紫外分光光度法測(cè)定荷葉中總黃酮含量

王莉

浙江省長(zhǎng)興縣中醫(yī)院 浙江長(zhǎng)興 313100

紫外分光光度法測(cè)定荷葉中總黃酮含量

王莉

浙江省長(zhǎng)興縣中醫(yī)院 浙江長(zhǎng)興 313100

目的:建立一種測(cè)定荷葉中總黃酮類化合物成分含量的測(cè)定方法。方法:采用紫外分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品，Na2NO2－Al(NO3)3－NaOH為顯色劑，測(cè)定波長(zhǎng)為506nm。結(jié)果:在0.208－1.248mg/ml質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，對(duì)照品蘆丁的吸收度與濃度線性關(guān)系良好，r=0.9995，平均回收率96.86%，RSD=0.71(n=5)。結(jié)論:分光光度法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于準(zhǔn)確測(cè)定荷葉中的總黃酮的含量。

荷葉;紫外分光光度法;總黃酮

Folium Nelumbinis;UV spectrometry;Total Flavonoid

荷葉(Folium Nelumbinis)為睡蓮科蓮屬植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)的葉片。我國(guó)大部分地區(qū)均產(chǎn)。6～7月份花未開(kāi)放時(shí)采收，除去葉柄，曬至七八成干，對(duì)折成半圓形，曬干。亦用鮮葉，或初生嫩葉(荷錢(qián))。荷葉苦、澀，平。歸心、肝、脾經(jīng)。具有清熱解暑，升陽(yáng)，止血。主治暑熱煩渴，頭痛眩暈，脾虛腹脹，大便泄瀉，吐血下血，產(chǎn)后而露不凈，赤游火丹。將荷葉采用扣鍋煅法煅成荷葉炭，增強(qiáng)其收澀及化瘀止血作用，用于多種出血癥?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)也充分表明:荷葉及其炮制品具有抑菌，防止膽囊膽固醇結(jié)石的形成，調(diào)節(jié)血脂，抑制脂肪酶，抗氧化和止血作用［1］。荷葉主要含有黃酮類，蓮堿、原荷葉堿、荷葉堿等多種生物堿類，維生素C，有機(jī)酸，多糖，揮發(fā)油等多種化合物。荷葉主產(chǎn)于湖南、福建、江蘇、浙江、南方各地，可謂分布廣泛，資源豐富。荷葉中黃酮類成分是荷葉的重要活性成分之一，荷葉黃酮將以其資源豐富，價(jià)格低廉，藥用價(jià)值顯著等優(yōu)勢(shì)被人們認(rèn)可，將成為一種非常有應(yīng)用前途的藥物。

1 儀器與試藥

島津UV－2550紫外分光光度計(jì)，電子分析天平，電熱恒溫干燥箱，托盤(pán)天平，超聲波清洗機(jī)，荷葉藥材購(gòu)自浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠，蘆丁(對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)上海試劑二廠)，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 蘆丁對(duì)照品溶液的制備［2］

用電子分析天平精密稱取蘆丁對(duì)照品(120℃常壓干燥至恒重)0.0104 g置于50ml容量瓶中，加少量甲醇溶解，并用甲醇定容至刻度，搖勻后靜置，配成對(duì)照品溶液(蘆丁濃度0.228mg/ml)。

2.2 荷葉供試品溶液的制備［3］

取荷葉絲，烘干并將其粉碎，稱取1g，置具有塞得錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定重量，于40℃超聲清洗機(jī)中提取30min，放冷，并用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾后進(jìn)行離心，制得供試品溶液。

2.3 測(cè)定溶液的制備

取2.2制得的供試液1ml，置于25ml容量瓶中，加蒸餾水至6ml，再加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液1ml，混勻，放置6min;加1mol/l氫氧化鈉溶液10ml，以甲醇定容至25ml，混合均勻，放置15min，得測(cè)定溶液。

