• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    五味子藥渣發(fā)酵菌質(zhì)對(duì)仔豬血液生理指標(biāo)和免疫功能的影響

    2014-07-02 01:25:48羅杰賀曉玉黃朝翔牟超李英倫
    關(guān)鍵詞:藥渣蟲草五味子

    羅杰,賀曉玉,黃朝翔,牟超,李英倫

    (四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,四川 雅安 625014)

    五味子藥渣發(fā)酵菌質(zhì)對(duì)仔豬血液生理指標(biāo)和免疫功能的影響

    羅杰,賀曉玉,黃朝翔,牟超,李英倫*

    (四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,四川 雅安 625014)

    選擇28日齡“杜×長×大”斷奶仔豬90頭,隨機(jī)分為3組:對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧;低劑量組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.1%蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì);高劑量組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.2%蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)。每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)10頭。飼喂14 d后,從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1頭仔豬,前腔靜脈采血,測定血液生理成分,外周血淋巴細(xì)胞亞群和增殖活性,以及血清中白細(xì)胞介素–2(IL–2)和γ–干擾素(IFN–γ)的含量。結(jié)果:與對(duì)照組相比,低劑量組和高劑量組仔豬的白細(xì)胞(WBC)、淋巴細(xì)胞(LYM)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板(PLT)、平均血小板體積(MPV)和血小板分布寬度(PDWcv)均無顯著性差異(P<0.05);高劑量組紅細(xì)胞(RBC)和血紅蛋白(HGB)含量顯著增加(P<0.05);低劑量和高劑量組CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞比值、淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)均極顯著增加(P<0.01);高劑量組血清IFN–γ含量顯著提高(P<0.05 或 P<0.01),各組豬的血清IL–2含量的差異均不顯著(P>0.05)。以上結(jié)果表明,五味子藥渣發(fā)酵菌質(zhì)能優(yōu)化仔豬血液的生理指標(biāo),提高仔豬的免疫功能。

    仔豬;五味子藥渣;發(fā)酵;蛹蟲草菌;血液指標(biāo);免疫活性

    Key words:weaned piglets; residue of Schisandra chinensis extract; fermentation; Cordyceps militaris; hematologic parameters

    隨著中國中醫(yī)藥事業(yè)的蓬勃發(fā)展,提取中藥后產(chǎn)生的藥渣越來越多。據(jù)統(tǒng)計(jì),中國每年的藥渣排放量已超過3 000萬噸[1]。制備生脈注射液過程中產(chǎn)生的五味子藥渣就是其中之一。這些藥渣或被廢棄,造成環(huán)境污染和中藥資源浪費(fèi);或經(jīng)粗加工后添加于動(dòng)物日糧中。但由于可利用活性物質(zhì)少、制備工藝粗糙,導(dǎo)致生物學(xué)效應(yīng)較低。中藥渣經(jīng)有益微生物發(fā)酵和受微生物酶的影響,其自身成分得到改變,產(chǎn)生新的有效物質(zhì)和性味功能,從而提高藥效和擴(kuò)大適應(yīng)癥[2–3]。已有研究表明,川芎辛夷湯藥渣[4]、木薯渣[5]和海帶廢渣[6]的發(fā)酵物具有增強(qiáng)免疫、促生長和抗氧化等功效。近年來,蛹蟲草菌(Cordyceps militaris)發(fā)酵工藝日趨成熟,發(fā)酵產(chǎn)物具有廣泛的藥理活性,但未見蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣的相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)以斷奶仔豬為試驗(yàn)對(duì)象,在日糧中添加不同水平的蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì),研究其對(duì)仔豬血液生理指標(biāo)和免疫功能的影響,旨在為發(fā)酵菌質(zhì)的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    1.1.1 供試動(dòng)物及飼糧

