黃瓜中霜脲氰和喹啉銅的殘留檢測(cè)及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

范珺　王明林　于建壘　宋國春　李瑞娟

摘要：為了探明霜脲氰和喹啉銅在黃瓜上的殘留特性和使用安全性，采用高效液相色譜分析技術(shù)測(cè)定了霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的殘留動(dòng)態(tài)和最終殘留。結(jié)果表明：霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的半衰期分別為1.8～2.5 d和2.6～4.1 d。以40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑360、540 g a.i./hm2，于黃瓜生長期連續(xù)噴藥3、4次，最后一次施藥后1、2、3、5 d，黃瓜中霜脲氰殘留量均低于0.5 mg/kg（MRL），喹啉銅殘留量均低于2.0 mg/kg（MRL）。膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明，霜脲氰和喹啉銅的風(fēng)險(xiǎn)商值僅為0.62%和0.40%，處于安全水平。推薦該藥在黃瓜上應(yīng)用的安全間隔期為1 d。

關(guān)鍵詞：霜脲氰；喹啉銅；黃瓜；殘留；風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

中圖分類號(hào)：TQ450.2+63文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）05-0122-05

霜脲氰（cymoxanil），化學(xué)名稱2-氰基-N-[（乙?；然鵠-2-（甲氧基亞胺基）乙酰胺，是20 世紀(jì)70 年代美國杜邦公司研制的一種殺菌劑，主要用于防治黃瓜、葡萄、馬鈴薯等的霜霉病[1～5]。喹啉銅（oxine-copper）是一種廣譜、高效、低殘留的內(nèi)吸性鉗合態(tài)有機(jī)螯合銅殺菌劑，對(duì)真菌、細(xì)菌性病毒具有良好的預(yù)防和治療作用[6，7]。它與霜脲氰結(jié)合使用可以有效防治黃瓜霜霉病，降低霜霉病帶來的經(jīng)濟(jì)損失，具有很好的市場(chǎng)潛力和廣泛的應(yīng)用前景，但長期、大量使用該農(nóng)藥會(huì)對(duì)食品和環(huán)境帶來潛在的危害。

劉明洋等[14]建立了利用高效液相色譜測(cè)定葡萄及其土壤中霜脲氰殘留量的分析方法；郭利豐等[11]采用氣相色譜法對(duì)33.5%喹啉銅懸浮劑進(jìn)行了分析研究；李國平等[13]采用高效液相色譜法測(cè)定了混劑中的喹啉銅；周夢(mèng)春等[7]建立了喹啉銅在番茄中的殘留分析方法。雖然關(guān)于霜脲氰和喹啉銅在農(nóng)作物中的殘留已有報(bào)道[8～14]，但全面系統(tǒng)的研究報(bào)道少見，而有關(guān)同時(shí)測(cè)定霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的殘留情況尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑在黃瓜及土壤中的殘留動(dòng)態(tài)和最終殘留展開研究，以探明其在黃瓜上的殘留規(guī)律，并為其合理使用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器（Waters公司）；超聲波清洗儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；水浴振蕩器（哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；電子天平（METTLER）。

40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑（霜脲氰10%，喹啉銅30%，青島東生藥業(yè)有限公司提供）；霜脲氰、喹啉銅標(biāo)準(zhǔn)品（純度分別為99.0%、98.5%，由青島東生藥業(yè)有限公司提供）；乙腈、甲醇為色譜純；氯化鈉、氫氧化鈉、鹽酸均為分析純。

供試作物：津選優(yōu)1號(hào)、津春4號(hào)黃瓜。

1.2田間試驗(yàn)方法

參照農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所制定的《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[15]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[16]，于2012～2013年分別在山東、河北、安徽三地進(jìn)行了消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)及最終殘留試驗(yàn)。