2.4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取蘆丁對(duì)照品溶液和供試液各1ml，分別置于25ml容量瓶中，按2.3方法制備對(duì)照品溶液及供試品測(cè)定液。以不加對(duì)照品溶液或供試品的相應(yīng)溶液為空白對(duì)照，在250－700波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行連續(xù)波長(zhǎng)掃描，結(jié)果對(duì)照品及供試品測(cè)定液在450－550nm范圍有最大吸收。故對(duì)450－550nm范圍進(jìn)行進(jìn)一步的連續(xù)波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明對(duì)照品及供試品液均在506nm有最大吸收，故選擇506nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用電子分析天平精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6ml分別置于6個(gè)容量瓶中，按2.3的方法制成測(cè)定液，以不加標(biāo)準(zhǔn)溶液的相應(yīng)溶液作為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)506nm處測(cè)定吸光度值，記錄吸光度值并以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。結(jié)果見(jiàn)圖1

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系考察［4］

本法中，蘆丁在0.208－1.248mg/ml范圍呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=0.43966X－0.00427，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。

2.6.2 重復(fù)性試驗(yàn)

分別稱取5份干燥荷葉樣品，按照2.2及2.3的方法平行制成5份供試液，以不加供試液的相應(yīng)溶液為空白，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄吸光度值，并計(jì)算總黃酮含量及RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

用電子分析天平稱取干燥荷葉1.0018g，按2.2及2.3的方法制成供試液和測(cè)定液，首次測(cè)定后，每隔5min測(cè)定1次，記錄吸光度值(波長(zhǎng)506nm處)，考察其顯色后的穩(wěn)定性。結(jié)果見(jiàn)表2

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6.5 精密度試驗(yàn)

稱取干燥粉碎后的荷葉樣品，按2.2及2.3的方法平行制備5份測(cè)定液，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄吸光度值，并計(jì)算總黃酮含量及RSD值，結(jié)果如表3

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6.6 加樣回收率試驗(yàn)

取精密度試驗(yàn)中一份供試液各0.5ml，分別置于5個(gè)25ml容量瓶中，依次加入蘆丁對(duì)照品準(zhǔn)液2ml，在按2.3的方法制成測(cè)定液，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄吸光度值，并計(jì)算測(cè)定液總黃酮濃度、回收率及RSD，結(jié)果如表4

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

3.1 荷葉是一種資源廣泛，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，藥用價(jià)值顯著的天然原料，采用紫外分光光度法測(cè)定荷葉中總黃酮的含量具有重要意義。

3.2 本實(shí)驗(yàn)采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定絡(luò)荷葉中總黃酮的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，加樣回收率合格，為荷葉中總黃酮的含量測(cè)定提供了一種簡(jiǎn)便可行的方法。

3.3 與高效液相色譜法測(cè)定荷葉中總黃酮含量［5］相比，紫外可見(jiàn)分光光度法含量分析方法的穩(wěn)定性，加樣回收，精密度都不如高效液相色譜法。故在進(jìn)行定量分析時(shí)建議采用高效液相色譜法。

［1］任貽軍，張宏琳.荷葉的藥理作用研究進(jìn)展［A］.湖北:中國(guó)藥業(yè)，2009，(20):75－76.

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1009－6019(2014)09－0009－02

Determination of Content of Total Flavonoid in Folium Nelumbinis by UV spectrometry Abstract:Objective To establish a method for the determination of the content of total flavonoid in Folium Nelumbinis.Methods Rutin standard colored with Na2NO2－Al(NO3)3－NaOH had a maximum absorbance at 506nm by UV spectrometry.Results The absorbency and concentrztion of rutin had good linear in the range of 0.208－1.248mg/ml(r=0.9998)。The average recovery rate was 96.86%，RSD=0.71(n=5).Conclusion The method is easy，highly accurate，reproducible and can be applied to determine total flavonoid in Folium Nelumbinis accurately.