HPLC測(cè)定二甲雙胍格列美脲膠囊中的格列美脲含量

譚漢添 詹利之

HPLC測(cè)定二甲雙胍格列美脲膠囊中的格列美脲含量

譚漢添 詹利之

目的采用 HPLC方法測(cè)定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。方法色譜柱采用 Diamonsil C18( 200 mm × 4.6 mm, 5 μm) , 流動(dòng)相為 0.05 mol/L甲酸銨緩沖液(pH 4) - 乙腈( 體積比為41∶63) , 檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm, 流速10 ml/min。結(jié)果格列美脲的平均回收率為99.4% ( RSD = 1.0% , n =9) , 線性范圍為 0.1～0.6 mg/L(r=0.9991, n=6)。結(jié)論采用 HPLC方法測(cè)定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量, 方法簡(jiǎn)便、擁有較高準(zhǔn)確性、專屬性, 且在測(cè)定過(guò)程中測(cè)量結(jié)果并不會(huì)受到鹽酸二甲雙胍的干擾, 效果較好, 可以應(yīng)用到對(duì)該類復(fù)方制劑的質(zhì)量控制過(guò)程中。

格列美脲含量；二甲雙胍；高效液相色譜法

作為第3 代磺脲類口服降糖藥, 針對(duì)呈漸進(jìn)性發(fā)展的2型糖尿病的特點(diǎn), 起效迅速、長(zhǎng)效、高效、用量小、低血糖發(fā)生率低等是格列美脲所特有的優(yōu)點(diǎn)。為了可以有效控制患者血糖, 臨床上往往采用不同作用機(jī)制的藥物聯(lián)合療法對(duì)患者進(jìn)行針對(duì)治療［1］。二甲雙胍格列美脲膠囊往往會(huì)含有較高含量的鹽酸二甲雙胍, 而格列美脲含量則較小的特點(diǎn), 作者使用HPLC 法對(duì)膠囊中格列美脲含量進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)量。該方法靈敏、準(zhǔn)確且不復(fù)雜, 可以有效避免鹽酸二甲雙胍對(duì)格列美脲測(cè)定的干擾?，F(xiàn)將報(bào)告總結(jié)如下。

1 儀器與材料

SPD-20A 紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器、LC-20A 高效液相色譜儀、LCsolution 色譜工作站( 日本 Shimadzu公司) 。無(wú)水磷酸氫二鈉( 分析純, 天津瑞金特化學(xué)品有限公司) , 磷酸(分析純,沈陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)試劑廠), 十二烷基硫酸鈉(分析純, 天津博迪化工股份有限公司), 重蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制) , 二甲雙胍格列美脲膠囊( 實(shí)驗(yàn)室自制, 每片標(biāo)示量格列美脲 2.0 mg, 鹽酸二甲雙胍 500 mg), 格列美脲對(duì)照品( 批號(hào) 100674-201102,中國(guó)藥品生物制品檢定所) 、鹽酸二甲雙胍對(duì)照品( 批號(hào)100664-200602, 中國(guó)藥品生物制品檢定所) , 乙腈( 色譜純,天津康科德科技有限公司) 。

2 方法與結(jié)果

2. 1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱： Diamonsil C18(200 mm ×4.6 mm, 5 μm), 流動(dòng)相為0.05 mol/L甲酸銨緩沖液( pH 4)-乙腈(41：63), 檢測(cè)波長(zhǎng)228 nm, 保持25℃柱溫, 進(jìn)樣量25 μl。鹽酸二甲雙胍與格列美脲的分離度為 6.2, 保證兩者達(dá)到完全分離。

2. 2溶液的配制 取標(biāo)示量鹽酸二甲雙胍500 mg、格列美脲2 mg的二甲雙胍格列美脲膠囊10粒, 取出內(nèi)容物并研細(xì),精密稱定［2］。按照50∶50的體積比加乙腈-水共 90 ml, 置于 100 ml 量瓶中, 首先利用頻率 59 kHz, 功率250 W的超聲處理40 min 然后后冷卻至室溫, 若未至刻度線則繼續(xù)加乙腈-水(體積比50∶50) 稀釋至刻度, 并搖勻, 濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液1 ml, 置于50 ml量瓶中, 然后用體積比30：70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 作為供試溶液。

2. 3線性關(guān)系考察 精密稱取格列美脲10 mg , 置于100 ml量瓶中, 加適量甲醇, 溶解使用超聲處理, 待冷卻至室溫后加甲醇定容。精密量取 0.5、1.5、2.5、3.5、5. 0、10.0 ml, 分別置 50 ml 量瓶中, 用流動(dòng)相定容。記錄峰面積時(shí)分別精密量取 50 μl 上述系列溶液進(jìn)樣。以峰面積對(duì)濃度 ( μg/ml) 進(jìn)行線性回歸, 得回歸方程為: Y=161.32X -3.25(r=0.9999), 結(jié)果表明: 1.121～ 21.245 μg/ml格列美脲與峰面積的線性關(guān)系良好。

