雪蓮果醇提物抗氧化性能測(cè)定

馮文婕，闕斐

（浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310018）

雪蓮果醇提物抗氧化性能測(cè)定

馮文婕，闕斐

（浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江杭州310018）

以云南雪蓮果為原料，采用醇提法提取有效成分，用鄰二氮菲-Fe2+法測(cè)定雪蓮果醇提物清除·OH（羥自由基）的能力。研究了乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間、料液比對(duì)醇提物抗氧化性能的影響，確定了最佳提取條件為：乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%、提取溫度80℃、提取時(shí)間2.5 h、料液比1∶20（g∶mL），雪蓮果醇提物對(duì)·OH的清除率為81.6%。

雪蓮果；乙醇；提??；抗氧化性

雪蓮果（Smallanthus sonchifolius），屬于菊科向日葵屬雙子葉多年生草本植物，原產(chǎn)于南美洲，目前已在我國(guó)云南、福建、海南等九個(gè)省引種栽培成功。雪蓮果富含酚酸（主要是綠原酸、咖啡酸和阿魏酸）、類黃酮、低聚果糖等功能性成分，以及人體所需鉀、鈣、鋅、鐵等微量元素，是典型的藥用型水果[1-3]，已證明具有良好地護(hù)肝、降血脂、抗氧化、防治便秘和調(diào)節(jié)腸道菌群等作用[4-6]。其塊莖中含有的多種酚酸物質(zhì)是陸生植物中最典型的抗氧化活性成分，對(duì)過(guò)氧化物和自由基有一定的清除能力，緩解肝細(xì)胞氧化損傷，能有效防動(dòng)脈硬化等慢性疾病，及保護(hù)人體的肝臟[7-9]。

雪蓮果因其特殊的功能特性和良好的藥用價(jià)值將越來(lái)越被廣泛的重視，但由于雪蓮果水分含量大，在空氣中易腐爛，保存期短，使用受限制，目前雪蓮果以鮮食為主，利用率較低，導(dǎo)致雪蓮果的開發(fā)利用仍處于初級(jí)階段。本研究用乙醇為提取劑，從雪蓮果中提取出抗氧化活性物質(zhì)，并測(cè)定其清除·OH的能力，其結(jié)果對(duì)于雪蓮果的開發(fā)利用以及尋找高效的抗氧化劑研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

雪蓮果，云南產(chǎn)。乙醇（分析純）：長(zhǎng)青化工有限公司；過(guò)氧化氫（分析純）：南京探求生物技術(shù)有限公司；鄰二氮菲（分析純）：青島正業(yè)試劑儀器有限公司。UV-2000紫外可見分光光度計(jì)：尤尼柯儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 雪蓮果有效成分的提取

雪蓮果洗凈去皮，切碎為大小均勻的顆粒，準(zhǔn)確稱取10 g的雪蓮果顆粒于圓底燒瓶中，加入一定量的乙醇溶液，在一定溫度下進(jìn)行提取一定的時(shí)間。

1.2.2 雪蓮果提取物抗氧化性測(cè)定

先取5mL pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液（0.2mmol/L）于10mL具塞試管中，然后依次加入0.75mmol/L鄰二氮菲溶液1mL、0.75mmol/LFeSO4溶液1mL、雪蓮果乙醇提取液2mL和3%H2O2溶液1mL，每加一次試劑均需振蕩搖勻，在37℃反應(yīng)60min后，于536 nm[10]處測(cè)定其吸光度值，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算·OH（羥自由基）的清除率。

式中：A0為不含樣品，只含H2O2時(shí)的吸光度值；A1為不含樣品，以蒸餾水代替H2O2時(shí)的吸光度值；A2為含樣品的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

適宜的乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)有利于原料中抗氧化活性成分的溶出，可大大縮短提取時(shí)間，增加提取效率。均勻稱取4份雪蓮果顆粒，分別加入180mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%、30%、40%、50%的乙醇溶液，在80℃下提取2.5 h后，抽濾備用。H2O2/Fe2+體系通過(guò)Fenton反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生具有高反應(yīng)活性的·OH，而鄰二氮菲-Fe2+會(huì)被·OH氧化為鄰二氮菲-Fe3+，這時(shí)在536 nm的最大吸收峰將消失，而當(dāng)體系加入能清除·OH的抗氧化成分后，氧化過(guò)程會(huì)受到抑制，536 nm處會(huì)出現(xiàn)明顯的吸收峰。根據(jù)此原理，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測(cè)定雪蓮果提取物清除·OH的能力。

圖1 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)醇提物抗氧化性能的影響Fig.1 Effectof the concentration of ethanolon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

由圖1結(jié)果可知，在乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)在20%~40%之間時(shí)，雪蓮果醇提物抗氧化性能隨乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加而增加，并在40%時(shí)對(duì)·OH的清除率達(dá)80%以上，之后再增加乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的其清除率變化不大。根據(jù)相似相容原理，可能是由于乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大，使醇溶性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)溶解，導(dǎo)致了抗氧化成分的溶解度不再增加或略有下降。因此，選擇提取工藝中乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%為宜。

