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    北美楓香“秋霞紅”組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究

    2014-06-09 14:20:32何海燕何小弟董筱昀
    江蘇林業(yè)科技 2014年5期
    關(guān)鍵詞:楓香北美試管

    何海燕,何小弟,董筱昀

    (1.揚(yáng)州綠地生態(tài)農(nóng)林建設(shè)咨詢有限公司,江蘇 揚(yáng)州 225009;2.揚(yáng)州大學(xué),江蘇 揚(yáng)州 225009;3.江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院,江蘇 南京 211153)

    北美楓香“秋霞紅”組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究

    何海燕1,何小弟2,董筱昀3

    (1.揚(yáng)州綠地生態(tài)農(nóng)林建設(shè)咨詢有限公司,江蘇 揚(yáng)州 225009;2.揚(yáng)州大學(xué),江蘇 揚(yáng)州 225009;3.江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院,江蘇 南京 211153)

    通過正交試驗(yàn)等方法對北美楓香“秋霞紅”組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:在江蘇揚(yáng)州最佳取材時(shí)間為4月下旬,選取外植體,經(jīng)過0.1%HgCl2消毒12 min滅菌,成活率為78.7%;添加VC35 mg/L能有效預(yù)防試管苗褐變的發(fā)生,增加培養(yǎng)容器的透氣性可減少試管苗玻璃化發(fā)生;2/3MS附加TDZ、BA、NAA等植物生長調(diào)節(jié)劑可促進(jìn)試管苗增殖和生長,其中TDZ 0.2 mg/L+BA 1.0 mg/L+I(xiàn)BA 0.1 mg/L+VC35 mg/L組合最適宜增殖與生長培養(yǎng),增殖倍數(shù)達(dá)4.5,生長高度為3.8 cm;適宜的生根培養(yǎng)基為1/3 MS+I(xiàn)BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 3 000 mg/L+S 2%,生根率可達(dá)92%;經(jīng)生根的試管苗移栽于泥炭、黃心土為7∶3(V∶V)的混合基質(zhì),控制溫度23~30℃,相對濕度90%,保濕12~18 d,其間適當(dāng)遮蔭,30 d后成活率達(dá)90.8%。

    北美楓香“秋霞紅”;組織培養(yǎng);褐變苗;玻璃苗;快速繁殖

    北美楓香(Liquidambar styraciflua),為金縷梅科楓香屬落葉大喬木,樹高15 m以上。樹冠廣卵形,干性挺直。葉互生,掌狀5裂;春、夏色綠,10月上旬葉色始紅,漸靚艷醉人。喜溫暖濕潤氣候,喜光照、耐少量蔽陰;土壤適應(yīng)性強(qiáng),耐干旱,但在潮濕的中性土壤上生長較好。株形偉岸,孤植、叢植、群植均相宜,可作景觀林、用材林和防護(hù)林。純林者,霜侵紅葉,層林盡染。行道樹培育,枝下高度宜控制為2.8~3.0 m;景觀樹培育,枝下高度宜控制在0.8~1.0 m,以增強(qiáng)植株效果。

    北美楓香又稱膠皮楓香樹,原產(chǎn)于北美洲,在美國東南部有大量分布,2004年經(jīng)由美克爾國際集團(tuán)引進(jìn),種源地為阿拉巴馬州。實(shí)生播種繁殖后選育植株生長健壯、主要觀賞形狀優(yōu)良的區(qū)系,經(jīng)連續(xù)3 a對,秋色葉性狀觀察,初選出變異單株,經(jīng)嫁接繁殖培育,逐步形成區(qū)試群體。北美楓香“秋霞紅”2013年通過江蘇省林木品種審定委員會(huì)認(rèn)定,林木良種編號蘇R-SV-LS-010-2013。

    北美楓香以傳統(tǒng)的繁殖方法如播種、扦插等繁殖為主[1-5]。北美楓香“秋霞紅”系選育的林木新品種,數(shù)量少,為保持新品種的優(yōu)良性狀,并在短期內(nèi)獲得大量植株,本文對該新品種組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了探索,試圖加快繁殖,滿足園林綠化市場、美麗中國建設(shè)需求。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)選擇經(jīng)過篩選優(yōu)良單株生長健壯的當(dāng)年生枝條新稍。

