突變型Ras蛋白表達(dá)與食管癌復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析

江 定

（新鄭市第二人民醫(yī)院腫瘤科，河南新鄭451100）

突變型Ras蛋白表達(dá)與食管癌復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析

江 定

（新鄭市第二人民醫(yī)院腫瘤科，河南新鄭451100）

目的分析突變型Ras蛋白表達(dá)與食管癌復(fù)發(fā)的相關(guān)性。方法采用免疫組化S-P法檢測65例食管癌（復(fù)發(fā)組43例和未復(fù)發(fā)組22例）手術(shù)標(biāo)本中突變型Ras蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果復(fù)發(fā)組Ras蛋白陽性表達(dá)率是72.09%（31/43），未復(fù)發(fā)組是18.18%（4/22）（P＜0.05），且其表達(dá)與分化程度有關(guān)。結(jié)論突變型Ras蛋白檢測可作為預(yù)測食管癌術(shù)后是否復(fù)發(fā)的參考因素。

食管癌；術(shù)后復(fù)發(fā)；Ras蛋白

食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，發(fā)病率較高且容易復(fù)發(fā)。Ras蛋白在細(xì)胞的生長和分化中起重要的作用［1］。Ras基因突變，特別是第12、13和61密碼子部位的點(diǎn)突變可使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化［1］。消化道腫瘤，尤其是食管癌，有較高的Ras基因突變發(fā)生率［1-2］。本研究對食管癌術(shù)后復(fù)發(fā)組與術(shù)后未復(fù)發(fā)組的突變型Ras基因測定，探討其與食管癌復(fù)發(fā)的關(guān)系，并為臨床提供早期干預(yù)的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料入組我院外科收治的2003年1月至2009年12月手術(shù)后病理證實(shí)為食管癌的65例患者，年齡32～73歲，中位年齡55歲；男34例，女31例。通過進(jìn)行電話復(fù)訪、信件回訪及門診復(fù)診等形式的回訪，以復(fù)查過胃鏡為標(biāo)準(zhǔn)，擇出未復(fù)發(fā)組22例，復(fù)發(fā)組43例。未復(fù)發(fā)組隨訪時(shí)間是5個(gè)月～4 a，中位隨訪時(shí)間22個(gè)月；復(fù)發(fā)組隨訪時(shí)間是3個(gè)月～3 a，中位隨訪時(shí)間14個(gè)月。未復(fù)發(fā)組早期15例，中晚期7例；高分化12例，中分化6例，低分化4例；鱗癌18例，腺癌4例。復(fù)發(fā)組早期32例，中晚期11例；高分化16例，中分化13例，低分化14例；鱗癌36例，腺癌7例。標(biāo)本均經(jīng)胃鏡或開放性手術(shù)獲得，所有患者均是保留部分食管，術(shù)后均行常規(guī)放療或化療。

1.2 Ras蛋白檢測方法將中性甲醛固定、石蠟包埋的組織制成 4～5 μm切片，常規(guī)脫蠟，浸入0.01mol·L-1、pH為6.0的枸櫞酸鹽緩沖液內(nèi)，微波爐抗原修復(fù)10 min，溫度為92～98℃。用S-P法進(jìn)行免疫組化染色。Ras試劑盒為北京中杉生物試劑公司提供的Zymed公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定高倍鏡（×400）下隨機(jī)取10個(gè)視野共計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞中的ras蛋白陽性表達(dá)的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果判斷：未著色的細(xì)胞定為陰性細(xì)胞，細(xì)胞核呈棕黃色或黃色的定為陽性細(xì)胞。每次均設(shè)陽性和陰性對照。以已知陽性切片作陽性對照，陰性對照用PBS代替一抗。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

復(fù)發(fā)組Ras蛋白陽性表達(dá)率是72.09%（31/43），高于未復(fù)發(fā)組的18.18%（4/22），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組中，腫瘤細(xì)胞分化越差，Ras蛋白陽性表達(dá)水平越高（P＜0.05）（表1）。

表1 Ras蛋白在不同分化程度食管癌組織中的表達(dá)