2.2 提取溫度對(duì)雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

均勻稱取4份雪蓮果顆于圓底燒瓶中，加入180mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液，分別在20、40、60、80℃下提取2.5 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測(cè)定雪蓮果提取物清除·OH的能力，結(jié)果如圖2所示。

圖2 提取溫度對(duì)醇提物抗氧化性能的影響Fig.2 Effectof extraction tem peratureon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

較低的溫度（室溫）不利于抗氧化成分的浸出，而當(dāng)溫度不斷升高時(shí)，較高的溫度能不斷促進(jìn)分子的熱運(yùn)動(dòng)，使溶質(zhì)和溶劑分子間的傳遞速率加快，有利于抗氧化成分的溶解提取，其清除·OH能維持在一個(gè)較高的水平（清除率＞60%）。但過(guò)高的溫度反而會(huì)造成抗氧化成分分解，導(dǎo)致提取量降低而影響其清除·OH的能力。因此，提取溫度控制在80℃為宜。

2.3 提取時(shí)間對(duì)雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

均勻稱取4份雪蓮果顆于圓底燒瓶中，加入180mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液，分別在80℃下提取1、1.5、2、2.5、3 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測(cè)定雪蓮果提取物清除·OH的能力，選擇適宜的提取時(shí)間。

圖3 提取時(shí)間對(duì)醇提物抗氧化性能的影響Fig.3 Effectof extraction timeon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

從圖3中可以看出，隨著提取時(shí)間的增加，醇提物對(duì)·OH的清除率先升高后降低，當(dāng)提取時(shí)間為2.5 h時(shí)，清除率最大約80%。這是因?yàn)樘崛r(shí)間短時(shí)，抗氧化成分還未完全溶解出來(lái)，此時(shí)·OH的清除率也相應(yīng)較低，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，抗氧化成分逐步被提取出來(lái)，清除率也隨著升高；但提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)（≥3 h），其他雜質(zhì)組分也被溶劑溶解出來(lái)，反而影響提取效果，故確定提取時(shí)間為2.5 h。

2.4 料液比對(duì)綠原酸提取效果的影響

分別在不同總料液比（g∶mL）1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25條件下，用40%乙醇溶液，于80℃提取2.5 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測(cè)定，確定不同料液比與雪蓮果醇提物清除·OH的能力的關(guān)系。

結(jié)果如圖4所示，料液比較小時(shí)，抗氧化成分提取不充分，隨著乙醇用量的不斷增加，抗氧化有效成分的提取量也相應(yīng)的增加，對(duì)·OH的能力也相應(yīng)增加，當(dāng)料液比為1∶20（g∶mL）時(shí)，提取效果最好，再增加乙醇溶液的用量，對(duì)·OH的清除率變化不明顯，適宜的乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)就能將抗氧化活性成分溶解出來(lái)，再加大乙醇溶液的用量意義不大。因此，選擇料液比為1∶20（g/mL）。

圖4 料液比對(duì)醇提物抗氧化性能的影響Fig.4 Effectof the ratio ofmaterial to solventon antioxidant activity of yacon alcoholextraction

3 結(jié)論

本文以乙醇為提取劑，對(duì)雪蓮果中的抗氧化活性成分進(jìn)行提取，并測(cè)定其清除·OH的能力。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取工藝參數(shù)：乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%，提取溫度80℃，提取時(shí)間2.5 h，料液比1∶20（g∶mL），在此最優(yōu)條件下雪蓮果醇提物對(duì)·OH的清除率為81.6%。雪蓮果具有明顯的抗氧化活性，表明它具有良好的開發(fā)利用前景。

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Determ ination of Antioxidant Activity of Yacon（Smallanthus sonchifolius）Alcohol Extraction

FENGWen-jie，QUEFei
（Zhejiang Economic&Trade Polytechnic，Hangzhou 310018，Zhejiang，China）

In thisstudy，yaconwereused as rawmaterial toextractactive ingredientswith alcohol.Themethod of phenanthroline-Fe2+reaction system was used tomeasure the scavenging ability of·OH free radical.The best level of the factors including ethanol concentration，extraction temperature，extraction time and the ratio of weightof the Yacon to volume ofsolventwere affected on antioxidantactivity.The optimalextraction conditions were as follows：40%ethanolasextraction solvent，extraction time 2.5 h，temperature 80℃，ratio ofmaterial to solvent 1∶20（g∶mL）.Under these conditions，the scavenging ability of·OH free radical of Yacon alcohol extractionwasup to81.6%.

smallanthussonchifolius；ethanol；extraction；antioxidantactivity

2013-07-15

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.011

馮文婕（1983—），女（漢），講師，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物的提取與分離。