隔藥餅灸對(duì)急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響

周志剛 羅薇絮 張學(xué)強(qiáng) 覃 肯 吳煥淦

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，上海，201203; 2 江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南昌，330004; 3 上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所，上海，200030)

實(shí)驗(yàn)研究

隔藥餅灸對(duì)急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響

周志剛1，2羅薇絮2張學(xué)強(qiáng)2覃 肯2吳煥淦3

(1 上海中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，上海，201203; 2 江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南昌，330004; 3 上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所，上海，200030)

目的：觀察隔藥餅灸對(duì)急性胃黏膜損傷家兔黏液層陽(yáng)性層厚度和腧穴局部組織Na+/K+-ATP酶活性的影響，探討隔藥餅灸治療急性胃黏膜損傷的機(jī)制。方法：采用無(wú)水乙醇損傷造模法建立急性胃黏膜損傷模型，將40只家兔隨機(jī)分成正常組和造模組，待模型在確定后，造模組家兔再隨機(jī)分成模型組、隔藥餅灸組和西藥組，每組9只。隔藥餅灸組將制好的藥餅置于后三里穴上，灸6壯，1次/d，連續(xù)灸7 d。其他各組僅做與隔藥灸組相同的固定，不予任何治療，共7 d。干預(yù)后，收集胃黏膜組織和后三里穴組織，分別按照實(shí)驗(yàn)處理要求做相應(yīng)的處理。結(jié)果：隔藥餅灸組胃黏膜黏液層陽(yáng)性厚度較模型組明顯增厚(P<0.05)，隔藥餅灸組后三里穴的Na+/K+-ATP酶活性較模型組顯著升高。結(jié)論：改善“后三里”腧穴能量代謝可能是保護(hù)和修復(fù)胃黏膜損傷的作用途徑之一。

隔藥餅灸;急性胃黏膜損傷;能量代謝

灸法是一種以溫?zé)岽碳橹饕厣淖匀化煼āＪ┚牡闹饕牧鲜前q，艾絨燃燒時(shí)產(chǎn)生0.8～5.6 μm的紅外光譜，分別產(chǎn)生非熱效應(yīng)和熱效應(yīng)[1]。龐小峰[2]等發(fā)現(xiàn)由ATP分子水解釋放的生物能量傳遞的新理論的物理和生物學(xué)基礎(chǔ)，實(shí)驗(yàn)證明蛋白質(zhì)分子能吸收波長(zhǎng)為1～3 μm和5～7 μm的紅外光，后者能導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子中的酰胺鍵的振動(dòng)，從而促使生物能量沿蛋白質(zhì)分子傳遞，使生物組織健康生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)人體穴位在2～2.5 μm光譜處存在一個(gè)明顯的紅外輻射峰，這與ATP轉(zhuǎn)化成ADP時(shí)釋放能量時(shí)發(fā)出的光子波長(zhǎng)有一致性[3]。

現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)證明艾灸對(duì)急性胃黏膜損傷有良好的修復(fù)和保護(hù)作用[4-5]。研究表明艾灸可以通過干預(yù)線粒體信號(hào)通路cyt-c和Apaf-1發(fā)揮保護(hù)胃黏膜作用[7]。但目前艾灸腧穴局部產(chǎn)生的生物效應(yīng)和胃黏膜損傷后修復(fù)關(guān)系還不明確。本實(shí)驗(yàn)擬以急性胃黏膜損傷家兔為模型，在家兔“后三里”上施灸，觀察隔藥餅灸對(duì)胃黏膜的修復(fù)作用(黏膜損傷指數(shù)和胃黏膜黏液層陽(yáng)性層厚度)和腧穴局部生物效應(yīng)(線粒體形態(tài)和ATP酶活性)變化，探討隔藥餅灸治療急性胃黏膜損傷家兔的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康新西蘭兔40只，雌雄各半，體重約(2.2±0.5)kg，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物編號(hào)：SCXK2010。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，飲食、飲水，以及一般狀況正常者納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要制劑和試劑 艾柱，藥餅，硫糖鋁(四川錫成藥業(yè)有限公司提供)，0.250 g/片，Na+/K+-ATP酶試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)，愛先蘭-糖原(AB-PAS)染色試劑盒(珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供)。

1.3 模型制備及分組 采用無(wú)水乙醇損傷造模法建立急性胃黏膜損傷模型[8]。造模前動(dòng)物均禁食48 h，隨機(jī)分為正常組和造模組。正常組用生理鹽水按2.35 mL/kg體重灌胃，其余用無(wú)水乙醇按2.35 mL/kg體重灌胃。24 h后恢復(fù)普通飲食。造模結(jié)束后在造模組中隨機(jī)選取3只、正常組組1只處死，取胃黏膜，冰凍切片，HE染色，光鏡觀察判斷造模成功與否。利用隨機(jī)數(shù)字表將造模組27只大鼠隨機(jī)分成模型組、隔藥餅灸組、西藥對(duì)照組，每組9只。

