1 μmol/mL時(shí)酶活力最高,為 28.39 U/mL,比不添加組的酶活力增加了37.34%;亞硫酸鈉添加組的角蛋白酶活力隨著添加濃度的增大而提高,但變化幅度不大;硫代硫酸鈉添加組的角蛋白酶活力隨著添加濃度的增大而有所下降。

    從圖2可以看出,所有添加組的可溶性蛋白含量均比不添加組降低,其中硫酸鈉添加組和亞硫酸鈉添加組的可溶性蛋白含量隨著添加濃度的增大而減少,在添加濃度為 20 μmol/mL 時(shí),可溶性蛋白含量分別為不添加組的62.57%和65.16%;硫代硫酸鈉添加組的可溶性蛋白含量隨著添加濃度的增大而提高,最高為15.5 mg/mL,為不添加組的9107%;二硫蘇糖醇添加組則隨著添加濃度的增大先降后升,但變化幅度不大。

    2.2外源添加含硫化合物對固體發(fā)酵過程中含硫化合物的影響

    從圖3可以看出,各含硫化合物添加組的亞硫酸鹽含量基本上都比不添加組降低,同一含硫化合物不同添加濃度之間相差不大,這可能是由于到了發(fā)酵后期,基本上已無羽毛成形結(jié)構(gòu),亞硫酸鹽的生成量與消耗量基本持平,維持在一個(gè)穩(wěn)定水平。硫酸鈉添加組在添加濃度為20 μmol/mL時(shí)的亞硫酸鹽含量比其他2個(gè)添加濃度的低很多,為什么會(huì)產(chǎn)生這樣的變化,還需要進(jìn)一步研究。亞硫酸鹽在羽毛角蛋白降解過程中主要起2方面的作用,一方面起亞硫酸鹽解作用,打開二硫鍵,破壞羽毛角蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性;另一方面被微生物的氧化酶氧化成硫酸鹽,為微生物的生長提供快速硫源。

    從圖4可以看出,亞硫酸鈉和硫代硫酸鈉添加組的 S-磺酸半胱氨酸含量隨著添加濃度的增大而增加,都比硫酸鈉和二硫蘇糖醇添加組高很多。亞硫酸鈉添加組最高達(dá)到了0349 μmol/mL,這是由于亞硫酸鹽解作用將二硫鍵裂解成了巰基化合物和S-磺酸半胱氨酸,添加的亞硫酸鈉量越多,通過亞硫酸鹽解作用產(chǎn)生的S-磺酸半胱氨酸也就越多。硫代硫酸鈉添加組S-磺酸半胱氨酸含量最高達(dá)到了 0731 μmol/mL,這可能是由于存在硫代硫酸鹽解作用,使得S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)含量增加,反應(yīng)式為:R—S—S—R+S2O2-3+H+→R—SH+R—S—SO3-+S2-。

    硫酸鈉添加組和二硫蘇糖醇添加組的S-磺酸半胱氨酸含量均比不添加組的低很多,可能是由于二者的添加對角蛋白酶的強(qiáng)烈激活,使得酶解作用成為羽毛角蛋白降解的主要機(jī)制,競爭性地消耗了二硫鍵化合物,因而導(dǎo)致由亞硫酸鹽解作用和硫代硫酸鹽解作用產(chǎn)生的S-磺酸半胱氨酸量減少。

    從圖5可以看出,不添加組的二硫鍵化合物含量為 0518 μmol/mL,4種含硫化合物添加組的二硫鍵化合物含量

    均比不添加組的低。其中亞硫酸鈉添加組的二硫鍵含量最低,且隨著添加濃度的增大而降低,這是由于亞硫酸鈉與二硫鍵發(fā)生亞硫酸鹽解作用,消耗了二硫鍵所致,這也可以從亞硫酸鈉添加組的S-磺酸半胱氨酸含量很高看出。硫代硫酸鈉添加組的二硫鍵含量也隨著添加濃度的增大而降低,推測可能也是由于硫代硫酸鈉與二硫鍵發(fā)生反應(yīng),消耗了二硫鍵所致。