    選擇胎次一致、品種相同的“杜×長×大”28日齡斷奶仔豬90頭,平均體重(7.4±0.3) kg?;A(chǔ)飼糧參照美國NRC (1998)[7]豬的營養(yǎng)需要設(shè)計(jì),配制成全價(jià)粉狀料,其組成見表 1。營養(yǎng)水平包括消化能(14.48 MJ/kg)、粗蛋白質(zhì)(20.50%)、鈣(0.85%)、總磷(0.67%)、賴氨酸(0.55%)、蛋氨酸(1.55%)、色氨酸(0.27%)、蘇氨酸(1.01%)。

    表1 基礎(chǔ)飼糧組成(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Constituent of the base diet (dry level) %

    1.1.2 菌種與藥渣

    蛹蟲草菌購自中國科學(xué)院微生物研究所;五味子藥渣為生脈注射液中北五味子提取后殘?jiān)?雅安三九藥業(yè)惠贈(zèng))。

    1.1.3 儀器與試劑

    KDC–2046低速冷凍離心機(jī)(中佳公司);Thermo Forma 311 型CO2培養(yǎng)箱(Thermo Labsystems公司);Bio–rad 680酶聯(lián)免疫檢測儀(Bio–Rad公司);ECLIPSE TS100–F 型倒置顯微鏡(Nikon 公司);BD FACSCalibur 1010流式細(xì)胞儀(BD公司)。

    刀豆蛋白 A(ConA)購自 Signa公司;Cell counting kit–8試劑購自日本同仁化學(xué)研究所;胎牛血清購自 Gibco公司;RPMI–1640培養(yǎng)液購自Hyclone公司;其他試劑為國產(chǎn),分析純。

    1.2 方 法

    1.2.1 蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)的制備

    將蛹蟲草菌接種于土豆培養(yǎng)基(馬鈴薯 200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1 L)上復(fù)壯6 d;在裝有200 mL菌種營養(yǎng)液(葡萄糖20 g,酵母膏5 g,蛋白胨5 g,磷酸二氫鉀2 g,硫酸鎂l g,維生素B150 mg,水1 L)的500 mL三角瓶中無菌接入2個(gè)蛹蟲草菌斜面菌塊,120 r/min搖床培養(yǎng)6 d,形成均勻菌球;將五味子藥渣與水以1∶1.5的質(zhì)量比混合,在發(fā)酵瓶中攪拌均勻,經(jīng)121 ℃滅菌30 min后降至室溫,按干藥渣的15%無菌接入菌種,靜置于生化培養(yǎng)箱中22 ℃發(fā)酵15 d。發(fā)酵結(jié)束后將菌質(zhì)在40~50 ℃烘箱中干燥,粉碎過250 μm孔徑篩。

    1.2.2 試驗(yàn)分組與飼養(yǎng)管理

    將90頭試驗(yàn)豬隨機(jī)分為3組:對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧;低劑量組在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì);高劑量組在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)進(jìn)行飼喂。每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)10頭豬,分圈飼養(yǎng)。按豬場常規(guī)飼養(yǎng)管理程序飼養(yǎng)。預(yù)試期3 d,正試期14 d。飼喂方法采用群飼,每日均定時(shí)(7∶30、12∶00、17∶00)喂料3次,自由飲水,保持圈內(nèi)清潔。

    1.2.3 血液的采集

    于試驗(yàn)14 d時(shí),早上喂料前從每個(gè)重復(fù)中選1頭仔豬,前腔靜脈采血10 mL,注入EDTA–Na抗凝管中,即為抗凝血;采血2 mL不加抗凝分離血清,–20 ℃冷凍保存,備用。

    1.2.4 仔豬血液指標(biāo)的測定

    采用SysncxK–1000 血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀測定白細(xì)胞(WBC)、淋巴細(xì)胞(LYM)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板(PLT)、平均血小板體積(MPV)和血小板分布寬度(PDWcv)。

