不同稀釋液對β-HCG稀釋檢測的影響*

盧德權(quán)

(佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院附屬陳村醫(yī)院，廣東 佛山 528313)

人絨毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌的糖蛋白激素，由α、β兩個亞單位和237個氨基酸組成[1]。通過對HCG定量的檢測．可以輔助診斷妊娠及與妊娠有關(guān)的疾?。貏e是對惡性葡萄胎及絨毛膜癌的治療以及病情監(jiān)測有重要的意義。由于α亞基與其他激素(LH、FSH、TSH)有共同的抗原性，β亞基則有其特異性，所以臨床應(yīng)用多以β亞基作為靶抗原來檢測HCG，故又稱為β-HCG[2]。滋養(yǎng)細胞腫瘤的患者血清β-HCG值遠高于20萬mIU/ml，甚至幾百萬mIU/ml．但現(xiàn)有的檢測方法檢測血β-HCG的線性上限均不超過10000 mIU/ml．對這部分患者的β-HCG無法準(zhǔn)確定量，以觀察β-HCG測定值隨患者的病情變化情況。臨床實驗室多采用樣本稀釋后檢測乘上稀釋倍數(shù)報告臨床，但所用稀釋液各有不同。

對于檢測超過線性范圍的結(jié)果必須進行稀釋，當(dāng)然，只有廠家推薦的或?qū)嶒炇乙炎C實可用的稀釋液才能用于稀釋樣本[3]。因此本文通過選用HCG稀釋液、零值血清、生理鹽水和蒸餾水作為稀釋液．對高濃度β-HCG血清樣本進行稀釋后測定，以觀察不同稀釋液對測定結(jié)果的影響，為選擇適合的樣本稀釋液提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 西門子ADVIA centaur電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與配套的β-HCG試劑。β-HCG檢測的線性范圍為0．1～10000 mIU/ml，總精密度CV<6%。HCG稀釋液(Diluent)為廠家推薦作為儀器檢測HCG項目超過線性范圍上限時的樣本稀釋液。

1.2檢測對象 到我院就診的妊娠相關(guān)疾病患者高濃度β-HCG血清樣本1例，β-HCG測定值為9770 mIU/ml。

1.3方法 抽取受檢者靜脈血2 ml，3000 r/min分離血清。零值血清吸取當(dāng)天體檢樣本中男性血清混勻制成，要求無溶血、無脂血、無污染、無纖維凝塊。生理鹽水為東莞市普濟藥業(yè)有限公司生產(chǎn),規(guī)格為500 ml/4．5 g。蒸餾水為自制去離子水。零值血清．生理鹽水，以及蒸餾水β-HCG測定值均<0.01 mIU/ml。原值血清用HCG稀釋液，零值血清，生理鹽水和蒸餾水四種不同稀釋液分別稀釋，稀釋比例分別為1∶5，1∶10，1∶20～1∶640稀釋．共8個稀釋比例，稀釋后樣本均進行雙份測定。

1.4質(zhì)量控制 室內(nèi)指控品采用寶迪免疫質(zhì)控品，高值和低值兩個濃度水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計軟件SPSS13．0，結(jié)果比較采用計算相對偏差和相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

原值血清用HCG稀釋液，零值血清，生理鹽水和蒸餾水四種不同稀釋液稀釋后血清β-HCG檢測結(jié)果見表1。

表1用四種稀釋液稀釋高濃度β-HCG血清后的測定結(jié)果(mIU/ml)

稀釋后樣本β-HCG測定值取雙份測定值,的平均值，與原值血清的理論濃度進行比較，并計算偏差結(jié)果見表2。原值血清樣本β-HCG檢測結(jié)果為9770．00 mIU/ml。

從表2可以看出．HCG稀釋液稀釋原值血清后．測定值與原值稀釋后的理論值比較，其偏差為-9．6%～1．04%，1∶640稀釋的時候，偏差>6%，達到-9．6%。零值血清稀釋后的測定值與原值稀釋后理論值比較，偏差為-1．46%～5．56%，從1∶5，1∶640時，其偏差均<6%。而生理鹽水稀釋后的測定值與原值稀釋后的理論值比較，偏差為-17．58%～3．03%，生理鹽水從稀釋比為1∶320時。其偏差大于6%，達到～12．69%。蒸餾水稀釋后的測定值與原值稀釋后的理論值比較，偏差為-2．70%～l3．25%,稀釋比為1∶40時，偏差就超過6%，達到9．79%。

表2 不同稀釋液稀釋后β-HCG測定值與樣本理論值的比較(mIU/ml)

由統(tǒng)計學(xué)處理后，零值血清組，與生理鹽水組，蒸餾水組比較，差異有非常顯著性(P<0．01)，HCG稀釋液組，與生理鹽水組，蒸餾水組比較，差異有非常顯著性(P<0．01)。其余各組之間比較差異無顯著性(P>0．05)。HCG稀釋液組、零值血清組、生理鹽水組、蒸餾水組各稀釋比測定值的均值分別與理論值進行相關(guān)性分析，結(jié)果見表3。

