240例耳聾患者常見耳聾基因篩查分析

曲長紅，張 寧，曹東華，郝冬梅

解放軍第202醫(yī)院 優(yōu)生優(yōu)育計劃生育研究所，遼寧沈陽 110003

240例耳聾患者常見耳聾基因篩查分析

曲長紅，張 寧，曹東華，郝冬梅

解放軍第202醫(yī)院 優(yōu)生優(yōu)育計劃生育研究所，遼寧沈陽 110003

目的 分析非綜合征型耳聾患者常見耳聾基因突變情況，探討遺傳性耳聾基因芯片檢測的臨床意義。方法 2013年3 - 8月來自沈陽市和平區(qū)殘聯(lián)的非綜合征型耳聾患者240例，患者或監(jiān)護人簽署知情同意后提取被檢者外周靜脈血基因組DNA，采用晶芯?遺傳性耳聾基因檢測試劑盒對常見的4個耳聾基因(GJB2、GJB3、SLC26A4以及線粒體12S rRNA)的9個突變位點進行檢測。結果 240例受檢者中，102例存在被檢測基因突變，其中GJB2基因突變44例(18.33%，44/240)，SLC26A4基因突變38例(15.83%，38/240)，線粒體12S rRNA基因突變17例(7.08%，17/240)，GJB3 538 C＞T 1例(0.39%，1/240)。明確診斷為遺傳性耳聾60例，提示遺傳性耳聾42例，占全部耳聾患者的42.5%(102/240)。結論 非綜合征型耳聾患者耳聾基因攜帶率較高，對高危人群進行耳聾基因突變的篩查和遺傳咨詢是防止和控制遺傳性耳聾、優(yōu)生優(yōu)育的重要步驟。

遺傳性耳聾；基因芯片；耳聾基因

新生兒耳聾的發(fā)病率為0.1% ～ 0.3%，一半以上的先天性耳聾是由于遺傳因素造成的。遺傳性耳聾按表型特征不同分為綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾。綜合征型耳聾除聽力損傷外還伴有耳外組織的異常或病變，約占30%；非綜合征型耳聾只有聽力損害，不伴有耳外組織的異常和病變，約占70%[1]。隨著耳聾基因研究的深入，耳聾基因檢測已成為防控遺傳性耳聾的重要舉措[2-4]。國內分子流行病學研究表明，我國大部分遺傳性耳聾主要由為數(shù)不多的幾個基因突變引起，如GJB2、GJB3、SLC26A4以及線粒體12S rRNA等[5-6]。為此，本研究應用北京博奧生物有限公司的晶芯?九項遺傳性耳聾基因芯片檢測試劑盒，檢測了沈陽市和平區(qū)240例非綜合征型耳聾患者，探討常見遺傳性耳聾基因檢測的臨床應用價值。

對象和方法

1 研究對象 2013年3 - 8月來自沈陽市和平區(qū)殘聯(lián)的耳聾患者240例，其中男117例，女123例，年齡5 ～ 59歲。經患者或監(jiān)護人知情同意后，收集病史資料，包括患者的一般信息、出生史、耳聾發(fā)病年齡、家族史、個人史（耳聾性藥物應用史、頭部外傷史等）及母孕期情況等，排除綜合征型耳聾。

2 DNA提取 采集受檢者外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝的真空采血管中，應用天根公司全血核酸提取試劑盒提取基因組DNA，并檢測濃度和純度。3 耳聾基因篩查 PCR擴增、芯片雜交、芯片洗滌與甩干、芯片掃描與判讀，應用博奧生物有限公司提供的晶芯?遺傳性耳聾基因檢測試劑盒(微陣列芯片法)，具體步驟參照說明書。

結 果

1 常見耳聾基因突變情況 240例受檢者中，102例存在被檢測基因突變。同時攜帶兩個突變基因的2例，其中1例同時檢出GJB3 538C＞T雜合突變和SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變；另1例同時檢出GJB2 235del C雜合突變和SLC26A4 2168 A＞G雜合突變。見表1。

2 受檢者耳聾病因分析 240例中，明確診斷為遺傳性耳聾60例，提示遺傳性耳聾42例，原因不明耳聾138例。60例明確遺傳性耳聾患者中，GJB2基因突變27例，其中純合突變型12例，復合雜合突變型15例； SLC26A4基因突變16例，其中純合突變型13例，復合雜合突變型3例；線粒體12S rRNA均質突變型17例。42例提示遺傳性耳聾患者中，GJB2基因單雜合突變17例，SLC26A4基因單雜合突變22例，GJB3基因單雜合突變1例，無線粒體12S rRNA基因異質突變型，2例存在兩個基因的單雜合突變。102例耳聾患者攜帶遺傳性耳聾致病基因(102/240，42.5%)，138例未提供致病基因信息(138/240，57.5%)。見表2。

