高效液相色譜(HPLC)法測定硝酸芬替康唑陰道乳膏的含量

王華香，林愛和，黃柳，馬明軒

（海南海力制藥有限公司，海南海口570310

高效液相色譜(HPLC)法測定硝酸芬替康唑陰道乳膏的含量

王華香，林愛和，黃柳，馬明軒

為建立高效液相色譜（HPLC）法測定硝酸芬替康唑陰道乳膏含量的方法，采用流動相為磷酸鹽緩沖液（pH為6.5）體系，檢測波長229 nm,柱溫40℃，流速1.0 mL/min，理論板數(shù)按硝酸芬替康唑峰計算不低于2000，進樣量為10 μL，結果發(fā)現(xiàn)，硝酸芬替康唑進樣量在0.1~0.5 mg/mL范圍內呈線性關系，平均回收率為99.58%（RSD=0.29%,n=9），最低檢測限0.1 μg（S/N=3）.該法準確，可靠，重復性好，可作為控制硝酸芬替康唑陰道乳膏質量的測定方法.

HPLC法；硝酸芬替康唑；含量測定；陰道乳膏

硝酸芬替康唑（fenticonazole nitrate）化學名為1-[2-（2,4-二氯苯基）-2-[[（4-苯基硫苯基）-甲氧基]乙基]-咪唑硝酸鹽，分子式C24H21CL2N3O4S，屬咪唑類抗真菌藥物，由意大利Recordati公司研制開發(fā)[1]，主要用于皮膚真菌病、體癬以及皮真菌、酵母菌和其它真菌引起的感染[2].硝酸芬替康唑在國外注冊商品名為Lomexin，于1987年首次在意大利上市，爾后在英國、德國、澳大利亞、法國、韓國等國上市，劑型有陰道乳膏，溶液劑，氣霧劑及軟膠囊等.硝酸芬替康唑抗菌譜廣，在低濃度時有抑菌作用，高濃度時有殺菌作用.

硝酸芬替康唑目前尚未收載于中國藥典中，其相應制劑陰道乳膏中的含量測定方法也未見用高效液相色譜（HPLC）法，本文旨在建立陰道乳膏中的硝酸芬替康唑含量的高效液相色譜測定方法，為陰道乳膏中的硝酸芬替康唑含量質量控制提供科學依據(jù).

1 儀器與藥劑

SPD-20A高效液相色譜儀（日本島津），Lcsolu?tion液相色譜工作站.乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為國產(chǎn)分析分析純.硝酸芬替康唑對照品（批號：1.1，規(guī)格：50mg，含量為100%，Europe Phar?macopoeia Reference Standard提供）；硝酸芬替康唑陰道乳膏（本公司自制，批號：130601，130602，130603）.

2 方法與結果

2.1 色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4 g，加水溶解，并稀釋至1000 mL）-三乙胺（62∶38∶1），用磷酸調pH 6.5；檢測波長為229 nm，柱溫為40℃，流速：1.0 mL/min，進樣量為10 μL.在上述色譜條件下，硝酸芬替康唑主峰的保留時間為22.815 min，分離度大于1.5，理論板數(shù)按硝酸芬替康唑計算，不低于2000.

2.2 對照液的配置

精密稱取硝酸芬替康唑對照品30 mg，置100 mL容量瓶中，加流動相適量使之溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照液.

2.3 供試液的制備

精密稱取陰道乳膏適量（約相當于硝酸芬替康唑30 mg）置100 mL容量瓶中，加適量流動相超聲使之溶解，放冷至室溫，加流動相稀釋到刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供溶液.

2.4 樣品測定

采用229 nm作為檢測波長，以乙腈-磷酸鹽緩沖液－三乙胺（pH 6.5）為流動相，分別精密量取三個批號的供試液和對照液各10 μL，分別注入液相色譜儀中，按外標法以峰面積計算硝酸芬替康唑含量，結果130601，130602，130603批次硝酸芬替康唑陰道乳膏的含量分別為99.95%，99.70%和100.09%.

3 方法學考察

3.1 干擾試驗[4]

配制硝酸芬替康唑陰道乳膏中的空白輔料液，對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，實驗表明，供試品色譜與對照品色譜的相應位置上，顯相同的色譜峰；空白輔料溶液在相應的位置上無干擾色譜峰，說明輔料對測定結果無干擾.實驗結果見圖1.

圖1 高效液相色譜圖Fig.1HPLC spectrums

3.2 線性關系考察

精密稱取硝酸芬替康唑對照品適量，加流動相溶解制成1 mg/mL對照品儲備液；分別精密量取對照品儲備液適量，加流動相稀釋制成濃度為0.1，0.24，0.30，0.36，0.5 mg/mL的系列對照品溶液.精密量取系列對照品溶液各10 μL注入液相色譜儀，照2.1項色譜條件，以濃度（mg/mL）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸（見圖2）.結果表明硝酸芬替康唑溶液在0.1~0.5 mg/mL的濃度范圍內，其濃度與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程：y=2.95× 107X+2.44×105，r2=1.00.

圖2 硝酸芬替康唑線性Fig.2Fenticonazole nitrate linearity

3.3 最低檢測限度

精密稱取硝酸芬替康唑對照品適量，加流動相溶解并逐步稀釋制成一定濃度的溶液，搖勻；精密量取此溶液10 μL注入液相色譜儀，照上述色譜條件分析，信噪比約為3∶1時，計算硝酸芬替康唑的最低檢測限.求得硝酸芬替康唑的最低最低檢測限為0.1 μg/mL.