    從圖6可以看出,除了亞硫酸鈉添加組在添加濃度為 10 μmol/mL 和20 μmol/mL時(shí)的巰基化合物含量比不添加高外,其他各添加組的巰基化合物含量均比不添加組低,這可能是由于亞硫酸鈉添加組添加的亞硫酸鈉進(jìn)行了亞硫酸鹽解作用,產(chǎn)生了巰基化合物所致。其他含硫化合物添加組尤其是硫酸鈉添加組和二硫蘇糖醇添加組,由于對角蛋白酶的強(qiáng)烈激活作用,使得巰基化合物的消耗加快,因而導(dǎo)致巰基化合物含量比不添加組的低。

    從圖7可以看出,硫酸鈉添加組和二硫蘇糖醇添加組的半胱氨酸含量均比不添加組低,這可能是由于它們的添加激活了角蛋白酶,導(dǎo)致微生物對半胱氨酸的利用加劇所致。硫代硫酸鈉添加組的半胱氨酸含量仍然隨著添加濃度的增大而增加,最高為0141 μmol/mL,是發(fā)酵后5 d的1.58倍,是不添加組的2.56倍。

    從圖8可以看出,硫酸鈉添加組和亞硫酸鈉添加組的胱氨酸含量隨著添加濃度的增大而先增后降,其中硫酸鈉添加組的胱氨酸含量均比不添加組的低,亞硫酸鈉添加組在添加濃度為1 μmol/mL和10 μmol/mL時(shí)的胱氨酸含量比不添加組高,在添加濃度為10 μmol/mL時(shí)最高。硫代硫酸鈉添加組和二硫蘇糖醇添加組的胱氨酸含量隨著添加濃度的增大而降低。

    從圖9可以看出,除了硫代硫酸鈉添加組3個(gè)添加濃度和亞硫酸鈉添加組在添加濃度為10 μmol/mL和20 μmol/mL時(shí)的硫代硫酸鈉含量比不添加組的高外,其他含硫化合物添加組的硫代硫酸鈉含量均比不添加組低。其中亞硫酸鈉添加組的硫代硫酸鈉含量隨著亞硫酸鈉添加濃度的增大而增加,在添加濃度為20 μmol/mL時(shí)的硫代硫酸鈉含量最高,為 0411 μmol/mL,推測是由于還原性的亞硫酸鈉的存在,降低了硫代硫酸鈉的氧化速率。硫代硫酸鈉添加組的硫代硫酸鈉含量隨著添加濃度的增大而增加,在添加濃度為20 μmol/mL時(shí)的硫代硫酸鈉含量最高,為0491 μmol/mL,推測是由于添加了過量的硫代硫酸鈉,超過了利用限度所致。

    從圖10可以看出,硫酸鈉添加組的硫酸鹽含量隨著添加濃度的增大而增加,在添加1 μmol/mL時(shí),硫酸鹽濃度比不添加組的硫酸鹽濃度低;而在添加10 μmol/10 mL和 20 μmol/10 mL 時(shí),硫酸鹽濃度均比不添加組的硫酸鹽濃度要高。這可能是由于添加較低濃度硫酸鈉時(shí),硫酸鈉被鏈霉菌B211作為無機(jī)硫源而優(yōu)先利用掉,隨著添加濃度的增大,超過了鏈霉菌B221的利用速率,因而殘留的硫酸鹽濃度也逐漸增大。硫酸鹽作為角蛋白中硫元素的最終氧化產(chǎn)物,性質(zhì)比較穩(wěn)定,通常情況下,硫酸鹽的生成速率應(yīng)大于利用速率,在發(fā)酵產(chǎn)物中是逐步積累的。