    1.2 外植體滅菌

    采用經(jīng)選育的北美楓香‘秋霞紅’春季萌發(fā)的新稍為外植體,然后將選取的外植體剪切成長3~5 cm的小段,經(jīng)70%酒精消毒35 s,然后置于消毒液中。消毒液分別采用A1:17%的H2O2;A2:0.1% HgCl2;A3:10%Ca(ClO)2;消毒時(shí)間分別采用B1:10 min;B2:12 min;B3:14 min,隨機(jī)區(qū)組排列,表面消毒后用無菌水沖洗3~5次,瀝干水后迅速將帶腋芽的莖段接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,每瓶接1個(gè),每次20瓶,每組重復(fù)3次,30 d后統(tǒng)計(jì)污染率、死亡率和成活率。

    1.3 植物生長調(diào)節(jié)劑正交培養(yǎng)試驗(yàn)

    誘導(dǎo)的無菌芽長至1 cm左右時(shí),切下接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以2/3 MS為基本培養(yǎng)基,選定TDZ 0.1,0.2,0.4 mg/L、BA 0.5,1.0,2.0 mg/L、IBA0.05,0.1,0.2 mg/L 3種植物生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),接種培養(yǎng)30 d時(shí)觀測試管苗增殖倍數(shù)和生長高度。

    1.4 VC質(zhì)量濃度與封口材料處理試驗(yàn)

    在不同質(zhì)量濃度的VC處理減輕試管苗褐變試驗(yàn)中,采用15,25,35,45 mg/L 4個(gè)質(zhì)量濃度梯度,不加VC為對照(CK);透氣性對試管苗玻璃苗影響的試驗(yàn)中,采用透氣封口膜,規(guī)格為4孔(12 cm×12 cm)與封閉封口膜為材料進(jìn)行培養(yǎng),具體試驗(yàn)為:處理Ⅰ:培養(yǎng)瓶封閉式封口材料;處理Ⅱ:培養(yǎng)瓶透氣式封口材料。上述試驗(yàn)培養(yǎng)基均為2/3 MS+TDZ 0.2 mg/+BA 1.0 mg/L+I(xiàn)BA 0.1 mg/L,瓊脂用量0.7%,pH5.8。

    1.5 生根培養(yǎng)

    試管苗生根培養(yǎng)基試驗(yàn)是將生長健壯的北美楓香‘秋霞紅’試管苗,接種在1/3MS附加不同質(zhì)量濃度的生長素NAA,IBA以及不同質(zhì)量濃度的活性炭(AC)配比的培養(yǎng)基上,進(jìn)行生根培養(yǎng)。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)的方案[5],觀察根的分化過程,調(diào)查生根數(shù)、根長、生根率等指標(biāo),選擇最佳生根培養(yǎng)基。每處理20瓶,每瓶5個(gè)芽苗。

    1.6 組織培養(yǎng)苗移栽管理

    試管苗移栽試驗(yàn)是將已生根的試管小苗,移栽于泥炭:黃心土為6∶4,5∶5,7∶3(V∶V)3種混合基質(zhì)中,控制環(huán)境溫度25~30℃,相對濕度85%~90%,保濕、遮蔭20,35 d后統(tǒng)計(jì)成活率。

    上述除有說明外,所有培養(yǎng)基均加入3%的蔗糖和0.7%卡拉膠,pH值5.8,培養(yǎng)室溫度為26~28℃,光照度2 000 lx左右,光照時(shí)間13 h/d。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 消毒方法對北美楓香‘秋霞紅’外植體消毒效果的影響

    消毒藥劑和消毒時(shí)間對外植體滅菌效果試驗(yàn)結(jié)果(見表1)表明:處理間、消毒劑、消毒時(shí)間及消毒藥劑與消毒時(shí)間的滅菌效果差異顯著。說明北美楓香‘秋霞紅’外植體滅菌應(yīng)考慮消毒時(shí)間和消毒藥劑才有助于提高成活率。本試驗(yàn)以A2B3處理效果最好,即0.1%HgCl2消毒12 min的成活率達(dá)78.7%。