分別精密量取混合儲(chǔ)備液0.5、1.0、1.5、2. 0、2.5、3.0 ml,置 10 ml 量瓶中, 用體積比 30∶70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 配制成含格列美脲質(zhì)量濃度為 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L及鹽酸二甲雙胍質(zhì)量濃度為 25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按“2.1”條色譜條件測(cè)定, 記錄色譜圖。以樣品質(zhì)量濃度(ρ) 為橫坐標(biāo),以峰面積(A) 為縱坐標(biāo), 計(jì)算格列美脲和鹽酸二甲雙胍的線性回歸方程分別為 A =59.41ρ+ 0.5941(r=0.9993, n=6) 和A = 84.75ρ- 61.23(r=0.9997, n=6)。結(jié)果表明, 格列美脲和鹽酸二甲雙胍質(zhì)量濃度分別在 0.1～0.5 mg/L和 25.0 ～155.0 mg/L內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系［3］。

2. 5回收率試驗(yàn) 在分別取鹽酸二甲雙胍和格列美脲對(duì)照品適量后, 按處方比例加入空白輔料, 按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為80%、100%、120% 及供試品處方量中主藥成分含量配制成供試溶液, 每個(gè)質(zhì)量濃度配制 3 份, 結(jié)果均符合測(cè)定要求,結(jié)果見(jiàn)表 1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(mg, n =9)

3 討論

方制劑。鹽酸二甲雙胍可以降低血糖主要是通過(guò)降低肝糖輸出, 同時(shí)增加外周胰島素敏感性導(dǎo)致的［4］; 格列美脲則是通過(guò)增加體內(nèi)胰島素水平和敏感性進(jìn)而降低血糖。兩藥可以聯(lián)合應(yīng)用于單純飲食和鍛煉不能控制血糖的2 型糖尿病患者。

曾選擇甲醇和乙腈作為提取溶劑, 結(jié)果發(fā)現(xiàn): 對(duì)甲醇、甲酸銨、乙酸銨緩沖液和乙腈進(jìn)行流動(dòng)相組成及比例考察時(shí),發(fā)現(xiàn)作為流動(dòng)相, 甲酸銨緩沖液 -乙腈測(cè)定得到的格列美脲色譜峰的峰形最好, 同時(shí)鹽酸二甲雙胍對(duì)格列美脲干擾較小。并且乙腈在流動(dòng)相中的比例, 會(huì)影響格列美脲的出峰時(shí)間。當(dāng)甲酸銨緩沖液 - 乙腈體積比例為 41:63時(shí), 格列美脲在 8 min 出峰, 可以最大限度的分離鹽酸二甲雙胍與格列美脲［5］。用甲醇提取兩組分的色譜峰響應(yīng)值都較高, 同時(shí)在測(cè)定格列美脲含量的過(guò)程中可以通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成使鹽酸二甲雙胍不干擾測(cè)定。選定適當(dāng)?shù)纳V條件, 可以將鹽酸二甲雙胍和格列美脲較好地分離并且出現(xiàn)較為滿意的峰形。HPLC方法可以有效、簡(jiǎn)便的測(cè)定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。

［1］ 劉偉, 嚴(yán)潔.地特胰島素聯(lián)合格列美脲治療老年 2 型糖尿病療效觀察.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2012, 21(10):1065-1066.

［2］ 王秀榮. 瑞格列奈聯(lián)合甘精胰島素治療老年 2 型糖尿病及其安全性分析.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 30(7):1707-1708.

［3］ 童向前.地特胰島素聯(lián)合格列美脲片治療老年 2 型糖尿病的有效性及安全性.中外醫(yī)療-藥物與臨床, 2012, 10(26):99-100.

［4］ 曲 穎, 張純利, 胡文娟, 等.西格列汀、羅格列酮分別聯(lián)合二甲雙胍治療老年 2 型糖尿病的療效觀察.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2013, 13(21):4077-4080.

［5］ 劉慶豐, 李中東, 施孝金, 等.二甲雙胍格列本脲片中兩種成分的離子對(duì)HPLC法測(cè)定.藥學(xué)服務(wù)與研究 , 2009, 09(01)：44-47.

510000 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(譚漢添)；廣州中醫(yī)藥大學(xué)青蒿研究中心(詹利之)