3.4 重復性試驗

稱取130601批硝酸芬替康唑陰道乳膏樣品6份適量（約相當于硝酸芬替康唑30 mg）置100 mL容量瓶中，分別加流動相超聲溶解并稀釋到刻度搖勻，濾過作為供試液，精密量取對照液與供試液各10 μL注入液相色譜儀，在2.1項色譜條件，按外標法以峰面積計算，平均含量為99.85%，RSD為0.62%，結果表明該方法重復性良好.

3.5 回收率試驗

按供試液濃度的80%，100%，120%，精密稱取硝酸芬替康唑對照品各三份適量，分別置100 mL量瓶中，再分別加入相當于硝酸芬替康唑陰道乳膏處方量的輔料，加流動相適量溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液分別作為供試，各精密量取對照液，供試液10uL注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積計算回收率（%）和RSD值，結果見表1.

表1 回收率測定結果Tab.1Determination result of refine rate

3.6 溶液穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液置于室溫保存，分別在0，2，4，6，8 h時精密量取供試液10 μL注入液相色譜儀進行分析，記錄色譜峰面積，計算RSD.結果表明硝酸芬替康唑陰道乳膏供試液在室溫保存8 h穩(wěn)定，測定結果的RSD為0.51%.

3.7 檢測波長的選擇

取硝酸芬替康唑對照品適量，加入乙醇溶解，并稀釋至每1 mL含硝酸芬替康唑0.02 mg，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄IV A）測定，在200~800 nm波長范圍內進行掃描.結果顯示，硝酸芬替康唑在229 nm處均有最大吸收，故在本實驗中采用229 nm作為檢測波長.

3.8 流動相的選擇

硝酸芬替康唑原料《英國藥典》（BP2013）標準流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4 g，加水溶解并稀釋至900 mL，用磷酸調節(jié)pH值為3.0，再加水稀釋至1000 mL）（70∶30）.

精密稱取原料適量置100 mL量瓶中，加流動相溶解，并稀釋制成每1 mL含硝酸芬替康唑1mg，搖勻作為供試液；精密量取供試液10 μL，分別在以上述流動相系統(tǒng)下進樣.記錄色譜圖，并分別對主峰的保留時間，面積百分比[A（%）]，理論板數(shù)，拖尾因子，分離度，峰形進行考察.根據(jù)試驗結果，分離度不理想，故對《英國藥典》（BP2013）標準流動相進行配比及pH值調整，使其達到較好的分離效果.經(jīng)試驗確定流動相調整為：乙腈-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4 g，加水溶解，加水稀釋至1000 mL）－三乙胺（62∶38∶1）,用磷酸調pH 6.5.

4 結論

實驗表明，本實驗建立的硝酸芬替康唑陰道乳膏的含量測定方法專屬性好，結果準確，操作簡便，快速，為本品乳膏制劑的質量控制提供了一種可靠的方法.

[1]崔家華,鄒巧根,馮振斌,等.RP-HPLC法測定硝酸芬替康唑含量及有關物質[J].藥學進展,2010,34(4):174-176.

[2]胡漢昆,顏鏘,劉萍,等.抗真菌藥硝酸芬替康哇研究概述[J].中國藥師,2010,1(11):1663-1664.

[3]胡漢昆,顏鏘.硝酸芬替康唑陰道泡騰片的制備與質量控制[J].中國藥房,2010,21(33):3118-3120.

[4]鄒巧根,崔家華,馮振斌,等.手性高效液相色譜法拆分硝酸芬替康唑對映異構體[J].中國藥科大學學報,2011,42(6): 534-537.

[5]麻靜,陳寶泉,盧學磊,等.抗真菌藥硝酸芬替康唑合成工藝改進[J].天津理工大學學報,2010,26(5):50-52.

[6]王海梅,邵卿,梅勝堯,等.硝酸芬替康唑凝膠陰道刺激性研究[J].中外醫(yī)療,2014(15):61-62.

[7]陳寶泉,雷英杰,李彩文,等.相轉移催化法合成硝酸芬替康唑[J].中國藥物化學雜志,2007,17(1):52-53.

責任編輯：畢和平

Determination of Fenticonazole Nitrate Vaginal Cream by HPLC

WANG Huaxiang，LIN Aihe，HUANG Liu，MA Mingxuan
（Hainan HaiLi Pharmaceutical Co.，Ltd，Haikou 570310，China）

A method for the determination of fenticonazole nitrate vaginal cream was established by HPLC.Taking phos?phate buffer solution（pH=6.5）as the mobile phase,the detection wavelength was 229 nm,the column temperature was 40℃,the flow rate was 1.0 ml/min,the number of theoretical plates by Fenticonazole Nitrate should not be less than 2000, the injection volume was 10 μL,and the results showed that the linear range of fenticonazole nitrate was 0.1-0.5 mg/ml（r2= 1.00,n=5）,the mean refine rate of fenticonazole nitrate was 99.58%（RSD=0.29%,n=9）and the detection limitation was 0.1μg（S/N=3）.This experimental method is accurate,reliable,as well as stable and reproducible,which can be used for de?termination of fenticonazole nitratevaginal cream.

HPLC；fenticonazole nitrate；content determination；Vaginal Cream

R 978.5

A

1674-4942（2014）04-0407-03

2014-09-07