益母草不同部位乙醇提取液對(duì)菜青蟲變態(tài)的影響

趙玉敏，馬 艷

(通化師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002)

益母草(Leonurusartemisia(Laur.)S. Y. Hu F)為唇形科,益母草屬植物,夏季開花.其干燥地上部分為常用中藥,生用或熬膏用.一年或二年生草本,高可達(dá)1m.莖單一,直立.葉片3全裂,裂片長(zhǎng)圓狀菱形.輪傘花序腋生;花冠紫紅色或淡紫紅色.小堅(jiān)果長(zhǎng)圓形.花期8～9月;果期9～10月.生于山野荒地、田埂、草地等,全國(guó)大部分地區(qū)均有分布.在夏季生長(zhǎng)茂盛,花未全開時(shí)采摘.食用功效：益母草可全草入藥,味辛苦、涼.活血、祛淤、調(diào)經(jīng)、消水.治療婦女月經(jīng)不調(diào),胎漏難產(chǎn),胞衣不下,產(chǎn)后血暈,瘀血腹痛,崩中漏下,尿血、瀉血,癰腫瘡瘍[1-3]. 有效成分為益母草素,益母草含益母草堿、水蘇堿、益母草定、益母草寧等多種生物堿及苯甲酸、氯化鉀等.菜青蟲[4](PierisrapaeL.)為菜粉蝶幼蟲,屬鱗翅目,粉蝶科.寄主植物有十字花科、菊科、旋花科、百合科、茄科、藜科、莧科等9科35種,主要危害十字花科蔬菜,尤以芥藍(lán)、甘藍(lán)、花椰菜等受害比較嚴(yán)重.菜粉蝶分布在全國(guó)各地,藥材中以板藍(lán)根受害嚴(yán)重,幼蟲將葉片吃成缺刻和孔洞,危害嚴(yán)重時(shí)全葉被吃光,僅剩葉脈和葉柄,使板藍(lán)根產(chǎn)量下降.菜粉蝶屬完全變態(tài)發(fā)育,分受精卵、菜粉蝶幼蟲、蛹、蟲四個(gè)階段.

以往研究的植物源殺蟲劑,多是噴灑后害蟲觸殺或胃毒死亡,這對(duì)昆蟲物種保存很不利.而本實(shí)驗(yàn)利用長(zhǎng)白山地區(qū)益母草不同部位乙醇提取液促使菜青蟲快速變態(tài),從而減少了作物的損失,又保存了物種.

1 材料與方法

1.1 材料

益母草采自通化白雞腰國(guó)家森林公園,供試菜青蟲(3齡幼蟲,大小均勻),采自通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院的實(shí)驗(yàn)田里,供試蔬菜為十字花科蔬菜甘藍(lán).

本實(shí)驗(yàn)U10(103)因素及水平設(shè)計(jì)如表1所示.

表1 本實(shí)驗(yàn)U10(103)因素及水平設(shè)計(jì)

1.2 藥液制備方法

將益母草洗凈晾干,稱取根、莖、葉各10 g,放入研缽中搗碎,分別加入100ml 95%的乙醇溶液,于(23±2)℃恒溫振蕩提取8 h.再將提取液的濾液減壓濃縮,放入少量95%的乙醇溶液溶解后,以蒸餾水定容,根、莖、葉提取液均制備成質(zhì)量濃度為9.1、10.0、11.1、12.5、14.3、16.9、20.0、25.0、33.3、50.0mg/ml(表1)藥液后,置于3～5℃冰箱中備用.

1.3 益母草不同部位乙醇提取液對(duì)菜青蟲變態(tài)影響的測(cè)定

采用浸液法進(jìn)行非選擇性變態(tài)率的測(cè)定方法.以往實(shí)驗(yàn)采用葉碟法測(cè)定,本實(shí)驗(yàn)為了更接近自然條件,利于生產(chǎn)實(shí)踐中對(duì)病蟲害防治,我們對(duì)實(shí)驗(yàn)方法加以改進(jìn),采用浸液法進(jìn)行非選擇性變態(tài)率的測(cè)定.將新鮮平整的甘藍(lán)葉片洗凈,放在制備好的不同濃度的根、莖、葉供試藥劑中浸漬5s后取出,用圓形打孔器打成直徑為2cm的葉碟,取出于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)陰干后,置入直徑為9cm的底部鋪有濾紙保濕的培養(yǎng)皿中,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí),取齡期較整齊的3齡菜青蟲幼蟲供試.試蟲實(shí)驗(yàn)前在自然狀態(tài)下饑餓4h.每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)放入3個(gè)相同濃度處理的葉碟,接入試蟲,試蟲取食24h后,取出殘余葉碟,添加三片新鮮的藥劑處理后的葉碟繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn).每處理重復(fù)10次，30%乙醇處理作為對(duì)照,各處理隨機(jī)排列.置于T=(25±1)℃;RH=(75±5)%;14 L:10 D光照培養(yǎng)箱飼養(yǎng),分別于接入菜青蟲的7d和9d統(tǒng)計(jì)計(jì)算變態(tài)率,變態(tài)率計(jì)算公式為：變態(tài)率(%)=(處理組變態(tài)數(shù)-對(duì)照組變態(tài)數(shù))/處理組變態(tài)數(shù)×100%.

1.4 設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS(13.0)[5]軟件處理分析數(shù)據(jù).