    1.2.5 仔豬外周血淋巴細(xì)胞亞群分類的測定

    取2 mL抗凝血加入2 mL淋巴細(xì)胞分離液,800×g 離心 20 min,小心收集中間層淋巴細(xì)胞,RPMI–1640液調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×106個(gè)/mL,從中取200 μL,以小鼠抗豬 CD3、CD4、CD8單克隆抗體(BIOTECT公司)染色后,以流式細(xì)胞儀檢測CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞占外周血淋巴細(xì)胞的百分比,并計(jì)算 CD3+CD4+T細(xì)胞與CD3+CD8+T細(xì)胞的比值。

    1.2.6 仔豬外周血淋巴細(xì)胞增殖功能測定

    按1.2.5的方法獲取淋巴細(xì)胞,最后以RPMI–1640培養(yǎng)液(青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL,小牛血清10%),將細(xì)胞稀釋成2.5×106個(gè)/mL,制成單細(xì)胞懸液(臺(tái)盼藍(lán)檢測細(xì)胞存活率大于 95%)。取單細(xì)胞懸液90 μL加入96孔板中,每個(gè)樣品重復(fù)3 次,并加入50 μg/mL的Con A溶液10 μL,同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組(不加Con A);置37 ℃,5% CO2箱中培養(yǎng)44 h后加入10 μL CCK–8溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,在Bio–Rad 酶聯(lián)免疫檢測儀上以A630 nm為參比波長,測定樣品的吸光值(A450 nm),并計(jì)算增殖指數(shù)SI (stimulation index,SI)。SI=試驗(yàn)孔A均值/對(duì)照孔A均值。

    1.2.7 仔豬血清IL–2、IFN–γ的測定

    用IL–2、IFN–γ檢測試劑盒(武漢基因美公司)測定血清中IL–2、IFN–γ的含量。

    1.2.8 數(shù)據(jù)處理

    采用 SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,并用方差分析(one–way ANOVA)法進(jìn)行多組間顯著性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)對(duì)仔豬血液生理指標(biāo)的影響

    由表2可知,斷奶仔豬添加蛹蟲草發(fā)酵五味子藥渣后,低劑量組WBC、LYM、RBC、HGB、HGB、MCHC、PLT、MPV、PDWcv與對(duì)照組的差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高劑量組RBC、HGB均顯著高于對(duì)照組(P<0.05);WBC、LYM、HCHC、PLT、MPV高于對(duì)照組,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PDWcv值低于空白對(duì)照組,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表2 斷奶仔豬血液生理指標(biāo)測定結(jié)果Table 2 Test results for blood physiological index of weaned pigs

    2.2 蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)對(duì)仔豬外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

    斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞流式檢測結(jié)果見表3。與對(duì)照相比,在日糧中添加蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣對(duì)仔豬外周血淋巴細(xì)胞亞群有正面影響。低劑量組 CD3+T細(xì)胞百分率與對(duì)照組的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞的百分率均低于對(duì)照組(P<0.01),CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的比值高于對(duì)照組(P<0.01);高劑量組CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4+T細(xì)胞的百分率高于對(duì)照組,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CD3+CD8+T細(xì)胞的百分率低于對(duì)照組(P<0.01),CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞的比值高于對(duì)照組(P<0.01)。

    表3 斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞的流式檢測結(jié)果Table 3 Results of flow cytometry for lymphocytes in peripheral blood of weaned pigs

    2.3 蛹蟲草菌發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)對(duì)仔豬外周血T淋巴細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞因子的影響

    從表4可看出,蛹蟲草發(fā)酵五味子藥渣菌質(zhì)組能提高仔豬血液T淋巴細(xì)胞增殖指數(shù),低劑量組和高劑量組增值指數(shù)比對(duì)照組分別提高 5.36% (P<0.01)和 21.43%(P<0.01)。與對(duì)照組相比,低劑量組和高劑量組能提高仔豬血清 IL–2的含量,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對(duì)照組相比,低劑量組和高劑量組血清INF–γ的含量增加,分別提高3.93%(P<0.05)和5.71%(P<0.01)。可見,血清細(xì)胞因子的分泌量與淋巴細(xì)胞活性呈正相關(guān)。