3 討論

Ras基因在正常細(xì)胞中有重要作用，編碼相對分子質(zhì)量為21 000的鳥苷酸結(jié)合蛋白，生化及遺傳學(xué)研究［3］提示，Ras蛋白在細(xì)胞增殖分化信號從激活的跨膜受體傳遞到下游蛋白激酶的過程中起作用。約有50%的結(jié)直腸癌及20%的非淋巴細(xì)胞性白血病有KRas、N-Ras基因點(diǎn)突變［4］。Ras基因在消化道腫瘤發(fā)生突變的頻率較高，特別是腸道腫瘤，其突變發(fā)生率為40%，Ras基因突變在消化道腫瘤癌變過程中起重要作用的觀點(diǎn)已被大多數(shù)學(xué)者所證實(shí)［1-2］。

本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組食管癌組織中Ras蛋白陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組；此外，在復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組中，腫瘤細(xì)胞分化越差，Ras蛋白的表達(dá)水平越高，這提示在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，Ras基因表達(dá)與食管癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)。

腫瘤免疫學(xué)研究［5］表明，在腫瘤組織中，間質(zhì)中抗體產(chǎn)生細(xì)胞主要依靠其產(chǎn)生的抗腫瘤抗體參與體液免疫，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長的目的。研究［6］發(fā)現(xiàn)，在食管黏膜細(xì)胞癌變過程中，IgG產(chǎn)生細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為關(guān)系密切，Ras基因的突變可通過抑制IgG產(chǎn)生細(xì)胞而降低局部體液免疫力，或IgG通過抑制Ras基因突變而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的腫瘤性生長的特性。因此，食管癌復(fù)發(fā)患者Ras基因突變，可能影響機(jī)體的免疫功能，從而造成食管癌的復(fù)發(fā)。

綜上所述，相對于食管癌細(xì)胞分化程度、腫瘤大小、侵襲能力而言，Ras蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度可以作為一個(gè)獨(dú)立的觀察指標(biāo)，從分子水平上可以作為預(yù)測其是否復(fù)發(fā)的參考因素。

［1］ Máthé E.RASSF1A，the new guardian of mitosis［J］.Nat Genet，2004，36（2）：117-118.

［2］ Agathanggelou A，Cooper WN，Latif F.Role of the Ras-association domain family 1 tumor suppressor genei n human cancers［J］. Cancer Res，2005，65（9）：3497-3508.

［3］ Pretlow TP，Brasitus TA，F(xiàn)ulton NC，et al.K-ras mutations in putative preneoplastic lesions in human colon［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：2004-2007.

［4］ Fearon ER.K-ras gene mutation as a pathogenetic and diagnostic marker in human cancer［J］.J Natl Cancer Inst，1993，85（24）：1978-1980.

［5］ Ioachim HL，Dorsett BH，Paluch E.The immune response at the tumor site inl ung carcinoma［J］.Cancer，1976，38（6）：2296 -2309.

［6］ 蘇蔚，趙衛(wèi)星，付華民，等.食管癌P53、PCNA表達(dá)與局部體液免疫的關(guān)系［J］.癌癥，2000，19（2）：128-130.

Correlation of Mutated Ras Protein Expression with Recurrence in Esophagus Carcinoma

Jiang Ding
（Department of Oncology，the Second People's Hospital of Xinzheng，Xinzheng 451100，China）

ObjectiveTo investigate the correlation of Ras protein with recurrence in esophagus carcinoma.MethodsImmunohistochemistry S-P method was used to detect the mutated Ras protein expression in the 65 patients with undergone surgery for esophagus carcinoma（43 patients with recurrence and 22 patients without recurrence）.ResultsThe positive rate of mutated Ras protein was 72.09%（31/43）in the patients with recurrence，and was 18.18%（4/22）in the patients without recurrence（P＜0.05）.The expression of mutated Ras protein was related to differentiation.ConclusionMutated Ras protein may be refered as a factor for predicting the recurrence in esophagus carcinoma.

esophagus carcinoma；recurrence；Ras protein

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.02.005

R735.1

A

1673-5412（2014）02-0109-02

2012-03-20）

江定（1973-），男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科臨床工作。

E-mail：445990201@qq.com