抗核抗體滴度檢測方案的優(yōu)化和價值

夏志鴻 周潔

貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550001

抗核抗體滴度檢測方案的優(yōu)化和價值

夏志鴻 周潔

貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550001

目的:探討采用間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體滴度的方案優(yōu)化和價值。方法:間接免疫熒光法(IIF)。結果:一種優(yōu)化方案是我們將標本先做1:100的稀釋度，然后再把陽性標本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，ANA滴度結果與標準方案的結果一致。另一種優(yōu)化方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案，ANA滴度結果與標準方案的結果也一致。結論:我們采用的兩種優(yōu)化方案操作都取得了很好的結果，不但減少了很多繁瑣的稀釋操作，也減少了觀察熒光的時間，大大提高了工作效率。另外，ANA試劑和儀器成本高，這兩個方案也可以節(jié)省試劑，提高經濟效益。

抗核抗體(ANA)滴度是指與相同稀釋度的陰性血清相比，剛剛能檢測到特異性熒光反應時的樣品最高稀釋倍數。ANA滴度檢測是一個專業(yè)性很強的工作，必須由有經驗、經過培訓的技術人員或研究人員實施［1］。間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體的滴度是經典的篩選方法。歐蒙推薦的標準稀釋方案為1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是間接免疫熒光法全是手工的方法，操作繁瑣，特別是判讀熒光的結果非常辛苦。如果采用標準的滴度稀釋方法，由于標本量大，每個標本我們都需要做5個稀釋度，而且需要看5個熒光結果，實驗人員的工作量非常大。因此，在保證實驗結果準確性的基礎上。對標準方案進行優(yōu)化，找到一種省時省力的方案很有必要。一種優(yōu)化方案我們采用先做1:100的稀釋度，再把陽性標本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀釋度;另一種優(yōu)化方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200的稀釋度甚至只需做1:100，1:1000的稀釋度。

1 資料與方法

1.1 檢測對象104標本均來自貴陽中二附院的病人以及體檢人群，其中男性41例，女性63例，平均年齡45歲。

1.2 試劑及檢測方法ANA檢測以鼠肝和Hep－2細胞為底物，用IIF測定，試劑盒均來自德國歐蒙醫(yī)學試驗檢測股份有限公司生產。

1.3 檢測方法我們先用標準方案分別進行1:100，1:320，1:1000，1: 3200，1:10000稀釋;一種方案我們采用先做1:100的稀釋度，再把陽性標本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀釋方案;另一種方案則是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案。步驟操作嚴格按照說明書進行。

2.結果見表1－表4

本研究中104例血清檢查結果:表1是標準方案的ANA滴度結果。ANA滴度最終結果為1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1: 3200有12份，＞1:3200有9份。

表2中是第二種方案的ANA滴度最終結果為1:100有12份，1:320 有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200有9份。跟據熒光強度可以推斷出1:320有24份，＞1:3200有9份。

表3中是第三種方案的ANA滴度最終結果為ANA滴度最終結果1: 100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200 有9份。跟據熒光強度可以推斷出1:320有24份，1:3200有12份，＞1: 3200有9份。

表4中，ANA滴度最終結果1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，但是1:3200與＞1:3200的份數與表1有明顯差異。

對表中結果做統(tǒng)計學處理:表1的結果與表2結果、表3結果無明顯差異。表1的結果與表4的結果有明顯差異。

表1 104例血清標本ANA 5個稀釋度的熒光結果

表2 104例血清標本ANA 3個稀釋度的熒光結果

表3 104例血清標本ANA 2個稀釋度的熒光結果

表4 104例血清標本ANA 1個稀釋度的熒光結果

3.討論

自身免疫病發(fā)病率高、臨床表現(xiàn)復雜。幾乎所有的自身免疫病在發(fā)生發(fā)展過程中都會產生自身抗體。自身抗體在自身免疫病的早期診斷、治療及預后評估中起到了重要作用［2］。自身抗體檢測是系統(tǒng)性自身免疫病診治中必不可少的工具。隨著早期診斷、規(guī)范化治療的廣泛開展，自身抗體檢測發(fā)揮的作用也越來越受到重視。

ANA系細胞核內各種蛋白質分子及其復合物(DNA、RNA、堿性組蛋白、非組蛋白、磷脂及各種酶等)為靶抗原的自身抗體的總稱。在眾多的自身免疫性疾病中，細胞核的核仁、核內染色質、非組蛋白以及由RNA和相關蛋白構成的各種核糖核蛋白粒子都可以成為自身免疫反應攻擊的靶子，繼而產生ANA［3］。ANA篩查試驗是針對細胞中的所有抗原成分的總抗體，對自身免疫性疾病有很高的診斷敏感性，所以被認為是此類疾病的首選篩查項目［3］。

IIF法檢測ANA滴度是經典的篩選方法，歐蒙推薦的標準稀釋方案為1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是間接免疫熒光法全是手工的方法，操作繁瑣，特別是判讀熒光非常辛苦。如果采用標準的滴度稀釋方法，在臨床工作中，由于標本量大，每個標本的ANA滴度檢測我們都需要做5個稀釋度而且需要看5個熒光結果，實驗人員的工作量非常大。因此，在保證實驗結果準確性的基礎上。我們對標準方案進行了優(yōu)化。

本研究中104例血清檢查結果:表1是標準方案的ANA滴度結果。表1結果與表2、表3結果無明顯差異。表1結果與表4結果有明顯差異。

因此在有一定臨床經驗的前提下，除了標準方案外，我們采用先做1: 100的稀釋度，再把陽性標本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，也可以有很好的效果。另一種方案則是只需做1:100，1: 1000，1:3200或者只需做1:100，1:1000的方案，根據臨床經驗再判斷結果也完全可行。

我們采用的兩種優(yōu)化方案都取得了很好的結果，不但減少了很多繁瑣的稀釋操作，也減少了很多觀察熒光的時間，大大提高了工作效率。另外，ANA試劑及儀器成本高，這兩個優(yōu)化方案也可以節(jié)省試劑，提高經濟效益。在臨床實際工作中，我們根據實驗室的具體情況，靈活運用。

總之，IIF法檢測ANA滴度是一項復雜和辛苦的工作。我們采用的兩種優(yōu)化方案都能大大減少操作的強度和時間，也能提高經濟效益。

［1］孫爾維.應加強自身抗體檢測的臨床應用與研究.中華風濕病學雜志，2014，4(18):217－219

［2］李雪，賈園.2013年抗核抗體檢測的最新歐美建議.中華風濕病學雜志，2014，5(18):35－358

［3］曹海濤.抗核抗體的實驗室檢測及臨床意義.華北國防醫(yī)藥，2006，4(18):148－149

R446.6

B

1009－6019(2014)09－0167－02