    表4 斷奶仔豬外周血T淋巴細(xì)胞增值指數(shù)和IL–2、IFN–γ含量Table 4 T lymphocyte amplification index and contents of IL–2 and IFN–γ in blood of weaned pigs

    3 討 論

    在生脈注射液制備過程中,主要提取了五味子脂溶性的萜類、揮發(fā)油、五味子素,以及水溶性的多糖、有機(jī)酸和維生素等。在提取后的五味子藥渣中,有些殘留物質(zhì)仍具有良好的生物活性。微生物發(fā)酵藥渣有著獨(dú)特的生物轉(zhuǎn)化機(jī)制[2,8],蛹蟲草菌可利用五味子藥渣中的纖維、糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分進(jìn)行生長,并破壞細(xì)胞壁使五味子木脂素等殘留的有效成分溶出和富集;在生長過程中產(chǎn)生初生或次生代謝產(chǎn)物,并有可能與五味子藥渣中的一些物質(zhì)發(fā)生反應(yīng),或直接對(duì)五味子藥渣中的某些成分進(jìn)行轉(zhuǎn)化而形成新的化合物等。秦嶺等[9]以生脈飲藥渣為原料,多菌種混合發(fā)酵后產(chǎn)物蛋白增加86.96%,粗纖維降低20.09%。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加 0.2%的五味子藥渣發(fā)酵菌質(zhì),能提高仔豬血液中RBC、HGB、WBC、LYM、 HCHC、PLT和MPV,提示發(fā)酵菌質(zhì)有可能改善免疫應(yīng)激下紅細(xì)胞向機(jī)體運(yùn)送氧氣的能力。試驗(yàn)結(jié)果還表明,飼喂五味子藥渣發(fā)酵菌質(zhì)的仔豬的外周血CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值提高,ConA介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖能力加強(qiáng),且血清中IL–2、IFN–γ含量增加,這與血液常規(guī)生理指標(biāo)顯示免疫增強(qiáng)的結(jié)果相同。本試驗(yàn)結(jié)果不同于張瑞等[10]報(bào)道的五味子殘?jiān)鼘?duì)白羽野鴨生產(chǎn)性能和免疫功能無顯著影響的結(jié)論,這可能是由于五味子藥渣經(jīng)過蛹蟲草菌發(fā)酵后的菌質(zhì)生物活性比原藥渣顯著提高所致。

    [1] 譚顯東,王向東,黃健盛,等. 中藥渣資源化技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中成藥,2010,32(5):847–849.

    [2] 王延年,董雪,喬延江,等. 中藥發(fā)酵研究進(jìn)展[J]. 世界科學(xué)技術(shù)–中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2010,12(3):437–441.

    [3] 莊毅,洪凈. 藥用真菌雙向性固體發(fā)酵工程與中成藥藥渣再開發(fā)[J]. 中國中藥雜志,2006,31(22):1918–1919. [4] 張振宇,田雪梅,宋愛榮. 六種食用菌中藥渣固體發(fā)酵及其粗多糖對(duì) NK 細(xì)胞活性的影響[J]. 食用菌學(xué)報(bào),2010,17(3):46–50.

    [5] 于向春,劉易均,楊志斌,等. 發(fā)酵木薯渣粉在文昌雞日糧中的應(yīng)用[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2011,27(1):394–397. [6] 張炳照,閆培生. 海帶廢渣真姬菇發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化活性研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2013,15(3):157–162.

    [7] NRC.Nutrient requirements of swine[M]. 10thedn. Washington D C:National Academy Press,1998.