    3結(jié)論

    到目前為止,已知能分解利用角蛋白的微生物有30余種,但針對含硫化合物添加對羽毛角蛋白降解過程,特別是固體發(fā)酵的影響所進(jìn)行的研究幾乎沒有。本研究以筆者所在實(shí)驗(yàn)室自行篩選到的鏈霉菌B221為材料,系統(tǒng)研究了羽毛角蛋白固體發(fā)酵過程中4種外源含硫化合物的添加對羽毛角蛋白固體降解過程的影響,發(fā)現(xiàn):(1)添加的4種含硫化合物對角蛋白酶都具有激活作用,但沒有顯著增加發(fā)酵產(chǎn)物中可溶性蛋白的含量;(2)亞硫酸鹽含量、二硫鍵化合物含量和 S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)含量之間存在著密切的相關(guān)性,再次證明了在B221固體發(fā)酵角蛋白過程中確實(shí)存在著亞硫酸鹽解作用;(3)硫代硫酸鹽含量、二硫鍵化合物含量、S-磺酸半胱氨酸類物質(zhì)含量、巰基化合物含量之間存在著密切的相關(guān)性,表明在B221固體發(fā)酵角蛋白過程中確實(shí)存在著另一種降解機(jī)制——硫代硫酸鹽解作用。

    參考文獻(xiàn):

    [1]繩賀軍,姜東鳳. 全球肉雞產(chǎn)業(yè)步入十年增長期[J]. 中國畜牧雜志,2010,46(14):62-63.

    [2]Divakala K C,Chiba L I,Kamalakar R B,et al. Amino acid supplementation of hydrolyzed feather meal diets for finisher pigs[J]. Journal of Animal Science,2009,87(4):1270-1281.

    [3]Anbu P,Hilda A. Purification of keratinase from poultry farm isolate Scopulariopsis brevicaulis and statistical optimization of enzyme activity[J]. Enzyme and Microbiological Technology,2005,36:639-647.

    [4]Marshall R C,Orwin D F,Gillespie J M. Structure and biochemistry of mammalian hard keratin[J]. Electron Microscopy Reviews,1991,4(1):47-83.

    [5]Nickerson W J. Keratinase[J]. Biochem Biophys Acta,1963,77:87-99.

    [6]Kunert J. Biochemical mechanisms of keratin degradation by actionmycete Streptomyces fradiae and fungus Microsporium gypseum,a comparison[J]. Journal of Basic Microbiology,1989,27:597-604.

    [7]朱曉飛,張玲,趙平芝,等. 鏈霉菌B221的角蛋白降解機(jī)制初探[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2007,23(6):18-22.

    [8]聶慶霽,史玉峰,王玲,等. 地衣芽孢桿菌nju-1411-1降解羽毛角蛋白過程中含硫化合物的變化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(4):258-261.

    [9]董榮斌,張玲,朱曉飛,等. 耐熱鏈霉菌B221降解羽毛角蛋白的固體發(fā)酵條件研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(6):249-251.

    [10]魏復(fù)盛,國家環(huán)境保護(hù)總局,水和廢水監(jiān)測分析方法委會(huì). 水和廢水監(jiān)測分析方法[M]. 4版.北京:中國環(huán)境科學(xué)出版社,2002.

    [11]朱小飛. 微生物降解角蛋白的機(jī)制研究——含硫化合物的轉(zhuǎn)化及其作用[D].