1.2.1消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)在黃瓜幼果期施藥，施藥時(shí)應(yīng)保證用于動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的黃瓜均勻著藥。施藥劑量為40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑540 g a.i./hm2，施藥后2 h、1、3、5、7、14、21、30、45 d采集黃瓜樣品。在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)隨機(jī)取樣，每個(gè)小區(qū)不同方向及上下不同部位采集6條以上（不少于2 kg）生長正常、無病害、成熟的黃瓜，用不銹鋼刀切成1 cm大小的碎塊，在不銹鋼盆中充分混勻，用四分法切分樣品，分取兩份150 g的樣品，分別裝入封口樣品容器中并進(jìn)行標(biāo)記，于-20℃冰柜中保存。

1.2.2最終殘留量試驗(yàn)設(shè)兩個(gè)施藥劑量：低劑量為360 g a.i./hm2，高劑量為540 g a.i./hm2。各設(shè)3、4次施藥，施藥間隔期7 d，每處理設(shè)3次重復(fù)。最后一次施藥后1、2、3、5 d采集黃瓜樣品及土壤樣品。另設(shè)空白對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)隔離帶。黃瓜樣本的采集方法同動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。

1.3分析方法

1.3.1樣品提取、凈化將切碎的黃瓜樣品混勻，稱取10.0 g于勻漿機(jī)中，加入40 mL乙腈，高速勻漿 2 min，過濾至裝有7 g氯化鈉的具塞量筒中，劇烈振蕩2 min，靜置20 min，取20 mL上層有機(jī)相于平底燒瓶中，減壓濃縮至近干，用甲醇定容至5 mL，待測(cè)。

1.3.2儀器條件檢測(cè)器： Waters 2695高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長：250 nm；色譜柱：VP-ODS C18柱，250 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：甲醇-水（V∶V=40∶60）；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。

1.3.3結(jié)果計(jì)算采用外標(biāo)法峰面積定量。一定范圍內(nèi)峰面積響應(yīng)值（Y）和進(jìn)樣量（X）有良好線性關(guān)系。用霜脲氰標(biāo)準(zhǔn)品配制0.05、0.1、0.5、1.0、10.0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述儀器條件下檢測(cè)，霜脲氰進(jìn)樣量在1×10-9～2×10-7 g之間有良好的線性關(guān)系，直線回歸式為：Y=3444.5X-1459.2，R2=1.0000。用喹啉銅標(biāo)準(zhǔn)品配制0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述儀器條件下檢測(cè)，喹啉銅進(jìn)樣量在10-9～10-7 g之間有良好的線性關(guān)系，直線回歸式為：Y=3949X-5120.5，R2=0.9993。

1.3.4方法靈敏度、準(zhǔn)確度及精密度在上述色譜條件下，霜脲氰、喹啉銅的最低檢出量為10-9 g。霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的最低檢出濃度均為0.05 mg/kg。用未施藥的黃瓜空白樣品進(jìn)行3個(gè)濃度的添加回收試驗(yàn)，霜脲氰添加量分別為0.05、0.5、1.0 mg/kg，喹啉銅添加量分別為0.05、1.0、2.0 mg/kg，每個(gè)添加濃度進(jìn)行5次平行測(cè)定，設(shè)空白對(duì)照。霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的添加回收率分別為95.8%～110.9%和108.3%～110.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.6%～4.5%和3.9%～5.1%。本方法有較好的準(zhǔn)確度及精密度，符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求（色譜圖見圖1）。endprint

1.4膳食暴露和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的長期膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分別由公式（1）、（2）計(jì)算得出。

國家估算每日攝入量（NEDI）[17，18]：

式中：Fi為我國一般人群對(duì)某一農(nóng)產(chǎn)品或食品的日攝入量，kg/d；STMRi為規(guī)范殘留試驗(yàn)中值，本文中采用黃瓜殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值；Ei和Pi分別為食品的可食部分因子和食品加工因子，本文中不考慮區(qū)別，均設(shè)為1；ADI為每日允許攝入量，mg/kg bw；bw為體重，kg，我國人均體重一般按63 kg計(jì)。當(dāng)RQ>1時(shí)，表示存在不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，數(shù)值越大，風(fēng)險(xiǎn)越大；RQ<1時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)為可接受，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越小[20]。