    [8] 張李陽,周業(yè)飛,虞蔚巖,等. 藥用真菌發(fā)酵產(chǎn)物調(diào)控肉雞內(nèi)分泌及免疫力的研究[J]. 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版,2005,26(4):16–38.

    [9] 秦嶺,王向東,潘朝智,等. 多菌種混合發(fā)酵生脈飲藥渣生產(chǎn)蛋白飼料工藝條件優(yōu)化[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2008,27(4):122–128.

    [10] 張瑞,趙景輝,王英平,等. 人參,黃芪(殘?jiān)?,五味子(殘?jiān)? 等對(duì)白羽野鴨生產(chǎn)性能和免疫性能的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2011(3):48–51.

    責(zé)任編輯:羅 維

    英文編輯:羅 維

    Effect of fermented Schisandra chinensis residue on blood physiology parameters and immunomodulation of weaned piglets

    LUO Jie, HE Xiao-yu, HUANG Chao-xiang, MOU Chao, LI Ying-lun*
    (College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Ya’an, Sichuan 625014, China)

    Ninety crossbred weaned piglets “Duroc × Landrace × Yorkshire” aged 28 days were randomly allocated into 3 groups (3 replicates for each group and 10 pigs for each replicate). Pigs in the control group were fed with basic diet, in low-dose group with basic diet plus 0.1% Cordyceps militaris fermented Schisandra chinensis residue and in high-dose group with basic diet plus 0.2% Cordyceps militaris fermented Schisandra chinensis residue for 14 days. Then one pig from each replicate was selected for blood collection by anterior vena cava venipuncture for analysis of the routine blood parameters, peripheral T lymphocyte subgroups and their proliferative activities, as well as the IL–2, IFN–γ contents. Results showed there was no difference in white blood cells (WBC), lymphocyte (LYM), mean erythrocyte haemoglobin concentration (MCHC), platelet count (PLT), mean platelet volume (MPV) and platelet distribution width (PDWcv) (P>0.05) between the control group and the low- and high-dose groups. Compared to the control, the contents of RBC and HGB in high-dose group were significantly increased (P<0.05), the CD4+/CD8+ratio and proliferation function of peripheral blood T cell in low- and high-dose groups were extremely significantly increased (P<0.01), the serum IFN-γ contents in high-dose group were also increased (P<0.05 or P<0.01), but there was no significant difference in serum IL-2 contents of piglets among groups (P>0.05). It was concluded that dietary supplied with Cordyceps militaris fermented Schisandra chinensis residue improves the immunologic function and optimizes blood physiology parameters of piglets.

    S816.7;S852.72

    A

    1007?1032(2014)02?0188?04

    10.13331/j.cnki.jhau.2014.02.016

    投稿網(wǎng)址:http://www.hunau.net/qks

    2013–10–14

    國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31272599)

    羅杰(1987—),男,四川丹棱人,碩士研究生,主要從事中獸藥與中獸醫(yī)研究,luojie1588@sina.cn;*通信作者,liyinglun01@163.com