    猜你喜歡
    亞硫酸鹽降解
    美國制訂測定食品中亞硫酸鹽濃度的新分析方法
    亞硫酸鹽在食品中的研究進(jìn)展
    食品中亞硫酸鹽的檢測
    食品界(2019年2期)2019-03-10 19:35:00
    亞硝酸鹽降解進(jìn)展研究
    土壤中多菌靈污染及修復(fù)技術(shù)研究現(xiàn)狀
    紅外光譜結(jié)合元素分析法研究SRB對煤的降解
    污水處理生物技術(shù)探討
    四環(huán)素類抗生素的環(huán)境行為研究進(jìn)展
    科技視界(2016年11期)2016-05-23 08:07:47
    食品中亞硫酸鹽的使用及檢測
    微生物對垃圾滲濾液中胡敏酸降解和形成的影響
    科技視界(2016年7期)2016-04-01 09:39:11
    亚洲国产欧美网| 夫妻午夜视频| 边亲边吃奶的免费视频| 久久久国产精品麻豆| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲,欧美,日韩| 在线精品无人区一区二区三| www.av在线官网国产| 午夜福利在线免费观看网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜影院在线不卡| 成年动漫av网址| 亚洲精品一二三| 国产一区二区激情短视频 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 永久免费av网站大全| 69精品国产乱码久久久| 成人国产麻豆网| 亚洲伊人久久精品综合| av免费在线看不卡| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜激情久久久久久久| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲情色 制服丝袜| 91精品伊人久久大香线蕉| 一本大道久久a久久精品| 少妇熟女欧美另类| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 天天影视国产精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 不卡视频在线观看欧美| 99国产精品免费福利视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美激情高清一区二区三区 | 叶爱在线成人免费视频播放| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 日韩一区二区三区影片| av女优亚洲男人天堂| 久久久久久免费高清国产稀缺| 999精品在线视频| 99久久人妻综合| 丁香六月天网| 久久精品久久久久久久性| 国产精品熟女久久久久浪| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久99热这里只频精品6学生| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品久久久久久av不卡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线免费观看不下载黄p国产| 在线观看www视频免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日本欧美视频一区| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品美女久久av网站| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一区二区三区四区激情视频| 午夜老司机福利剧场| 高清欧美精品videossex| 久久久久网色| 热re99久久精品国产66热6| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品一区二区三卡| 宅男免费午夜| 岛国毛片在线播放| 国产免费福利视频在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 最近最新中文字幕免费大全7| 成人黄色视频免费在线看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 午夜福利影视在线免费观看| 国产乱来视频区| 丝瓜视频免费看黄片| 青春草视频在线免费观看| 人妻一区二区av| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99热网站在线观看| 亚洲欧洲日产国产| av在线播放精品| 国产精品久久久久久精品电影小说| 97人妻天天添夜夜摸| 97精品久久久久久久久久精品| 在线观看www视频免费| 亚洲国产精品国产精品| 欧美在线黄色| 人妻一区二区av| 99精国产麻豆久久婷婷| 男的添女的下面高潮视频| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲综合色网址| 人人澡人人妻人| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美成人午夜精品| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产淫语在线视频| 国产在线视频一区二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 大香蕉久久成人网| 亚洲成国产人片在线观看| 青青草视频在线视频观看| 亚洲av免费高清在线观看| 国产成人欧美| 久久久精品免费免费高清| 五月开心婷婷网| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 成人国产av品久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 午夜福利视频精品| 欧美日韩av久久| 久久久久久久国产电影| 久久狼人影院| 国产免费现黄频在线看| 国产精品国产三级专区第一集| 国产一区二区在线观看av| 男女高潮啪啪啪动态图| 午夜老司机福利剧场| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产亚洲精品第一综合不卡| 18+在线观看网站| 国产av精品麻豆| 最新的欧美精品一区二区| av免费在线看不卡| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲国产欧美网| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 99re6热这里在线精品视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 老熟女久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 十分钟在线观看高清视频www| 久久久久久久精品精品| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲第一av免费看| videosex国产| 国产黄频视频在线观看| 一级毛片 在线播放| 中国国产av一级| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 自线自在国产av| 免费看不卡的av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产国语露脸激情在线看| 久久久久人妻精品一区果冻| 女性被躁到高潮视频| 97在线人人人人妻| 十八禁网站网址无遮挡| 久久久久久久久久久久大奶| 免费观看a级毛片全部| 最近最新中文字幕免费大全7| 天美传媒精品一区二区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 国产av精品麻豆| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 婷婷色综合www| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美激情 高清一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 人人澡人人妻人| 一级a爱视频在线免费观看| tube8黄色片| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人a∨麻豆精品| 成人二区视频| 