食管癌疫苗臨床應(yīng)用分析*

劉東紅 朱麗華 張慶波 曹秀華 石恩富 丁賀田

食管癌疫苗臨床應(yīng)用分析*

劉東紅①②朱麗華①?gòu)垜c波①曹秀華②石恩富②丁賀田③

目的：對(duì)食管癌疫苗在臨床應(yīng)用效果進(jìn)行分析，以期為臨床應(yīng)用提供參考。方法：從食管癌術(shù)后腫瘤組織標(biāo)本中提取其可溶性抗原成分和超抗原SEC構(gòu)建成腫瘤疫苗，對(duì)食管癌術(shù)后328例患者進(jìn)行臨床應(yīng)用（觀察組），并以常規(guī)治療326例患者作為對(duì)照組，觀察并分析臨床應(yīng)用效果和5年隨訪結(jié)果。結(jié)果：觀察組5年生存率為49.71%（173/328），對(duì)照組5年生存率為20.55%（67/326），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異（P＜0.05）；女性生存率為51.22%（84/164），男性生存率為45.12%（74/164），女性生存率顯著高于男性（P＜0.05）。觀察組中低分化患者的生存率（61.90%）顯著高于高分化患者的生存率（41.61%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而對(duì)照組低分化患者生存率（10.75%）顯著低于高分化患者的生存率（31.34%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：該疫苗能有效防止食管癌術(shù)后患者的復(fù)發(fā)和腫瘤轉(zhuǎn)移，提高生存率，特別是對(duì)女性患者和惡性程度高的患者效果更佳。

腫瘤疫苗 食管癌 腫瘤可溶性抗原 超抗原SEC 生物治療

食管癌是常見的上消化道腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康，全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，我國(guó)食管癌病死率為15.02/10萬(wàn)［1］，其死亡率僅次于胃癌、肝癌、肺癌，位居我國(guó)居惡性腫瘤第四位［2］。食管癌切除術(shù)后總體5年生存率仍然停留在20%～30%的水平［3］，提高食管癌術(shù)后生存率是目前臨床亟待解決的問(wèn)題。為此，本研究從食管癌切除術(shù)后的臨床組織標(biāo)本中提取可溶性抗原成分，與金葡菌超抗原一起構(gòu)建成為腫瘤疫苗，進(jìn)行臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

自2007年3月至2009年3月選擇河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院、唐山市人民醫(yī)院、唐山市工人醫(yī)院、秦皇島市人民醫(yī)院、遵化市人民醫(yī)院等單位的食管癌術(shù)后患者654例。入組標(biāo)準(zhǔn)：1）經(jīng)病理檢查證實(shí)均為鱗癌，無(wú)高血壓、糖尿病、心腦血管疾病及其他合并癥等；2）術(shù)前1周和疫苗應(yīng)用后1周分別做OT試驗(yàn)，由弱陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為強(qiáng)陽(yáng)性，表明細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，治療有效；3）病理分期：T3期或以下，M0、N期無(wú)要求。愿意接受食管癌疫苗治療的設(shè)為觀察組，同期符合上述要求未接受疫苗治療者為對(duì)照組。觀察組328例，男性164例（高分化68例、中分化52例、低分化44例），年齡42～68歲，女性164例（高分化69例、中分化55例、低分化40例），年齡44～69歲；對(duì)照組326例，男性165例（高分化68例、中分化54例、低分化44例），年齡41～70歲，女性161例（高分化66例、中分化51例、低分化49例），年齡40～67歲，2組患者性別、年齡和腫瘤惡性程度比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署協(xié)議書。

1.2 方法

1.2.1 食管癌疫苗構(gòu)建 取手術(shù)切除的食管癌組織標(biāo)本，提取其可溶性抗原成分［4］。選取最佳濃度的TSA（50 μg/mL）和SEC（0.1 ng/mL）混合成為腫瘤疫苗。

1.2.2 接種方法 對(duì)照組術(shù)后進(jìn)行常規(guī)治療和處理。觀察組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用腫瘤疫苗皮內(nèi)注射：于雙前臂掌側(cè)，每側(cè)注射0.1 mL，用藥前后1 d和用藥當(dāng)天，每天靜脈滴注IL-2 20萬(wàn)單位。首次于術(shù)后第7天應(yīng)用，間隔7天再進(jìn)行第2次接種，共接種2次。