2結(jié)果與分析

2.1霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的殘留消解動(dòng)態(tài)

2012～2013年在山東、河北、安徽進(jìn)行了40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑在黃瓜中的殘留消解規(guī)律試驗(yàn)研究，其消解規(guī)律均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程式Ct=C0e-kt。式中：Ct為施藥后7 d的殘留農(nóng)藥濃度，C0為施藥后的原始沉積量，k為消解速率常數(shù)，t為施藥后的天數(shù)。從試驗(yàn)結(jié)果看出（表1、表2），霜脲氰在黃瓜中的半衰期為1.8～2.5 d，藥后7 d殘留量未檢出（<0.05 mg/kg）；喹啉銅在黃瓜中的半衰期為2.6～4.1 d，藥后14 d消解90%以上或未檢出。

2.2霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中的最終殘留量

40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑360 g a.i./hm2 3次藥后1、2 d黃瓜中霜脲氰殘留量為0.0551～0.127 mg/kg，藥后3、5 d未檢出；4次藥后1、2 d殘留量為0.0682～0.167 mg/kg，藥后3、5 d未檢表1霜脲氰在黃瓜中

出。40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑540 g a.i./hm2 3次施用后1、2、3 d黃瓜中霜脲氰殘留量為0.0578～0.222 mg/kg，藥后5 d未檢出；4次藥后1、2、3 d殘留量為0.0761～0.256 mg/kg，藥后5 d未檢出。所有檢出樣品殘留量均低于最大殘留限量0.5 mg/kg。對(duì)照區(qū)樣品霜脲氰殘留量均未檢出（表3）。

由表4可以看出，40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑360 g a.i./hm2，3次藥后1、2、3、5 d黃瓜中喹啉銅殘留量為0.0539～0.316 mg/kg；4次藥后1、2、3、5 d殘留量為0.0604～0.437 mg/kg。40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑540 g a.i./hm2，3次藥后1、2、3、5 d黃瓜中喹啉銅殘留量為0.0598～0.528 mg/kg；4次藥后1、2、3、5 d殘留量為0.0969～0.563 mg/kg。所有檢出樣品殘留量均低于最大殘留限量2.0 mg/kg。對(duì)照區(qū)黃瓜樣品中均未檢出喹啉銅殘留（<0.05 mg/kg）。

根據(jù)我國國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，霜脲氰和喹啉銅人體每千克體重每日允許攝入量（ADI）為0.013 mg和0.02 mg，根據(jù)《中國居民膳食指南》（2011年修訂），我國人均膳食結(jié)構(gòu)中黃瓜（深色蔬菜）每日攝入量一般為0.0915 kg?；谝?guī)范殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行的國家估算每日攝入量（NEDI）評(píng)估結(jié)果見表5。由此計(jì)算得出，霜脲氰暴露攝入量不超過其ADI的0.62%，喹啉銅暴露攝入量不超過其ADI的0.40%，處于極低的水平，無明顯膳食風(fēng)險(xiǎn)。

3結(jié)論與討論

建立了同時(shí)測(cè)定霜脲氰和喹啉銅在黃瓜中殘留的分析方法。其前處理操作簡便、省時(shí)，便于掌握，進(jìn)樣量在10-9～10-7 g之間有良好的線性關(guān)系，霜脲氰、喹啉銅的最低檢出量均為10-9 g。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，霜脲氰在黃瓜中的半衰期為1.8～2.5 d，藥后7 d殘留量未檢出；喹啉銅在黃瓜中的半衰期為2.6～4.1 d，藥后14 d消解90%以上或未檢出。霜脲氰、喹啉銅在黃瓜中的半衰期短，消解速度較快。根據(jù)殘留情況推薦40%霜脲氰·喹啉銅懸浮劑用于防治黃瓜霜霉病，最高用藥量360 g a.i./hm2，最多施藥3次，在黃瓜上的安全間隔期為1 d。

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收稿日期：2014-03-07endprint