亚洲精品一二三| 男女边摸边吃奶| 日韩三级伦理在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 三级国产精品片| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品一区二区在线观看99| 观看av在线不卡| 综合色丁香网| 免费黄色在线免费观看| 国产成人精品一,二区| 久久久久久久久久人人人人人人| 街头女战士在线观看网站| 久久影院123| 曰老女人黄片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 超色免费av| 多毛熟女@视频| 国产片特级美女逼逼视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 捣出白浆h1v1| 久久99精品国语久久久| 欧美国产精品一级二级三级| 男人爽女人下面视频在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 五月开心婷婷网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲情色 制服丝袜| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美在线黄色| 男女免费视频国产| 国产97色在线日韩免费| 99久久综合免费| av线在线观看网站| 99国产精品免费福利视频| 日本色播在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久久久人妻| 国产免费现黄频在线看| 视频区图区小说| 91精品国产国语对白视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 免费在线观看完整版高清| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产一区二区 视频在线| 999精品在线视频| 欧美人与善性xxx| 最黄视频免费看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产成人欧美| 看免费成人av毛片| 成人国产麻豆网| 毛片一级片免费看久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产在线免费精品| 最新中文字幕久久久久| 色播在线永久视频| 乱人伦中国视频| 久久国产精品大桥未久av| 性少妇av在线| 久久精品国产综合久久久| 亚洲伊人色综图| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜福利视频精品| 伊人久久国产一区二区| 亚洲成色77777| 一级毛片 在线播放| 欧美人与性动交α欧美软件| 一级爰片在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品乱久久久久久| 99久国产av精品国产电影| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品在线电影| 国产97色在线日韩免费| 久久久久网色| 精品一品国产午夜福利视频| 麻豆av在线久日| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 香蕉国产在线看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品久久蜜臀av无| 一级毛片我不卡| 国产成人精品一,二区| 日韩一本色道免费dvd| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 色吧在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 1024香蕉在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日本av免费视频播放| 午夜福利视频精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 交换朋友夫妻互换小说| 成人影院久久| 国产一级毛片在线| 波野结衣二区三区在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 日韩精品有码人妻一区| 国产在视频线精品| 久久狼人影院| 国产极品天堂在线| 国产av国产精品国产| 亚洲美女搞黄在线观看| 日本免费在线观看一区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 丝袜脚勾引网站| 午夜福利,免费看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲三级黄色毛片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本av手机在线免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产成人精品在线电影| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久精品夜色国产| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 少妇人妻 视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 女人久久www免费人成看片| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利在线免费观看网站| 大片电影免费在线观看免费| 日韩一区二区三区影片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 搡女人真爽免费视频火全软件| www日本在线高清视频| 男女午夜视频在线观看| 国产成人精品久久久久久| av天堂久久9| 久久久久久久国产电影| av有码第一页| 久久久久国产一级毛片高清牌| 另类精品久久| 看十八女毛片水多多多| 七月丁香在线播放| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美人与善性xxx| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| av视频免费观看在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一区二区av电影网| 国产 精品1| 岛国毛片在线播放| 国产成人精品婷婷| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看| 一级毛片 在线播放| 亚洲国产精品成人久久小说| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 97人妻天天添夜夜摸| 成年人免费黄色播放视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 人妻系列 视频| 亚洲成色77777| 伦理电影免费视频| 97在线人人人人妻| 亚洲av国产av综合av卡| 精品国产国语对白av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 人成视频在线观看免费观看| 色视频在线一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 国产极品天堂在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产片特级美女逼逼视频| 在线天堂中文资源库| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 男的添女的下面高潮视频| 在线观看免费高清a一片| 日韩一区二区视频免费看| 精品久久久久久电影网| 少妇人妻精品综合一区二区| videosex国产| 国产视频首页在线观看| 丁香六月天网| 69精品国产乱码久久久| 女性被躁到高潮视频| 久久久久精品人妻al黑| 国产男人的电影天堂91| 三上悠亚av全集在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 看免费av毛片| tube8黄色片| 国产精品一国产av| 国产 