    2.2 植物生長調(diào)節(jié)劑正交組合對北美楓香‘秋霞紅’試管苗生長的影響

    植物生長調(diào)節(jié)劑正交組合對北美楓香‘秋霞紅’試管苗生長的影響試驗(yàn)結(jié)果(見表2)表明,TDZ與BA質(zhì)量濃度是決定試管苗增殖主要因子,由極差數(shù)據(jù)分析得知,TDZ的作用最大,其極差值最大,其次為BA,影響最小的是IBA。組合5的芽苗增殖與生長效果最好,增殖倍數(shù)達(dá)4.5,生長高度為3.8 cm,且試管苗生長較壯;組合7和組合8,芽苗增殖倍數(shù)雖也較大,但其芽苗生長高度大大下降,芽苗生長弱,葉形不正常,莖細(xì)弱,出現(xiàn)褐變苗。所以,北美楓香‘秋霞紅’芽苗增殖最佳組合為2/3 MS+BA 1.0 mg/L+TDZ 0.2 mg/L+I(xiàn)BA 0.1 mg/L+蔗糖3.0%。

    表1 不同消毒劑種類和不同消毒時(shí)間對外植體消毒的影響

    表2 北美楓香‘秋霞紅’增殖的正交試驗(yàn)結(jié)果直觀分析

    2.3 VC質(zhì)量濃度與封口材料處理對北美楓香‘秋霞紅’試管苗生長影響

    從不同質(zhì)量濃度的VC對北美楓香‘秋霞紅’試管苗褐變及其生長的影響(見表3)可看出,在供試質(zhì)量濃度范圍內(nèi),褐變苗發(fā)生率隨VC質(zhì)量濃度的增加顯著降低,且各處理間差異顯著。其中對照(CK)和處理1即VC的質(zhì)量濃度為15 mg/L時(shí),褐變苗發(fā)生率極顯著高于其他處理,處理2也具有較多的褐變產(chǎn)生。較高質(zhì)量濃度的VC處理可減少褐變的發(fā)生,處理3,4差異不顯著而且生長情況類似,故可選VC35 mg/L作為繼代培養(yǎng)適宜的質(zhì)量濃度,采用處理3較為經(jīng)濟(jì)。

    表3 不同VC質(zhì)量濃度對北美楓香‘秋霞紅’組織培養(yǎng)苗褐變及其生長的影響

    培養(yǎng)容器內(nèi)的濕度和透光率等因素直接影響試管苗的生長,封口材料透氣性不同造成培養(yǎng)物所處的微環(huán)境差異。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):處理Ⅰ玻璃苗率為

    28.38%,處理Ⅱ?yàn)?2.43%,處理3,4玻璃化苗率較低。說明處于封閉狀態(tài)下,容器內(nèi)部微環(huán)境濕度大,氣體缺乏交換,不利試管苗的健壯生長,容器內(nèi)生長的芽苗細(xì)弱,葉色淺。用透氣膜為封口材料,由于具有良好的透氣性,降低了微環(huán)境中的濕度,利于試管苗呼吸交換,容器內(nèi)生長的芽苗葉色濃綠、健壯。

    2.4 北美楓香‘秋霞紅’試管芽苗生根培養(yǎng)基篩選

    將經(jīng)壯苗培養(yǎng)長至高為2~3 cm的北美楓香‘秋霞紅’試管芽苗,接入生根培養(yǎng)基試驗(yàn),生根培養(yǎng)12 d后,基部出現(xiàn)愈傷組織,16 d后可見基部分化出許多根點(diǎn),20 d后則生長白色小根,30 d后統(tǒng)計(jì)結(jié)果并直觀分析,結(jié)果見表4。

