紫草素在人表皮共培養(yǎng)體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響

解士海 黃榮云

紫草素在人表皮共培養(yǎng)體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響

解士海 黃榮云

目的 探討紫草素在人表皮共培養(yǎng)體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。方法在共培養(yǎng)體系中測定紫草素對酪氨酸酶活性和黑素生成的影響。結(jié)果0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對于人表皮共培養(yǎng)細胞增殖無影響, 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對于表皮共培養(yǎng)細胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有較強的劑量相關(guān)性激活作用, 0.5 μmol/L及 1 μmol/L紫草素與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結(jié)論紫草素對于人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性和黑素生成有一定促進作用。

紫草素；表皮共培養(yǎng)體系；酪氨酸酶；黑素生成

色素紊亂性皮膚病一般比較難治, 其中白癜風更為不易治療。我國中醫(yī)中藥治療白癜風有數(shù)千年歷史, 其中成方達幾十種之多。紫草素高頻率的出現(xiàn)在許多治療白癜風的方劑中, 作者前期研究了紫草素在黑素瘤細胞中對黑素合成的影響［1］, 本研究進一步研究其在人表皮共培養(yǎng)體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。

1 材料與方法

1. 1材料 紫草素購自英國FLUOROCHEM(分析純) , 配制成1 mmol/L的貯存液, -80℃冰箱保存, 使用前稀釋至工作濃度。8-MOP(甲氧沙林)溶于二甲基亞砜, 配成10 ml。

8-MOP、中性酶、胰酶、二甲基亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑藍(MTT)均購自Sigma公司, 小牛血清購自杭州四季青公司；高通量多功能微板測試系統(tǒng)(德國BMG), 圖像信號采集與分析系統(tǒng)(德國LEICA公司), 倒置顯微鏡, 無菌工作臺等。

1. 2方法

1. 2. 1人表皮黑素細胞與角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)體系的建立參考文獻［2］。

1. 2. 2紫草素對人共培養(yǎng)細胞增殖的影響： MTT法檢測。

1. 2. 3酪氨酸酶活性測定實驗［3］參考文獻, 根據(jù)MTT實驗結(jié)果選取3個濃度(0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L)的紫草素, 測定其對酪氨酸酶活性的影響。

1. 2. 4黑素含量的測定［4］參考文獻, 測定 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L及1 μmol/L的紫草素對黑素生成的影響。

1. 3統(tǒng)計學方法 全部數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件進行兩因素方差分析檢驗, 計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 行t檢驗, P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2. 1紫草素對細胞增殖的影響 MTT實驗結(jié)果顯示紫草素濃度在(0.25～1 μmol/L)對人表皮共培養(yǎng)細胞無生長抑制作用。

2. 2紫草素對人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性及黑素生成的影響 結(jié)果表明(見表1), 紫草素對于人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性及黑素生成呈劑量依賴性激活作用, 紫草素組與對照組比較, 0.5 μmol/L及1 μmol/L紫草素對人表皮共培養(yǎng)體系中氨酸酶活性激活及黑素生成均差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01), 8-MOP 為陽性對照, 1 μmol/L紫草素作用優(yōu)于8-MOP(P＜0.01)。

表1 紫草素對共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性和黑素生成的影響(n=3, x-±s, %)

3 討論

中醫(yī)中藥的研究對于白癜風未來的治療越來越重要, 作者系統(tǒng)研究了許多中藥對于黑素生成的影響。紫草素不僅在黑素瘤細胞中可以劑量依賴地促進黑素生成, 本研究發(fā)現(xiàn)紫草素在模擬人體的共培養(yǎng)體系中同樣具有促進黑素生成和酪氨酸酶活性的作用, 為進一步研究開發(fā)紫草素打下基礎(chǔ)。

［1］ 解士海, 黃榮云, 趙衛(wèi)華, 等.紫草素對人黑素瘤細胞增殖及黑素合成的影響.臨床合理用藥雜志, 2010, 3(9):10-12.

［2］ 解士海, 陳志強, 馬鵬程, 等.人表皮黑素細胞與角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)體外模型中黑素小體轉(zhuǎn)運的觀察.臨床皮膚科雜志, 2006, 35(5):286-288.

［3］ Chen X, Oppenheim J, Howard OM, et al. Shikonin, a component of antiinflammatory Chinese herbal medicine, selectively blocks chemokine binding to CC chemokine receptor-1, Int Immunopharmacol, 2001(1): 229-236.

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