1.2.3 接種效果判定 于第2次接種后48 h觀察局部接種反應(yīng)。陽(yáng)性：局部紅腫或有硬結(jié)；陰性：局部無(wú)紅腫或硬結(jié)。結(jié)果陽(yáng)性為接種有效。

1.2.4 觀測(cè)內(nèi)容 觀察組患者注射疫苗后，觀測(cè)接種部位的局部反應(yīng)和全身反應(yīng)，全部接種者無(wú)發(fā)熱及過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，并對(duì)接種者進(jìn)行定期5年生存率隨訪。

1.2.5 療效判斷 對(duì)觀察組、對(duì)照組患者進(jìn)行5年生存率隨訪，生存時(shí)間延長(zhǎng)為治療有效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以±s表示，多組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 總生存率和性別與生存率的相關(guān)性分析

觀察組總生存率和男女生存率均高于對(duì)照組（P＜0.05，表1）。

2.2 腫瘤分化程度與生存率的相關(guān)性分析

觀察組低分化癌患者生存率顯著高于高分化癌患者（P＜0.05，表2），而對(duì)照組低分化癌患者生存率顯著低于高分化癌患者（P＜0.05，表2）。

2.3 低分化癌和高分化癌抗原對(duì)PBMC增值活性的影響

各觀察組對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響均高于對(duì)照組（P＜0.05，表3）。

表1 觀察組和對(duì)照組5年生存情況比較 例（%）Table 1 Comparison of five-year survival rate between treatment and control groups[case(%)]

表2 腫瘤分化程度與生存率的卡方分析 例（%）Table 2 Analysis between the degree of tumor differentiation and the survival rate[case(%)]

3 討論

本文5五年隨訪結(jié)果顯示的兩個(gè)突出的問(wèn)題：一是女性患者生存率顯著高于男性，可能是由于女性患者機(jī)體的免疫力高于男性；二是惡性程度低的患者生存率高于惡性程度高者，可能是由于惡性程度低的腫瘤組織抗原其免疫原性強(qiáng)，能誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。提取腫瘤組織細(xì)胞可溶性抗原，可避免細(xì)胞抗原的各種弊端，保存抗原的特異性，加入葡萄球菌腸毒素（超抗原）可誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖［5］，提高其免疫原性。金葡菌腸毒素（SE）是一種具有高度生物活性的蛋白質(zhì)，是目前研究較多的細(xì)菌性超抗原，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生直接和間接的殺傷和抑制作用［6］。由腫瘤可溶性抗原和金葡菌超抗原構(gòu)建的腫瘤疫苗，可誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性T細(xì)胞，這種效應(yīng)細(xì)胞對(duì)抗原來(lái)源的腫瘤細(xì)胞具有選擇性殺傷活性，其機(jī)理為效應(yīng)細(xì)胞誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡［7-9］。

表3 不同分化程度的腫瘤抗原對(duì)PBMC增殖活性影響的比較 （OD值±s）Table 3 Peripheral blood mononuclear cell proliferation stimulated by the tumor antigen of different groups（OD value，±s）

表3 不同分化程度的腫瘤抗原對(duì)PBMC增殖活性影響的比較 （OD值±s）Table 3 Peripheral blood mononuclear cell proliferation stimulated by the tumor antigen of different groups（OD value，±s）

Note：Control group(A),high-differentiation group(B),moderate-differentiation group(C),and low-differentiation group(D);PB-A=0.000,PC-A= 0.000,PD-A=0.000(P＜0.05,statistically significant)

Group High differentiation Moderate differentiation Low differentiation Control group P The third day 0.279±0.007* 0.369±0.008* 0.585±0.011* 0.166±0.007 0 The sixth day 0.330±0.012* 0.487±0.009* 0.796±0.008* 0.279±0.009

