2008—2009年白城市沙門菌流行特征及脈沖場凝膠電泳分子分型

王宏

摘 要：分析2008—2009年白城市沙門菌流行特征及脈沖場凝膠電泳（PFGE）分子分型。發(fā)現(xiàn)沙門菌的流行具有明顯季節(jié)性，6～9月份高發(fā)，患者年齡多為18～40歲，男女比例為2∶1，腸炎沙門茵和鼠傷寒沙門菌為優(yōu)勢菌型。得出的結(jié)論是2008—2009年白城市沙門菌的流行具有性別、年齡和季節(jié)性分布特征。

關(guān)鍵詞：沙門菌 流行特征 分子分型

中圖分類號：R378 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）01（a）-0254-01

沙門菌是我國食源性傳染病最常見的致病菌，血清型復(fù)雜，可以分為2700多個(gè)血清型。目前脈沖場凝膠電泳是國際上公認(rèn)的確認(rèn)食源性傳染病暴發(fā)流行的重要手段，已被應(yīng)用于多種病原體的監(jiān)測分析中。與傳統(tǒng)的血清分型方法相比，PFGE具有更高的敏感度與分辨力，能夠分析同一時(shí)段不同時(shí)期菌株之間的內(nèi)在聯(lián)系，根據(jù)菌株基因組問的相似程度可以解釋流行的內(nèi)在規(guī)律，早期識別是否暴發(fā)。通過PFGE分型方法對2008—2009年白城市沙門菌分離株的分子特征進(jìn)行研究和分析，為今后暴發(fā)疫情的分子診斷和溯源提供資料。

1 材料與方法

菌株：實(shí)驗(yàn)所用菌株主要包括2008—2009年來自白城市腸道門診監(jiān)測系統(tǒng)中散發(fā)腹瀉患者，聚集性疫情的人源、食品中分離到的沙門菌株共計(jì)141株，其中5株來源于食品，包括牡蠣（3株）及涼拌菜（2株），其余136株均來自患者的糞便。在136例患者中，個(gè)別患者信息缺失，其中129例患者季節(jié)分布和性別分布信息齊全；131例年齡分布信息齊全。

主要試劑與儀器：

（1）主要試劑：培養(yǎng)基SS和LB瓊脂、微量生化管、Seakem Gold瓊脂糖、蛋白酶K、限制性內(nèi)切酶Xba I、VITEK GNI鑒定板、沙門菌診斷血清。

（2）主要儀器：SW22型水浴搖床、5415D型臺式高速離心機(jī)、VITEK濁度儀、實(shí)驗(yàn)用去離子水系統(tǒng)、凝膠成像系統(tǒng)、脈沖場凝膠電泳儀及配套設(shè)備。

方法：

（1）菌株的生化鑒定和血清分型：從SS選擇性平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，接種在三糖鐵瓊脂，接種方法先于斜面劃線后穿刺直立段，36 ℃培養(yǎng)過夜。底層黃色產(chǎn)氣、斜面紅色、硫化氫陽性為可疑沙門菌。用VITEK傘自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行鑒定，確定為沙門菌屬后，用沙門菌診斷血清進(jìn)行分型，有些菌株需要連續(xù)誘導(dǎo)，才能確定鞭毛第2相H抗原的型別。根據(jù)Kauffman-White血清分型標(biāo)準(zhǔn)，確定每株菌的血清型別。（2）PFGE分型：按照美國CDC公布的沙門菌脈沖場電泳標(biāo)準(zhǔn)分型方法，對141株沙門菌菌株進(jìn)行分子分犁。沙門菌標(biāo)準(zhǔn)株H9812做為分子量標(biāo)記。內(nèi)切酶Xba I（40 u），37 ℃酶切3 h。電泳條件：脈沖時(shí)間從2.2～63.8 S，電壓6 V/cm，線性轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換角度1200，電泳溫度14 ℃，電泳時(shí)間19 h。PFGE電泳圖譜中，每條泳道代表l株菌，在限制性內(nèi)切酶的切割下，不同的菌株會呈現(xiàn)不同的條帶數(shù)和片段大小。電泳圖像經(jīng)過統(tǒng)一的分子量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校準(zhǔn)，將條帶數(shù)和位置相同的菌株歸為同一PFGE型別。然后按照食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)帶型命名規(guī)則命名為JABx01.CN，其中JPX代表鼠傷寒沙門菌、JEG代表腸炎沙門菌，以此類推，C表示是中國分離株的分析帶型，N表示帶型的編號，X01表示限制性內(nèi)切酶Xba I。

沙門菌的血清型及流行特征：

（1）菌株的血清型分布：141株菌分為20種血清型。腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌分別占47.2%和19.1%，是近2年白城市沙門菌中感染的優(yōu)勢血清型。

（2）時(shí)間分布：從腸道門診監(jiān)測系統(tǒng)記錄的腹瀉患者發(fā)病時(shí)間和菌株分離時(shí)間可知沙門菌感染的時(shí)間分布特點(diǎn)。全年12個(gè)月份均能分離到菌株，感染的高發(fā)季節(jié)為6、7月份，共分離到92株菌，占65.25%。

（3）患者性別、年齡分布：2008—2009年沙門菌感染的患者中，男件84例，女性57例，男女比例為1.47∶l。發(fā)病年齡多集中在18～40歲，占50.2%；其次為0～6歲的兒童，占23.7%。

2 討論

該研究顯示，白城地區(qū)2008—2009年沙門菌感染以鼠傷寒沙門菌和腸炎沙門菌為優(yōu)勢血清型，該結(jié)果與近10年白城地區(qū)流行的主要沙門菌血清型相符合。沙門菌感染者的人群特征是18～40歲成年組高發(fā)，可能是因?yàn)檫@個(gè)年齡段人群在外就餐幾率大，頻率多，所以，感染率高；至于兒童組也有一定的發(fā)病比例，可能是由于自身的免疫系統(tǒng)不夠完善較為易感。通過對141株沙門菌進(jìn)行PFGE分型，共得到71種PFGE帶型，反映了沙門菌的PFGE型別較多，呈現(xiàn)多樣性。endprint