    猜你喜歡
    藥渣蟲草五味子
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:44
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    有些中藥渣要擠汁
    HPLC-DAD法快速篩查五味子顆粒(糖漿)中南五味子代替五味子
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:02
    阿拉套大戟藥渣化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:57
    美洲大蠊藥渣制備殼聚糖工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:57
    五味子醇甲提取純化方法的研究進(jìn)展
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:06
    北五味子化學(xué)成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:01
    蛹蟲草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
    HPLC法同時(shí)測定五酯膠囊中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量
    窝窝影院91人妻| 国产精品一区二区免费欧美 | 不卡一级毛片| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲国产av新网站| 亚洲国产欧美一区二区综合| 在线精品无人区一区二区三| 男女午夜视频在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 99国产精品一区二区三区| 精品国产乱子伦一区二区三区 | av国产精品久久久久影院| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成人手机av| 日韩电影二区| www.自偷自拍.com| 欧美日韩黄片免| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产1区2区3区精品| 欧美久久黑人一区二区| 免费av中文字幕在线| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品偷伦视频观看了| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲全国av大片| 秋霞在线观看毛片| 国产精品.久久久| 少妇精品久久久久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 性色av一级| 国产亚洲av高清不卡| 下体分泌物呈黄色| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 免费观看a级毛片全部| 两性夫妻黄色片| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品国产av蜜桃| 香蕉丝袜av| 天天操日日干夜夜撸| 日本a在线网址| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 男人舔女人的私密视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 丰满少妇做爰视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美激情 高清一区二区三区| 91成人精品电影| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | a级毛片黄视频| 色视频在线一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 18在线观看网站| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产精品二区激情视频| 国产在线观看jvid| 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美成人午夜精品| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲成人手机| 亚洲精品国产色婷婷电影| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜91福利影院| av在线播放精品| 久久久久精品国产欧美久久久 | 天堂8中文在线网| 大片电影免费在线观看免费| 伊人亚洲综合成人网| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 国产欧美日韩一区二区精品| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 俄罗斯特黄特色一大片| 99re6热这里在线精品视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 深夜精品福利| 青春草视频在线免费观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 国产黄色免费在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 高清av免费在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产一区二区在线观看av| 操出白浆在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精品在线美女| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 亚洲伊人色综图| 老司机靠b影院| 老司机靠b影院| 激情视频va一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 男男h啪啪无遮挡| xxxhd国产人妻xxx| 黄色a级毛片大全视频| 我的亚洲天堂| 亚洲精品久久午夜乱码| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲国产欧美网| 色播在线永久视频| 国产成人a∨麻豆精品| av国产精品久久久久影院| 亚洲精品国产av成人精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 操出白浆在线播放| 国产精品欧美亚洲77777| 大码成人一级视频| 少妇的丰满在线观看| 午夜影院在线不卡| 国产亚洲精品一区二区www | 午夜精品国产一区二区电影| 性色av一级| 久久久久久久大尺度免费视频| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 黄色怎么调成土黄色| 欧美黄色淫秽网站| 欧美xxⅹ黑人| 叶爱在线成人免费视频播放| 黄频高清免费视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 最新的欧美精品一区二区| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费看十八禁软件| 国产黄频视频在线观看| 成年人黄色毛片网站| 18在线观看网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 亚洲欧美激情在线| 蜜桃国产av成人99| av线在线观看网站| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 在线观看人妻少妇| 免费黄频网站在线观看国产| 丝袜喷水一区| 91字幕亚洲| 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人精品无人区| 国产精品九九99| 国产精品.久久久| 久久精品人人爽人人爽视色| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 18禁国产床啪视频网站| 在线精品无人区一区二区三| 岛国毛片在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产一区二区在线观看av| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久久久人人人人人| 丝袜美足系列| 婷婷丁香在线五月| 亚洲av日韩在线播放| 蜜桃在线观看..