2 結(jié)果與分析

用浸液法進(jìn)行非選擇性變態(tài)率的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定了益母草根、莖、葉不同濃度的乙醇提取液對(duì)菜青蟲快速變態(tài)的影響.從48h后直至5d,菜青蟲進(jìn)入了變態(tài)準(zhǔn)備期,菜青蟲從處理后第6d開始變態(tài),且莖處理液處理過的菜青蟲總體的變態(tài)率顯著高于另兩種處理,蛹長(zhǎng)也相對(duì)變小(圖1).為了快速而準(zhǔn)確地判斷出3種提取液對(duì)菜青蟲快速變態(tài)影響的顯著性,將表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用SPSS(13.0)軟件處理分析,結(jié)果見表3.

圖1 不同濃度不同處理的蛹長(zhǎng)度

處理號(hào)乙醇浸提液濃度(mg/ml )根(X1)莖(X2)葉(X3)變態(tài)率(%)根( Y1)莖( Y2)葉( Y3)7d9d7d9d7d9d150.050.050.04073971004067233.333.333.35777931005773325.025.025.06080971006073420.020.020.0476087974767516.916.916.9537393975373614.314.314.3537393935373712.512.512.5607787976070811.111.111.1477083974767910.010.010.0507387935073109.19.19.1577783935770

注:均勻設(shè)計(jì)是正交設(shè)計(jì)的一種,U10(103)表示三個(gè)因子,10個(gè)處理.

表3 益母草對(duì)菜青蟲變態(tài)率影響回歸分析結(jié)果

由表2可知,益母草莖部乙醇提取液較另兩種提取液更促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài),并隨著濃度提高變態(tài)率提高;而益母草根、葉乙醇提取液對(duì)促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)沒有作用.質(zhì)量濃度為25.0、33.3、50.0mg/ml時(shí)變態(tài)率最高,達(dá)100%.菜青蟲取食浸漬莖部試藥劑葉蝶后,爬向培養(yǎng)皿邊緣,蟲體迅速膨大,開始身體C形彎曲,后活動(dòng)能力有所減退,體重逐漸下降,蟲體皺縮僵直,不吃不喝,以絲縛于培養(yǎng)皿頂部提前化蛹.因此,對(duì)莖提取液處理統(tǒng)計(jì)的菜青蟲變態(tài)率進(jìn)行回歸分析,由表3可知,7d的回歸方程分析結(jié)果Y2=0.425*X2+82.028；9d的回歸方程分析結(jié)果Y2=0.279*X2+91.621,差異均極顯著,推測(cè)：益母草莖部乙醇提取液對(duì)菜青蟲變態(tài)有顯著影響.

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,益母草莖部含有促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的物質(zhì).通過回歸方程分析結(jié)果(表3)可知,益母草根、莖、葉三個(gè)器官中,只有莖部乙醇提取液對(duì)菜青蟲快速變態(tài)有促進(jìn)作用,并隨著濃度提高，變態(tài)率提高.但是當(dāng)質(zhì)量濃度為25.0、33.3、50.0mg/ml時(shí)變態(tài)率最高,達(dá)100%.說明，一是益母草莖中含有促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的物

質(zhì),此物質(zhì)可能是抗保幼激素(早熟素)的成分,可能是供試藥劑誘發(fā)抗保幼激素(早熟素)提前釋放,但是當(dāng)濃度過高時(shí),藥物毒性升高,導(dǎo)致蟲體死亡;二是莖促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的活性物質(zhì)極易被乙醇提取;三是莖中起促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的活性物質(zhì)在乙醇提取液中能保持較好的穩(wěn)定性;四是根和葉的乙醇提取液對(duì)促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)效果不明顯,其原因可能是根和葉中含促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的物質(zhì)較少或根和葉中促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的活性物質(zhì)不易被乙醇提取出來,導(dǎo)致根和葉的乙醇提取液中促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)活性物質(zhì)含量少，效果不明顯;另外，根和葉的毒性很大,所以使蟲體致死率很高.

用有毒植物提取液對(duì)菜青蟲生物特性研究多是在拒食和觸殺上[6-9],關(guān)于益母草促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài)的研究還未有人報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)對(duì)保存物種有一定的意義.益母草莖中是何種物質(zhì)促進(jìn)菜青蟲快速變態(tài),以及活性物質(zhì)的進(jìn)一步分離、提純、對(duì)昆蟲的作用方式和毒理機(jī)制等方面還有待更深入的研究.

參考文獻(xiàn)：

[1]魏麗春,李慶軍.益母草的藥理與臨床研究進(jìn)展[J].西北藥學(xué)雜志,2009,24(4): 333-335.

[2]李煥杰,孟祥玉.不同溶劑及方法對(duì)益母草生物堿含量影響[J].陜西中醫(yī),2008,29(5):607-608.

[3]申利紅,王勝利.益母草的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(8):4414-4416.

[4]蒲瑋.菜青蟲生物學(xué)特性,殺蟲植物篩選與活性研究[D].成都:四川大學(xué),2003.

[5]鄧振偉,于萍,陳玲.SPSS軟件在正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、結(jié)果分析中的應(yīng)用[J].電腦學(xué)習(xí),2009(5):15-17.

[6]肖波,周俗,張可君,等.瑞香狼毒中殺滅菜青蟲活性成分的提取與分離[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào), 2005,42(3):605-609.

[7]李水清,張鐘寧.艾蒿提取物對(duì)菜青蟲的生物活性[J].昆蟲知識(shí),2004,41(5):439-442.

[8]秦小萍,趙紅艷,楊美林.坡柳種子提取物對(duì)菜青蟲取食和生長(zhǎng)發(fā)育的影響[J].農(nóng)藥,2007,46(7):494-495.

[9]陳力,徐漢虹,趙善歡.唐古特瑞香對(duì)菜粉蝶幼蟲的拒食和胃毒活性[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,21(1):44-46.