1.4 穴位選擇 家兔后三里穴的定位：根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[9]家兔針灸穴位定位：小腿背外側(cè)上1/5折點(diǎn)處，約當(dāng)腓骨頭下1.2 cm，脛骨嵴后1 cm。

1.5 治療方法 將動(dòng)物用皮毛理發(fā)器對(duì)其左、右后肢外側(cè)被毛剪剃干凈，置于屏蔽室中，將各組家兔固定于兔固定架內(nèi)固定，使其雙后腿伸出。適應(yīng)室溫10 min后進(jìn)行不同的方法干預(yù)處理。A組(正常組)、B組(模型組)：僅做與隔藥灸組相同的固定，不予任何治療。C組(隔藥灸組)：將制好的藥餅置于后三里穴上，灸6壯，1次/d，連續(xù)灸7 d。D組(西藥組)：根據(jù)家兔體表面積換算每日硫糖鋁的用量。每日灌藥量為25 mg/kg，1次/d，連續(xù)灌藥7 d。

1.6 標(biāo)本采集與制備

1.6.1 急性胃黏膜損傷家兔胃黏膜AB/PAS染色 從靠近幽門部剪取一塊約1.3 mm左右的胃黏膜，4%多聚甲醛固定，逐級(jí)酒精脫水，常規(guī)石蠟包埋，切片，AB/PAS染色，在光鏡下觀察。并用測(cè)微尺在光鏡×100倍下測(cè)量胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度，自竇、體交界500 μm處開始，每張切片取平均間隔測(cè)量10個(gè)部位后取平均值。

1.6.2 后三里穴組織Na+/K+-ATP酶活力 取“后三里”穴合適位置組織進(jìn)行分析，所取組織重量為112 mg左右。冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2 500 r/min，離心10 min，取上清用生理鹽水20倍稀釋，取樣0.05 mL。經(jīng)過酶促反應(yīng)和定磷兩個(gè)步驟，在636 nm處，1 cm光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度值。計(jì)算方式如下。

2 結(jié)果

2.1 艾灸對(duì)家兔胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度比較

與正常組比較，模型組家兔胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組比較，隔藥餅灸組兔胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);隔藥餅灸組家兔胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度高于西藥組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組家兔胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度的比較

注：與模型組比較，**P<0.01，與正常組比較，△△P<0.01。

2.2 艾灸對(duì)各組家兔”后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活力的影響 與正常組比較，西藥組和模型組的家免“后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);經(jīng)隔藥灸及硫糖鋁干預(yù)后，隔藥餅灸組和西藥組家兔后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性均明顯高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01);隔藥灸組“后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性低于正常組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);西藥組家兔后三里”穴組織Na+/K+-ATP酶活性明顯低于正常組和隔藥餅灸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。

表2 各組家兔后三里穴組織Na+/K+-ATP酶活性的比較±s)

注：與正常組比較，**P<0.01，與模型組比較，△△P<0.01。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)探討艾灸對(duì)急性胃黏膜損傷家兔腧穴局部能量代謝的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在“后三里”穴上施隔藥餅灸顯著降低急性胃黏膜損傷家兔胃黏膜損傷指數(shù)，明顯增加胃黏膜黏液層陽(yáng)性層厚度，提高局部組織的Na+/K+-ATP酶活性。

艾灸能保護(hù)胃黏膜免于損傷和修復(fù)胃黏膜損傷。急性胃黏膜損傷的發(fā)生發(fā)展與胃黏膜的侵襲/防御-修復(fù)動(dòng)態(tài)平衡密切相關(guān)。艾灸作用于腧穴產(chǎn)生生物效應(yīng)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)，達(dá)到保護(hù)和修復(fù)胃黏膜作用。通過抗炎(如抑制IL-1β、TNF-α等[11-12]、抗氧化[13]、抑制凋亡等抗損傷[14]和胃黏膜細(xì)胞增殖及胃黏膜重建[15]等保護(hù)效應(yīng)。

ATP能量代謝和疾病的病理狀態(tài)密切相關(guān)。經(jīng)絡(luò)是運(yùn)行氣血、聯(lián)系臟腑和體表及全身各部的通道[16]，腧穴是臟腑經(jīng)絡(luò)氣血輸注于軀體外部的特殊部位，也是疾病的反應(yīng)點(diǎn)和針灸等治法的刺激點(diǎn)[17]。ATP是細(xì)胞能量獲得、轉(zhuǎn)換、儲(chǔ)存和利用等環(huán)節(jié)的聯(lián)系紐帶。ATP酶(ATPase)是這類介導(dǎo)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的膜蛋白，可將細(xì)胞內(nèi)的ATP水解為ADP，并利用高能磷酸鍵貯存的能量完成離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[18]。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注腦損傷大鼠海馬線粒體ATP酶活性較正常組顯著降低[19]。緩慢性心律失常大鼠的心肌Na+/K+-ATP酶活性顯著降低[20]。大運(yùn)動(dòng)量耐力訓(xùn)練大鼠骨骼肌Na+/K+-ATP酶活性也明顯低于正常人[21]。這種病態(tài)時(shí)的低能量代謝也在人身上得到證實(shí)。有研究發(fā)現(xiàn)[22-24]，冠心病患者的某些腧穴(如勞宮、內(nèi)關(guān)、神門等)一定范圍內(nèi)紅外光譜明顯低于正常人。潰瘍性結(jié)腸炎患者的沖陽(yáng)穴和正常人相比較，在某些波長(zhǎng)范圍內(nèi)，輻射強(qiáng)度明顯低于正常人[25]。所有這些研究提示在病理狀態(tài)下，ATP能量代謝低下。