| 一本综合久久免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 中文字幕色久视频| 1024视频免费在线观看| 考比视频在线观看| av福利片在线| 动漫黄色视频在线观看| 久久热在线av| 操美女的视频在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| tube8黄色片| 国产一卡二卡三卡精品| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费在线观看影片大全网站| 12—13女人毛片做爰片一| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 国产亚洲精品久久久久5区| 69精品国产乱码久久久| 久久性视频一级片| 1024视频免费在线观看| 一区二区三区精品91| 国产高清国产精品国产三级| 另类精品久久| 久久人妻熟女aⅴ| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产成人av教育| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产成人免费无遮挡视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本wwww免费看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 天堂中文最新版在线下载| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 这个男人来自地球电影免费观看| 少妇人妻久久综合中文| 黄片播放在线免费| 欧美性长视频在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 丝袜在线中文字幕| 男人添女人高潮全过程视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 男女免费视频国产| 成人黄色视频免费在线看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 搡老乐熟女国产| 久久精品国产综合久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日本欧美视频一区| www.av在线官网国产| cao死你这个sao货| 最近中文字幕2019免费版| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产1区2区3区精品| 亚洲欧洲日产国产| 国产一区二区在线观看av| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久国产精品麻豆| 亚洲熟女毛片儿| 十分钟在线观看高清视频www| 69精品国产乱码久久久| 男女免费视频国产| 国产一区二区三区av在线| 91麻豆av在线| 91精品国产国语对白视频| 亚洲一区中文字幕在线| 好男人电影高清在线观看| www.999成人在线观看| 亚洲黑人精品在线| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲情色 制服丝袜| 97人妻天天添夜夜摸| 国产在线一区二区三区精| av视频免费观看在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲人成电影观看| cao死你这个sao货| 久久久欧美国产精品| 亚洲av电影在线进入| 国产黄频视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 国产成人精品久久二区二区免费| 麻豆乱淫一区二区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产在线免费精品| 美女大奶头黄色视频| 两性夫妻黄色片| 亚洲avbb在线观看| 一本久久精品| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲男人天堂网一区| 电影成人av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一级毛片精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲,欧美精品.| 免费高清在线观看视频在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲国产欧美一区二区综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产成人a∨麻豆精品| 婷婷成人精品国产| 1024香蕉在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲精品在线美女| 精品乱码久久久久久99久播| 免费观看人在逋| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产精品.久久久| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品久久午夜乱码| 在线观看www视频免费| 国产又爽黄色视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 女人精品久久久久毛片| 91精品国产国语对白视频| 99国产精品一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在线精品无人区一区二区三| 最近最新中文字幕大全免费视频| 桃花免费在线播放| 一本综合久久免费| 新久久久久国产一级毛片| 91成年电影在线观看| av福利片在线| 精品高清国产在线一区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品二区激情视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲av电影在线进入| 国产国语露脸激情在线看| a级毛片在线看网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产主播在线观看一区二区| 午夜福利视频精品| 成年美女黄网站色视频大全免费| 我的亚洲天堂| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久久久久免费视频了| 在线观看免费高清a一片| 又大又爽又粗| 欧美中文综合在线视频| 九色亚洲精品在线播放| 波多野结衣av一区二区av| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 日韩视频在线欧美| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 男女床上黄色一级片免费看| 国产一区二区三区av在线| 一级毛片女人18水好多| 国产精品久久久久久精品古装| 国产欧美日韩精品亚洲av| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产1区2区3区精品| 中文字幕制服av| 嫩草影视91久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 又大又爽又粗| 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲欧美精品自产自拍| 人妻久久中文字幕网| 国产精品久久久久成人av| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲黑人精品在线| 伦理电影免费视频| 99热全是精品| 成年人免费黄色播放视频| av视频免费观看在线观看| 久久性视频一级片| 久久久久久久久免费视频了| 国产成人欧美| 成年人免费黄色播放视频| 精品国产一区二区久久| 一本久久精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 99国产精品一区二区蜜桃av | 免费少妇av软件| 精品福利永久在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 香蕉丝袜av| 亚洲专区国产一区二区| 午夜免费观看性视频| 大香蕉久久网| 免费看十八禁软件| 午夜免费鲁丝| av天堂在线播放| 51午夜福利影视在线观看| 高清在线国产一区| 成人av一区二区三区在线看 | 正在播放国产对白刺激| 999精品在线视频| 亚洲中文av在线| 精品久久蜜臀av无| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 国产福利在线免费观看视频| svipshipincom国产片| 午夜福利,免费看| 日本av免费视频播放| 国精品久久久久久国模美| 极品少妇高潮喷水抽搐| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久精品94久久精品| 丝袜在线中文字幕| 99国产综合亚洲精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 97精品久久久久久久久久精品| www.av在线官网国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲av美国av| 久久这里只有精品19| 亚洲一区中文字幕在线| 深夜精品福利| 亚洲国产av新网站| 9热在线视频观看99| 日本精品一区二区三区蜜桃| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久久国产精品大桥未久av| 一本色道久久久久久精品综合| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产成人免费观看mmmm| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 香蕉国产在线看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品九九99| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 在线天堂中文资源库| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 精品欧美一区二区三区在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 久久久国产精品麻豆| 国产成人欧美在线观看 | 中文字幕人妻丝袜制服| 91大片在线观看| www.