討 論

耳聾是臨床上常見的遺傳性疾病，嚴重影響人類的生活質量。由遺傳因素導致的耳聾約占60%[7-8]。遺傳性耳聾臨床上根據(jù)不同表現(xiàn)分為綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾。非綜合征型耳聾是以聽力損失為唯一癥狀的遺傳性疾病。耳聾具有很強的遺傳異質性，其遺傳學基礎比較復雜。根據(jù)遺傳方式不同，遺傳性耳聾可分為常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳及線粒體遺傳。遺傳性耳聾的致病基因及同一基因的突變位點在不同種族、不同地區(qū)的人群中不全相同。GJB2、SLC26A4及線粒體12SrRNA基因是導致中國大部分遺傳性耳聾發(fā)生的最常見的3個基因，其中GJB2、SLC26A4屬常染色體隱性遺傳，線粒體12S rRNA屬母系遺傳[9-10]。

我國流行病學調查顯示，21%的耳聾患者攜帶GJB2基因突變，18.5%的患者攜帶SLC26A4基因突變，3.8%和0.6%的患者分別攜帶線粒體12SrRNA 1555 A＞G和線粒體12SrRNA 1494 C＞T突變，提示GJB2、SLC26A4、線粒體基因是導致中國人大部分遺傳性耳聾發(fā)生的3個基因[11]。本研究中檢出攜帶有遺傳性耳聾相關突變基因的患者102例(42.5%，102/240)，其中45例GJB2基因突變(18.75%，45/240)，GJB2 235del C占該基因全部突變檢出位點的88.89%(40/45)，是沈陽市和平區(qū)最常見的耳聾基因突變位點。其次，檢出39例SLC26A4突變(16.25%，39/240)，其中IVS7-2 A＞G占該基因全部突變的87.18(34/39)，在SLC26A4基因突變中最常見。攜帶線粒體12SrRNA突變基因檢出率7.08%(17/240)，通過對所有母系成員進行用藥宣教，終生禁用氨基糖苷類抗生素，可有效避免藥物性耳聾的發(fā)生。

表1 受檢者中基因序列改變方式及例數(shù)Tab. 1 Deafness gene mutations of patients included in this study (n)

表2 受檢者耳聾病因分析Tab. 2 Characteristics of deaf patients included in this study (n)

本文檢測的240例耳聾患者中，60例證實為遺傳性耳聾，占耳聾患者的25%(60/240)，其中27例為GJB2基因突變，16例為SLC26A4基因突變，17例為線粒體12S rRNA均質突變。另外，有42例為雜合突變，占耳聾患者的17.5%(42/240)，其中GJB2基因17例，SLC26A4基因22例，GJB3基因1例，2例存在兩個基因的單雜合突變。我們將對相應基因進行全基因測序，提示可能存在其他突變位點。應用遺傳性耳聾基因芯片檢測試劑盒，我們篩出102例遺傳性耳聾患者，占耳聾患者的42.5%(102/240)，我們將對這些患者進行優(yōu)生優(yōu)育指導，結合產前診斷技術有效預防下一代耳聾患者的出生。

綜上所述，通過對沈陽市和平區(qū)240例非綜合征型耳聾患者進行常見4個耳聾相關基因的9個致病突變位點檢測，了解到沈陽市和平區(qū)非綜合征型耳聾基因突變攜帶率較高，GJB2基因突變中235del C最為常見，IVS7-2 A＞G在SLC26A4基因突變中最為常見，與國內文獻報道基本相符[12-16]。對該地區(qū)耳聾患者及高危人群進行耳聾基因突變的篩查是防止和控制該地區(qū)遺傳性耳聾的重要步驟，建議遺傳性耳聾基因檢測試劑盒在臨床推廣應用。

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聲 明

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《解放軍醫(yī)學院學報》 編輯部

Analysis of common deafness genes screening in 240 deaf patients

QU Chang-hong, ZHANG Ning, CAO Dong-hua, HAO Dong-mei
Institute of Obstetrics and Gynecology, Chinese PLA 202 Hospital, Shenyang 110003, Liaoning Province, China

HAO Dong-mei. Email: bennyhg@aliyun.com

Objective To investigate the incidence of common deafness gene mutations in patients with non-syndromic deafness. Methods The genomic DNA of 240 deafness patients were extracted from their peripheral blood. The hot-spot deafness gene mutations, including GJB2, GJB3, SLC26A4 and mitochondrial 12S rRNA genes, were detected using a nine deafness gene mutations detection kit. Results Various types of gene locus mutations were detected in 102 of the 240 patients, including 44 GJB2 gene mutations (18.33%, 44/240), 38 SLC26A4 gene mutations (15.83%, 38/240), 17 mitochondrial 12S rRNA gene mutations (7.08%, 17/240). The diagnosis results suggested that 60 cases were sure to be hereditary hearing loss and 42 cases were suspected hereditary hearing loss, which accounted for 42.5% (102/240) of the total. Conclusion Non-syndromic deafness patients have a high ratio of carrying deafness gene, and molecular genetic screening for these hot-spot mutations is a pivotal step for the prevention and control of genetic deafness.

hereditary deafness; gene chip; deafness gene

R 714.55

A

2095-5227(2014)10-1019-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.10.012

時間：2014-07-15 09:56

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140715.0956.005.html

2014-05-11

曲長紅，女，在讀碩士。研究方向：優(yōu)生優(yōu)育。Email: quchanghong2014@163.com

郝冬梅，女，博士，副主任醫(yī)師。Email: bennyhg@aliyun. com