    表4 北美楓香‘秋霞紅’生根正交試驗(yàn)結(jié)果的直觀分析

    從表4結(jié)果表明,對北美楓香‘秋霞紅’生根影響最大的是IBA,其次是NAA,AC的質(zhì)量濃度。配方5與配方6的生根率分別達(dá)到92%和91%,但從平均根長和平均根數(shù)來看,配方5∶1/3 MS+I(xiàn)BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 3 000 mg/L為最佳生根培養(yǎng)基。

    2.5 北美楓香‘秋霞紅’組織培養(yǎng)苗的移栽

    移栽試驗(yàn)結(jié)果表明,在相同條件下,基質(zhì)對北美楓香‘秋霞紅’試管苗移栽成活有影響。成活所需時(shí)間,成活率都有明顯差異。泥炭、黃心土配比為7∶3(V∶V),成活所需時(shí)間30 d,成活率到90.8%,為最佳配比的混合基質(zhì)。

    表5 2種基質(zhì)配比對北美楓香‘秋霞紅’試管苗移栽成活的影響

    3 小結(jié)與討論

    (1)本試驗(yàn)采用0.1%HgCl2消毒12 min的滅菌,成活率達(dá)78.7%,效果較好。

    (2)本試驗(yàn)條件下,北美楓香‘秋霞紅’芽苗增殖最佳組合為2/3 MS+BA 1.0 mg/L+TDZ 0.2 mg/L+I(xiàn)BA 0.1 mg/L+VC35 mg/L+蔗糖3.0%。

    (3)添加不同質(zhì)量濃度的VC試驗(yàn)表明,VC可以減輕試管苗褐變的發(fā)生。褐變是由于植物組織中的多酚氧化酶(PPO)被激活,使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化。在褐變過程中,酚類物質(zhì)被氧化后產(chǎn)生醌類物質(zhì),這些物質(zhì)呈棕褐色,并會(huì)逐漸擴(kuò)散到培養(yǎng)基中,抑制其他酸的活性,毒害培養(yǎng)的材料,使組織和培養(yǎng)基變褐甚至變黑。在減輕褐變發(fā)生時(shí)常采用抗氧化劑如VC及活性炭等處理[6-7]。本試驗(yàn)條件下,VC可減輕北美楓香‘秋霞紅’離體培養(yǎng)中褐變的發(fā)生,在本試驗(yàn)的濃度范圍內(nèi),最佳用量為35 mg/L。

    (4)通過不同封口材料培養(yǎng)瓶培養(yǎng)試驗(yàn)表明,試管苗生長效果的差異很大程度上是由于透氣狀況不同引起的。其原因與較高質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素類物質(zhì)導(dǎo)致玻璃化原因類似[8-13]。在封閉狀況下,容器內(nèi)外氣體得不到有效的交換,無法滿足試管苗生長需求,導(dǎo)致玻璃化。采用透氣類型的封口膜,改善了通氣狀況,促進(jìn)了呼吸,使ATP供給較為豐富,滿足了試管苗對ATP以及呼吸代謝產(chǎn)物的要求,試管植株生長健壯。

    (5)本試驗(yàn)條件下,IBA對北美楓香‘秋霞紅’生根影響最大,其次是NAA,AC的濃度。平均根長和平均根數(shù)來看,1/3 MS+I(xiàn)BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 3 000 mg/L為最佳生根培養(yǎng)基。

    (6)北美楓香‘秋霞紅’組織培養(yǎng)苗移栽基質(zhì)以泥炭、黃心土為7∶3(V∶V)較好。溫度控制在23~ 30℃之間,濕度在移栽前后5~7 d控制在92%以上,7 d后控制在85%~90%,30 d即可成活,成活率達(dá)90.8%。

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    Q949.751.4;Q813.1+2

    A

    10.3969/j.issn.1001-7380.2014.05.006

    1001-7380(2014)05-0023-04

    2014-08-10

    江蘇省林業(yè)三新工程項(xiàng)目“北美楓香等新優(yōu)彩色樹種引繁及優(yōu)質(zhì)苗木栽培技術(shù)推廣示范”(LYSX[2013]52)

    何海燕(1977-),女,江蘇揚(yáng)州市人,工程師,大學(xué)本科畢業(yè),主要從事園林綠化工程管理。

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