熟女人妻精品国产| 国产一区二区 视频在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲欧美精品自产自拍| 黑人欧美特级aaaaaa片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美在线一区亚洲| 韩国精品一区二区三区| 久久99一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 精品一区在线观看国产| 麻豆乱淫一区二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 69av精品久久久久久 | 啦啦啦啦在线视频资源| 一区在线观看完整版| 三上悠亚av全集在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久久久国产电影| 十分钟在线观看高清视频www| 丝袜喷水一区| av网站在线播放免费| 国产日韩欧美在线精品| 免费av中文字幕在线| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 99精品久久久久人妻精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人av教育| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产男女内射视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产成人免费观看mmmm| 成年动漫av网址| 制服人妻中文乱码| 美女高潮到喷水免费观看| 咕卡用的链子| 国产精品 国内视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 美女主播在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 2018国产大陆天天弄谢| 高清视频免费观看一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久中文字幕一级| 国产精品1区2区在线观看. | 亚洲久久久国产精品| 国产成人免费无遮挡视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 下体分泌物呈黄色| 免费观看a级毛片全部| videos熟女内射| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲av片天天在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲三区欧美一区| 国产一区二区在线观看av| 亚洲成人免费av在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲久久久国产精品| 搡老熟女国产l中国老女人| 最近最新中文字幕大全免费视频| 韩国高清视频一区二区三区| bbb黄色大片| 国产真人三级小视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 宅男免费午夜| 99香蕉大伊视频| 国产精品免费视频内射| 最黄视频免费看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 女人精品久久久久毛片| 欧美午夜高清在线| 美女福利国产在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜激情av网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 涩涩av久久男人的天堂| 国产片内射在线| 国产在线视频一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 99久久综合免费| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久久久精品人妻al黑| 亚洲国产欧美网| av网站免费在线观看视频| 不卡一级毛片| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品卡一卡二卡四卡免费| 一级片免费观看大全| 少妇粗大呻吟视频| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 正在播放国产对白刺激| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 麻豆国产av国片精品| tube8黄色片| 国产高清videossex| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久精品成人免费网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 婷婷成人精品国产| 桃花免费在线播放| 久久热在线av| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲第一青青草原| 中文字幕色久视频| 在线观看免费视频网站a站| 男女国产视频网站| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲avbb在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人国语在线视频| 999精品在线视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 老汉色∧v一级毛片| 三级毛片av免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 91麻豆av在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲国产精品999| 亚洲人成电影观看| 免费日韩欧美在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产男人的电影天堂91| 久久亚洲国产成人精品v| 日日爽夜夜爽网站| 久久狼人影院| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av美国av| av天堂久久9| 99国产精品免费福利视频| 高清在线国产一区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99久久国产精品久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 久热爱精品视频在线9| 亚洲性夜色夜夜综合| 脱女人内裤的视频| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精品av麻豆狂野| 少妇被粗大的猛进出69影院| 多毛熟女@视频| 午夜福利乱码中文字幕| 高清在线国产一区| 在线永久观看黄色视频| 99香蕉大伊视频| 动漫黄色视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一区二区三区四区激情视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久久视频综合| 青春草视频在线免费观看| 国产精品免费大片| 人妻 亚洲 视频| 欧美中文综合在线视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲免费av在线视频| 色播在线永久视频| 啦啦啦免费观看视频1| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产深夜福利视频在线观看|