表3HCG稀釋液組、零值血清組、生理鹽水組、蒸餾水組測定值相關(guān)性分析比較

稀釋液回歸方程相關(guān)系數(shù)HCG稀釋液Y=0.96X+3.510.99998零值血清Y=0.99X+3.190.999987生理鹽水Y=0.94X+5.590.99984蒸餾水Y=0.97X+18.930.99964

表3結(jié)果顯示四種稀釋液稀釋樣本后，相關(guān)系數(shù)均達到0．999以上。但零值混合血清相關(guān)系數(shù)更接近于1，稀釋樣本后的斜率與截距最小。而HCG稀釋液、生理鹽水及蒸餾水的截距均較零值血清高，蒸餾水的截距高達18．93。

3 討 論

B．HCG測定對早孕和妊娠相關(guān)疾病的診斷、療效觀察等有重要意義，其血清β-HCG濃度常常超過試劑的測量范圍，需要進行稀釋后進行檢測。電化學(xué)發(fā)光免疫法(ECLIA)是由瑞士Roche公司推出的標(biāo)志免疫檢測方法，ECLIA時抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)是在一定的介質(zhì)環(huán)境中進行的，影響介質(zhì)性能的主要原因有蛋白質(zhì)、pH值、離子強度和其他血清成分如脂質(zhì)、特有離子等，介質(zhì)成分的改變會直接影響結(jié)合反應(yīng)的結(jié)果[6]。

臨床檢測分析時，高濃度β-HCG樣本血清常需稀釋后檢測。稀釋液不同．則檢測結(jié)果存在不同程度的差異，可能與基質(zhì)效應(yīng)有關(guān)。從表2可以看出四種稀釋液稀釋血清后，零值血清稀釋原值皿清后，偏差最小，HCG稀釋液次之，生理鹽水尚可，蒸餾水偏差最大：HCG稀釋液在1∶640時，其偏差達到-9．60%．生理鹽水在1∶320時。其偏差達到12．69%，蒸餾水在1∶40時，偏差達到了9．79%，而零值血清從1∶5到1∶640，其偏差均<6%。這種偏差主要由稀釋及基質(zhì)效應(yīng)造成。表3結(jié)果顯示四種稀釋液稀釋樣本后，相關(guān)系數(shù)均達到0．999以上。但零值混合血清相關(guān)系數(shù)更接近于1，稀釋樣本后的斜率與截距最小。而HCG稀釋液、生理鹽水及蒸餾水的截距均較零值血清高，蒸餾水的截距高達18．93。零值血清的蛋白質(zhì)、pH值、離子強度和其他血清成分與樣本血清基本相近，其測定結(jié)果偏差最小[5]。HCG稀釋液為廠家提供給所有超線性范圍項目稀釋所用．為廠家推薦的稀釋液，其成分比較接近于血清，基質(zhì)效應(yīng)相對較?。栽笛逵肏CG稀釋液稀釋后測定值與理論值比較偏差也相對較小。生理鹽水的pH值、離子強度與血清相近，但無蛋白質(zhì)和血清成分，測定結(jié)果偏差較大；蒸餾水的pH值、離子強度與血清相差較大，亦無蛋白質(zhì)和血清成分，故偏差最大[6]。

所以，在做血清β-HCG稀釋檢測時，最好選用零值血清作為稀釋液，如男性血清或具有其他種族差異的混合血清。HCG稀釋液結(jié)果也比較可靠，但價格昂貴。生理鹽水具有便宜、經(jīng)濟、相對可靠的優(yōu)點，一般要求下也可作稀釋液，蒸餾水不宜作為稀釋液。同時建議實驗室在編寫標(biāo)準(zhǔn)化操作程序時，有必要規(guī)范樣本稀釋程序．以確保檢測結(jié)果的可靠性。

[1] 郎江明．臨床免疫診斷學(xué)[M]．廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2008：497-498.

[2] 王自正．現(xiàn)代醫(yī)學(xué)標(biāo)記免疫學(xué)[M]．北京：人民軍醫(yī)出版社，2005：177-178．

[3] 潘超，王文龍，張國偉.定量檢測中的分析測量范圍的驗證[J]．檢驗醫(yī)學(xué)．2010．25(4)：303-308．

[4] 陳春華．探討用不同稀釋液對RIA測定高濃度AFP的影響[J]．華西醫(yī)學(xué)．2011，18(2)：247．

[5] 高云朝，楊亞東，陸漢魁．稀釋介質(zhì)對化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測HCG的影響[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2011，14(2)：121．

[6] 丁忠旗，李永培，盛強．不同稀釋液對高濃度HCG測定值的影響[J]．中華核醫(yī)學(xué)雜志，2009，22：39．