精品1| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产野战对白在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文天堂在线官网| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 精品一区在线观看国产| 亚洲伊人色综图| 街头女战士在线观看网站| 女性被躁到高潮视频| 大香蕉久久网| 91久久精品国产一区二区三区| 一个人免费看片子| 26uuu在线亚洲综合色| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品一区二区在线观看99| 国产一区二区 视频在线| 国产淫语在线视频| av免费在线看不卡| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 超碰成人久久| 免费黄网站久久成人精品| 大陆偷拍与自拍| 91在线精品国自产拍蜜月| 在线观看免费视频网站a站| av免费在线看不卡| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产黄色免费在线视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久久精品人妻al黑| 国产精品免费大片| 十八禁高潮呻吟视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久97久久精品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 性少妇av在线| 激情视频va一区二区三区| 中文天堂在线官网| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 五月天丁香电影| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲国产色片| 国产精品av久久久久免费| xxxhd国产人妻xxx| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产欧美在线一区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲,欧美,日韩| 黑人猛操日本美女一级片| 精品国产一区二区三区四区第35| 99热网站在线观看| 成年av动漫网址| 国产精品一国产av| 一二三四在线观看免费中文在| 黄频高清免费视频| av卡一久久| 亚洲国产日韩一区二区| www.精华液| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产成人91sexporn| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久99精品国语久久久| 97人妻天天添夜夜摸| 国产成人精品久久久久久| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 女人久久www免费人成看片| 日韩成人av中文字幕在线观看| kizo精华| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美变态另类bdsm刘玥| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产熟女欧美一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产片内射在线| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| 97在线人人人人妻| 亚洲欧洲国产日韩| 999精品在线视频| 黄片无遮挡物在线观看| 一区二区三区激情视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| a级毛片黄视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 我要看黄色一级片免费的| 成人亚洲欧美一区二区av| 男男h啪啪无遮挡| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久久久久精品精品| 18禁国产床啪视频网站| 91久久精品国产一区二区三区| 赤兔流量卡办理| av一本久久久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产男女内射视频| 秋霞伦理黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一区二区日韩欧美中文字幕| 多毛熟女@视频| av视频免费观看在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩精品免费视频一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 精品视频人人做人人爽| 午夜久久久在线观看| 赤兔流量卡办理| 国产片内射在线| 人妻一区二区av| 最近中文字幕高清免费大全6| 日韩,欧美,国产一区二区三区| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品国产亚洲av涩爱| 天堂8中文在线网| 熟女av电影| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜免费鲁丝| 国产午夜精品一二区理论片| 一级毛片 在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美av亚洲av综合av国产av | 少妇人妻精品综合一区二区| 国产av一区二区精品久久| 五月开心婷婷网| 亚洲美女黄色视频免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美精品国产亚洲| 午夜福利乱码中文字幕| 男女高潮啪啪啪动态图| 尾随美女入室| 色视频在线一区二区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 黄色怎么调成土黄色| 国产成人精品在线电影| 亚洲欧美清纯卡通| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久久久精品性色| 1024视频免费在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产一区二区在线观看av| tube8黄色片| 亚洲欧洲日产国产| a级片在线免费高清观看视频| 我的亚洲天堂| 九草在线视频观看| 午夜91福利影院| 满18在线观看网站| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲天堂av无毛| 亚洲图色成人| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩视频在线欧美| 国产亚洲最大av| 黄色配什么色好看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人精品久久二区二区91 | 看免费av毛片| 老司机影院毛片| 久久久久精品性色| 国产精品国产三级专区第一集| 飞空精品影院首页| 性少妇av在线| 日韩视频在线欧美| 精品一区在线观看国产| 在线精品无人区一区二区三| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日韩视频精品一区| 国产精品一二三区在线看| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 女人精品久久久久毛片| 青春草视频在线免费观看| 搡老乐熟女国产| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩av不卡免费在线播放| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩精品有码人妻一区| av在线老鸭窝| www.精华液| 国产探花极品一区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产成人精品无人区| 国产 精品1| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日日啪夜夜爽| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 大片免费播放器 马上看| av.在线天堂| 亚洲欧美一区二区三区国产| 男人操女人黄网站| 老女人水多毛片| 国产精品 欧美亚洲|