艾灸的近外紅光譜、腧穴波譜相似可能引發(fā)共振，促進(jìn)ATP代謝?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)：艾絨燃燒時(shí)產(chǎn)生0.8～5.6 μm紅外光譜，且峰譜多數(shù)集中在1.5～3.5 μm附近[1，26-27]。根據(jù)普朗克量子能量公式計(jì)算，一個(gè)ATP分子轉(zhuǎn)化成ADP時(shí)所釋放的能量如未被利用而以光子的形式輻射出來(lái)，其光子的波長(zhǎng)在2.5 μm附近。據(jù)研究表明[28]：扣除黑體輻射后，腧穴的紅外光譜在2～2.5 μm和15 μm處出現(xiàn)了高輻射峰。根據(jù)物理學(xué)原理，如腧穴局部細(xì)胞ATP分子釋放的光子輻射波譜與艾灸紅外輻射波相似，兩者引發(fā)共振。高效艾灸的紅外輻射促使ATP轉(zhuǎn)化為ADP，并釋放能量。研究表明當(dāng)單色紅光到近紅外光(600～1 000 nm)輻射細(xì)胞時(shí)，光輻射可改變線粒體呼吸鏈氧化還原狀態(tài)，促進(jìn)機(jī)體的ATP能量代謝[29-31]。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果隔藥灸可以改善急性胃黏膜損傷家兔的潰瘍指數(shù)，胃黏膜AB/PAS陽(yáng)性層厚度，提高Na+/K+-ATP酶活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示急性胃黏膜損傷愈合與隔藥灸提高腧穴局部組織Na+/K+-ATP酶活性有關(guān)，但其機(jī)制還有待于進(jìn)一步探討。

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(2014-03-26收稿 責(zé)任編輯：王明)

Effects of Herbs-Partitioned moxibustion on energy metabolism of local acupoint in rabbits with acute gastric mucosal lesion

Zhou Zhigang1，2，Luo Weixu2，Zhang Xueqiang2，Qin Ken2，Wu Huangan3

(1PostgraduateinstituteofShanghaiUniversityofTCM，Shanghai201203，China; 2SchoolofPreclinicalmedicalSciencesofJiangxiUniversityofTCM，330004，China; 3ShanghaiResearchInstituteofAcupunctureandmeridian，Shanghai200030，China)

Objective：To observe the effects of Herbs-Partitioned moxibustion on the positive mucus layer thickness and Na+/K+-ATP enzymatic activity in rabbits with acute gastric mucosal lesion for exploring the mechanisms of moxibustion action on model of acute gastric mucosal lesion.Methods：Anhydrous ethanol damage is adopted to establish model of gastric mucosal lesion.30 of 40 rabbits were randomly selected as model group，the rest as control.After the successful models were confirmed，30 model rabbits were randomly allocated to model group，herbs-partition moxibustion group and western medicine group.Herbs partition moxibustion group were treated by moxibustion on Housanli points，6 columns once a day.Western medicine group were administrated by gavage at dosage of 25 mg/kg a day.The other groups just fixed the same as herbs-partition moxibustion group without any treatment.The treatments continued for 7 days.the gastric mucosa and tissues of Housanli points were collected on 8th day，corresponding procedures were done at request of experiment.Results：The positive mucus layer thickness of herbs-partition moxibustion group was more significantly increased than those of model group(P<0.05).The Na+/K+-ATP enzymatic activity of herbs-partition moxibustion group was significantly increased than those of model group.Conclusion：Improving the local energy metabolism of local acupoint in rabbits with acute gastric mucosal lesion may be one of the mechanisms of restoring and protecting the mucosal lession.

Herbs-partition moxibustion;Acute gastric mucosal lesions;Energy metabolism

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81001549)

周志剛(1971.05—)，男，江西蓮花縣人，博士，副教授，研究方向：灸法作用的基本原理與應(yīng)用規(guī)律研究，通信地址：江西省南昌市灣里區(qū)興灣大道818號(hào)，郵編：330004，電話：(0791)87118672

吳煥淦(1956.11—)，男，浙江仙居縣人，博士，教授，研究方向：灸法作用的基本原理與應(yīng)用規(guī)律研究，通信地址：上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所，郵編：200030，電話：(021)64382190

R245.8

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.05.023