由于腫瘤細(xì)胞在長(zhǎng)期的生長(zhǎng)演變過(guò)程中，形成了逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)攻擊殺傷的機(jī)制，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)多種方式來(lái)逃避免疫監(jiān)視，目前已經(jīng)認(rèn)識(shí)到的腫瘤免疫逃逸的相關(guān)機(jī)制可能包括以下幾個(gè)方面［10-12］：1）腫瘤抗原表達(dá)缺陷或抗原調(diào)變，異質(zhì)性大；2）腫瘤細(xì)胞MHC-Ⅱ類分子表達(dá)不同程度的下降、缺如，且分化能力差的腫瘤細(xì)胞HLA表達(dá)更弱，大多數(shù)實(shí)體腫瘤不表達(dá)HLA-Ⅱ分子抗原；3）腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的負(fù)性調(diào)節(jié)作用；4）Fas/FasL在腫瘤免疫逃逸中的作用，表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞能誘導(dǎo)表達(dá)Fas的淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡，又由于瘤細(xì)胞本身表達(dá)的下調(diào)，使淋巴細(xì)胞促腫瘤細(xì)胞凋亡的作用處于弱勢(shì)；5）黏附分子/共刺激分子缺陷，使得T細(xì)胞在活化過(guò)程中缺乏第二信號(hào)而不能被有效的激活，不能激發(fā)起有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答；6）抑制性免疫細(xì)胞亞群的作用。這些方面作用導(dǎo)致了機(jī)體無(wú)法對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效的識(shí)別和殺傷。大多數(shù)腫瘤抗原的免疫原性很弱，且宿主對(duì)腫瘤抗原的免疫應(yīng)答導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面抗原減少或丟失，從而使腫瘤細(xì)胞不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，不能誘發(fā)有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答作用?；谶@個(gè)認(rèn)識(shí)，需要運(yùn)用增強(qiáng)腫瘤抗原的免疫原性的基本方法，誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，以達(dá)到縮小和消除腫瘤的目的。

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（2014-07-14收稿）

（2014-10-19修回）

（本文編輯：周曉穎）

Analysis of the effect of clinical application of vaccine for esophageal cancer

Donghong LIU1,2,Lihua ZHU1,Qingbo ZHANG1,Xiuhua CAO2,Enfu SHI2,Hetian DING3

Lihua ZHU;E-mail:zhulihua1972@163.com
1Department of Pathogenic Organism and Immunology,Hebei United University,Tangshan 063000,China;2Department of Surgical Oncology,Zunhua No.2 Hospital,Zunhua 064200,China;3Department of Surgical Oncology,Zunhua National Hospital,Zunhua 064206,China
This work was supported by The Science and Technology Support Program of Hebei Province(No.09276418D-18 and 132777138)

Objective:To analyze the effects of the clinical applications of vaccine for esophageal cancer to provide treatment basis.Methods:Tumor-soluble antigen was extracted from clinical samples of esophageal cancer tissue.Vaccine for esophageal cancer was prepared using antigen and superantigen staphylococcal enterotoxin C(SEC).One group of patients with esophageal cancer was treated with vaccine after surgery(treatment group).Another group of patients with esophageal cancer was treated using routine methods(control group).After five years,the patients were followed up to analyze survival.Results:After five years of follow up,the survival rates of treatment and control groups were 173/328(49.71%)and 67/326(20.55%),respectively.Survival rates significantly differed between the two groups(P＜0.05).Furthermore,the survival rates of the female patients were higher than those of the male patients(P＜0.05).In the treatment group,the survival rates of patients with low-differentiation cancer were higher than those of patients with high-differentiation cancer(P＜0.05).In the control group,the survival rates of patients with low-differentiation cancer were lower than those of patients with high-differentiation cancer(P＜0.05).Conclusion:Tumor vaccine prepared with esophageal cancer antigen and superantigen SEC could increase the survival rate of patients with esophageal cancer,particularly female patients and those with low-differentiation cancer.

tumor vaccine,esophageal cancer,tumor-soluble antigen,superantigen SEC,tumor biotherapy

10.3969/j.issn.1000-8179.20141175

①河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物與免疫學(xué)學(xué)科（河北省唐山市063000）；②遵化市第二醫(yī)院外科；③遵化市民族醫(yī)院腫瘤外科

*本文課題受河北省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目（編號(hào)：132777138）和唐山市科技計(jì)劃指令項(xiàng)目（編號(hào)：13130263z）資助

朱麗華 zhulihua1972@163.com

劉東紅 專業(yè)方向?yàn)槟[瘤免疫及生物治療。

E-mail：zqb1955@163.com